Автореферат (Функциональное состояние клеток при действии ультразвуковых волн (биохимические и физиологические аспекты)), страница 6

Ядра содержат зернистость или, наоборот, вакуолизированы. Окраска ядер и ЦП неЭффектоднородна, неспецифична. Гемолиз. Тромбоциты разного размера.от 3 до 4от 10 доот 11 до 2021±3 (лизис, аг- от 20 до 21800 Гц, 15 с(тениот 2 до 420 (тениот 14 до 16(тени клеток)регация)(тени клеток)клеток)клеток)Эффект Клетки в группах, лизис ядер и клеточных стенок.414 (лиот 3 до 34от 2 до 73 до 25 (карио900 Гц, 30 с0(кариолизис и казис(агрегация,0(фрагменты малых)рексис)риорексис)клеток)лизис)Эффект Все клетки в мазке; гемолиз эритроцитов.900 Гц, 45 с Лизис ядер, ЦПМ и ЦП лейкоцитов; изменено почти 100% клеток, тени клеток; гемолиз.Повышение времени инсонации — анизоцитоз, пойкилоцитоз.от 0 до 3 (лизис.от 2 доИдентифицировать16сложно)10 Гц, 15 с3.3±0.2(началолизисаЦПМ)10 Гц, 30 сот 0 до 2(все клетки в (лизисмазке)ЦПМ)0.3±0.1 (началолизиса ЦПМ)7.3±0.237±4—от 2 до3от 7 до 18(агрегация)——1.0±0.5(начало1.0±0.5 (начало900 Гц, 15 с5.1±0.323±517±2лизисализиса ЦПМ)ЦПМ)Эффект Проницаемость ЦПМ эритроцитов, изменение ядер лейкоцитов.от 2 доот 48 до 55900 Гц, 30 с——3от 37 до 46(агрегация)(лизис)Эффект Лизис ЦПМ эритроцитов и ядер лейкоцитов.24±3 (в основном10 Гц, 15 с1.0±0.51.0±0.54.6±0.219±2средние и малые)Эффект Вспенивание ядер гранулоцитов, деформация лейкоцитов.4.1±0.243±6 (началолизиса ЦПМ)от 6 до 11от 2 до 5 (дегене(агрегация,ративные измеразрывнения)ЦПМ)14.1±0.539±5 (началолизиса ЦПМ)от 2 до 5(лизис)от 1 до 3(лизис)15.4±0.535±4Примечание: синим цветом (2 группа): животные со смешанной инвазией бабезиоз и дирофиляриоз;оранжевым цветом (3 группа): животные с бабезиозом; зелёным цветом (4 группа): животныес дирофиляриозом25а) Микрофилярия(контроль).б) Микрофилярияи группа лейкоцитовс разрушениями разнойстепени выраженностипосле действия УЗ.ISATA = 0.4 Вт/см2,νм = 10 Гц, tэксп = 30 с.в) Клетки крови собаки после 30 с обработки ISATA = 0.4 Вт/см2, νм = 900 Гц.1.

Разрыв ядра, 2. Разрыв ЦП.г) Вакуолизацияэритроцитов в УЗполе (0.4 Вт/см2,10 Гц, 30 с).Рисунок 9. Мазки крови инвазированных животных. Увеличение 1000, иммерсияРисунок 10. Клетки крови собаки после 15 с обработки УЗ, νм = 900 Гц: 1. Юный нейтрофил безразрушений, 2. Группа из юных нейтрофилов и деформированного лимфоцита, 3, 4. Лизис сегментоядерных нейтрофилов. Справа: эритроциты больной бабезиозом собакиПосле инсонации крови собак со смешанной инвазией выявлено изменениеформы эритроцитов и их структуры. Гемолиз эритроцитов при УЗ обработке кровиживотных с дирофиляриозом наступал через 25 с; бабезиозом — через 30 с, со смешанной инвазией — через 18–20 с.

Цитолиз начинался на 10-й секунде облучения,что осложняло идентификацию (рисунок 10 слева). В пробах крови животных с моноинвазиями (D. repens или B. canis) — после 15-секундной УЗ обработки (в контроле — после 30 с и дольше). Разрушение начиналось с клеток, содержащих внутриклеточных паразитов.

