Автореферат (Изменение реактивности организма животных под действием высокомолекулярного полисахаридного комплекса), страница 2

Крушинскому,1986]Животные были разделены на 2 группы: контрольная [n=12],подопытная [n=12], которая получалав/бвысокомолекулярныйполисахаридный комплексв дозе 0,5 мл. Сравнительное изучениереактивности и поведения животных проводили в лабиринте в течении 60минут.Социальное поведение животных оценивали по Л.С. Бондарчуку [1982].В ходе опыта отмечали преодоление мышами барьеров, заглядывание вмежперегородочные отверстия лабиринта и общую активность.Послепроведения опытовживотныхподвергали эвтаназии всоответствии с Хельсинской деклорацией Всемирной медицинской ассоциации[1964],определяли массу внутренних органов и отбирали образцы дляпроведения гистологических исследований.2.Стрессоустойчивость мышей линии «Большой мозг» и «Малый мозг» икрысИсследования проводили на мышах линий «Большой мозг» и «Малыймозг», из них формировали 2 группы для выяснения способности к адаптациина действие стрессоров [звуковые раздражители].Контрольная группа [n = 15] получала 0,5 мл физиологического растворав/б; подопытной группе [n = 15] вводили в/б форвет в дозе 20 мкг.

Животныхпомещали в клетки по 7-8 особей и наблюдали за их поведением, котороеоценивали согласно разработанных тестов [Крушинский Л.В.,1944; БондарчукЛ.С.,1982]. Изменение поведения мышей оценивали посредствомиспользования различной мощности звуковых раздражителей [от 50 до 100 дБ].Выясняли параллелелизм между степенью цефализации и способностьюживотных к формированию разнообразных навыков, а также сложностью ихестественного поведения в экстремальных ситуациях, связанных с влияниемсверхсильных звуковых колебаний.

Способность к адаптации у мышейизучаемых линий оценивали по частоте акта дефекации.6Влияние физической нагрузки и форвета на индивидуальное поведениеэкспериментальных животных оценивали с помощью теста «открытое поле»[Антрошенко О.Н. и др., 1999]. Главным критерием являлась интенсивностьориентировочно-исследовательскойактивности[ОИА]животных,дополнительными критериями – коэффициент подвижности [Кп] иэмоциональная тревожность [ЭТ].

Для изучения влияния ФН на организм крысих помещали в емкость, наполненную водой [°С 24]. Время, отведенное дляплавания в разных группах, определяли с помощью секундомера. Такжеизучали клеточный состав периферической крови в фиксированных метаноломи окрашенных азур-эозином мазках. Функциональное состояние нейтрофиловцельной крови крыс оценивали морфологическим методом. Интенсивностькислородзависимого метаболизма в тесте восстановления нитросинеготетразолия [спонтанный НСТ-тест] определяли по доли активных клеток,содержащих гранулы восстановленного диформазана после 30-минутнойинкубации цельной крови в 0,1% - ном растворе нитротетразолиевого синего[Сhemapol], и индексу активации в перераспределения на один нейтрофил.Фагоцитарную активность нейтрофилов оценивали по фагоцитарному числу –процент фагоцитирующих клеток, и фагоцитарному индексу – среднее числочастиц, поглощенных одной клеткой.

Для общей оценки сопротивляемостиорганизма изучали фагоцитарную активность лейкоцитов крови, котораясвязана с продукцией АФК. С этой целью устанавливали фагоцитарное число ифагоцитарный показатель. Светосумму свечения определяли в сыворотке крови,гомогенатах печени, головного мозга. После эвтаназии у животных проводилимакро–микропрепарирование надпочечников, с целью определения их массы всравниваемых группах животных. Для оценки спонтанной ЛЗ-ХЛ кровииспользовали цельную гепаринизированную кровь. Для этого 0,1 мл кровиразводили в 2 мл физраствора с добавлением 0,1 мл 10-5 мМ раствора люминола.Для стимулирования «кислородного взрыва» в фагоцитах 0,1 мл кровиэкспериментальных животных инкубировали в течение 10 минут при C° 37 с0,01 мл 1% - ной взвеси неопсонизированного зимозана.

Во время регистрациисвечения температуру образцов поддерживали при º С 37. Для оценки влиянияФН на процессы ПОЛ в печени и мозге экспериментальных животныхрегистрировали ХЛ гомогенатов органов, стимулированную 50 мМ растворомсернокислого железа. Навеску исследуемых тканей (1 г) гомогенизировали в 5мл фосфатного буфера [20мМ КН2РО4, 105 мМ KCl, рН - 7,5]. Полученныйгомогенат фильтровали, брали 1 мл пробы, разводили в 20 мл буфера. Дляполучения сыворотки кровь выдерживали 30 мин., центрифугировали при 1500об/мин в течение 15 мин. Затем 0,5 мл полученной сыворотки разводили в 20 млфосфатного буфера. Свечение индуцировали добавлением 1 мл 50 мМ растворасернокислого железа буфера.Хемилюминограммы модельных систем, где генерируются АФК ипротекают процессы ПОЛ, характеризуются спонтанным свечением, быстройвспышкой, латентным периодом и медленной вспышкой [таб.1].

Самымпоказательным и информативным параметром ХЛ является светосумма7свечения [Фархутдинов Р.Р., Лиховских В.А., 1995]. Этапы проведенногоисследования хемилюминесценции приведены в таб.1.1. Этапы проведения ХЛ исследованийНАЗВАНИЕ ИССЛЕДОВАНИЯХАРАКТЕРИСТИКАИССЛЕДОВАНИЙ1. Изучение влияния препарата из Использованы:лекарственныхрастенийна форветофициальныйпрепарат,свободно-радикальное окисление в изготовленный из ростков картофеля.модельных системах (генерирующиеАФК, имитирующие ПОЛ): крови,гомогената печени.2.Исследованиевлияния -поведенческиереакции:лекарственного препаратана ориентировочнаяактивность,экспериментальныхживотных, коэффициентподвижности,родившихся от выживших после эмоциональная тревожность;ПГВ-2 матерей.- морфологическое изучение печени,Оценкаморфофункционального почек, легких, селезенки, желудка.состояния органов и свободно- Изготовление срезов для оценкирадикального окисления в крови, характерагистологическихигомогенатах печени.гистохимических изменений в органах.- определение хемилюминесценциицельной крови и печени, определениеактивных форм кислорода.Исследование хемилюминесценции сыворотки кровиИсследование хемилюминесценции крови и гомогената печени проводилисогласно методическим рекомендациям [Фархутдинов Р.Р., Лиховских В.А.,1995].

Взятую кровь выдерживали 30 мин при комнатной температуре,центрифугировали при 1500 об./мин. в течение 15 мин. с целью получениесыворотки. 0,5 мл приготовленной сыворотки, разводили в 20 мл солевогобуфера [2,72 г KH2PO4, 7,82 г KCL, 1г цитрата натрия C6H8O7Na3 • 5,5H2O на 1литр дистиллированной воды]. Величину рН полученного раствора доводилидо 7,45 ед. титрованием насыщенного раствора КОН [фосфатный буфер +цитрат натрия] и помещали в кюветную камеру прибора.

Программа«СЫВОРОТКА» или «ПЛАЗМА» [«Мешалка - быстро», «Термостат выкл.»,«Время измерения 5 мин»]. Свечение индуцировали добавлением 1 мл 50 мМраствора FeSO4 • 7H2O, ускоряющего процессы ПОЛ.3.Устойчивость мышей линии БМ и ММ к гипоксииЭтот фрагмент исследований проведен на мышах линии «Большоймозг» [n = 40] и «Малый мозг» [n = 40], массой 17-18 г. Из экспериментальныхживотных каждой линии формировавали по 4 группы: 1 – [n = 10] служилаконтролем, животным внутрибрюшинно вводили 0,5 мл дистиллированнойводы, животным 2 группы [n = 10] высокомолекулярный полисахаридныйкомплекс в дозе 0,5 мл, в/б, 3 группа [n = 10] - получала раствор форвета в/м; 4группа [n = 10] - раствор форвета п/к; 5 группа [n = 10] - получала растворкофеина 0,2 мл, п/к; животным 6 – ой группе [n = 10] инъецировали8сульфокамфокаин в дозе 0,2 мл, п/к.

Гипоксию вызывали путем откачиваниявоздуха насосом Комовского из-под стеклянного колокола, соединенного сманометром, при давлении (-0,1 атм). Погибших животных, подвергавшихсягипоксии, вскрывали, и определяли массу внутренних органов.4.Цитопротективный эффект высокомолекулярного полисахаридногокомплексаМышей – матерей линии «Малый мозг» и «Большой мозг» на базеинститута вирусологии подвергали заражению вирусом ПВГ-2, от выжившихособей получали потомство, при достижении мышами массы тела 17-19 г ихиспользовали для проведения эксперимента. Каждая группа включала по 30особей. Животным внутрибрюшинным способом вводили форвет, объем иколичество вводимого вещества соответствовало рекомендациям автороводнократно из расчета 0,20 мкг [Кущ А.А., Климов Р.Р., Козлов А.Ю., ГалеговГ.А., Стовбун С.В.

и др., 2008].Статистическую обработку данных проводили при помощиобщепринятых методов с оценкой достоверности полученных результатовисследований по трем порогам вероятности и критериям достоверности поСтьюденту. Для достижения данных целей использовали пакет программ «MSExel» для компьютера «Pentium -4».РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХОБСУЖДЕНИЕПолученные данные показывают, что реактивность мышей линии«Малый мозг» и «Большой мозг» существенно изменяется при помещении их вкамеру с лабиринтом. Поведение животных контрольной группы в течение 60минут эксперимента существенно не отличалось от нормы: за исключением 1– 2 особей они спокойны, преодолевают без усилий перегородки иперемещаются в соседние камеры.

Рефлекс «что такое» выражен слабо,несколько мышей заглядывают в межперегородочные отверстия, с 22 – ой по60 – ю минуту несколько особей было обнаружено в 3 камере.Познавательные установки для животных подопытной группы, после введенияфорвета, решались быстрее и инвариативнее. Препарат существенно изменяетих поведение и активность. Это нашло подтверждение в опыте по оценкеспособности мышей к экстраполяции направленного движения к пищевомустимулу [по Крушинскому Л.В., 1986]. Для этого животных помешали в 1отделение лабиринта, предлагали обнюхатьсыр, а затем переносилизигзагообразно в 5 отделение. Эксперименты показали, что мыши линии«Большой мозг» и «Малый мозг» в разное время находят пищевойраздражитель и его поедают.