У нейтрофилов происходили последовательно вакуолизация и лизис цитоплазмы, деформация ядер и кариорексис. Количество сегментоядерных нейтрофилов сокращалось в 1.5–2.4 раза, а число юных и палочкоядерныхсоставляло до 50% от общего числа лейкоцитов. Молодые и незрелые клетки, как26и в крови собак с моноинвазиями, разрушались последними (таблица 6 на с. 25; рисунок 10). Во всех мазках крови, обработанной УЗ, в поле зрения микроскопа обнаружено большое количество тромбоцитов разного размера.

По нашему мнению,это следствие УЗ воздействия, но, возможно, и влияние процесса двойной инвазии.После действия на пробы крови модулированным УЗ активность ЩФ, АсАТи АлАТ возрастала в 3 и более раз.ИЗМЕНЕНИЕ АКТИВНОСТИ ФЕРМЕНТОВ КРОВИ В РЕЗУЛЬТАТЕ УЛЬТРАЗВУКОВОГОВОЗДЕЙСТВИЯПеред определением активности ферментов в плазме крови УЗ воздействиюподвергали образцы цельной крови, а после отделения клеток проводили биохимический анализ плазмы.

Активность сывороточных ферментов измеряли после облучения сыворотки крови тех же животных.Активность АлАТ сыворотки крови всех животных при воздействии модулированным УЗ в основном увеличивалась или примерно была равна К, за исключением отдельных значений, МЕ/л: падение у кошек при 0.4 Вт/см2, 20 Гц до(17±4); у собак при 0.2 Вт/см2, 200 Гц до (5±2); при 0.4 Вт/см2, 60 Гц в 2 разаи 80 Гц в 6 раз; при 0.7 Вт/см2, 10–50 Гц до (8±2).Активность АсАТ кошек на всех режимах воздействия также в основном возрастала.

У собак отмечали колебания активности, часто на уровне контрольных величин. Ферментативная активность (p < 0.05) увеличивалась при воздействии УЗс параметрами 0.4 Вт/см2, 800–900 Гц (92±3) МЕ/л. У лошадей отмечали повышение при воздействии в режиме 0.2 Вт/см2, 200 Гц (397±11) МЕ/л.Активность КК (p < 0.05) у кошек повышалась при действии УЗISATA = 0.7 Вт/см2, νм = 10–20 Гц в 1.6 раза, понижаясь либо оставаясь на уровнеконтроля в остальных случаях. У собак уровень активности КК был близок к контрольному, повышаясь при 0.4 Вт/см2, 50 Гц до 217±4 мкмоль/л.

Активность ККв сыворотке крови лошадей в большинстве случаев увеличивалась, максимально — на 106±4 мкмоль/л (при 0.2 Вт/см2, 200 Гц). Достоверного уменьшенияне установлено.Активность ЛДГ в сыворотке крови кошек увеличивалась при воздействиичастотой 800 Гц при ISATA 0.4 Вт/см2 на 50±5 и при 0.7 Вт/см2 в 2 раза. Воздействиеинтенсивностью 0.4 Вт/см2 при 80, 400 и 800 Гц увеличивало активность ЛДГ у собак на 100–140 МЕ/л. Падение активности установлено при экспозиции0.05 Вт/см2, 800 Гц и 0.2 Вт/см2, 1000 Гц на 30±3 МЕ/л. У лошадей на всех режимахактивность ЛДГ повышалась, минимум на ≈ 76 и до ≈ 172±5 МЕ/л.27Изменения уровня активности щелочной фосфатазы у лошадей, наоборот, неустановлено ни на одном из режимов воздействия.

У кошек активность ЩФ возрастала или была близка к контрольной, понижение наблюдали только в одномслучае (0.7 Вт/см2, 10–50 Гц). У собак активность ЩФ находилась на уровне контрольной с незначительными отклонениями, за исключением заметного повышения после воздействия 0.4 Вт/см2 частотой модуляции вблизи 80 Гц — до29±3 МЕ/л. Активность ЩФ плазмы после обработки модулированным УЗ интенсивностью 0.05 – 1.0 Вт/см2 крови лошадей была близка или превышала контрольна 10–17%.Активность АлАТ в плазме крови кошек увеличивалась (p < 0.05). Лишьв двух случаях отмечали понижение, наибольшее (на 59±2 МЕ/л) при 0.4 Вт/см2,вблизи 30 Гц. У собак активность в основном сохранялась близко к контрольнойвеличине или увеличивалась, в том числе значительно (на 41±5 МЕ/л, при0.4 Вт/см2, 800–900 Гц). У лошадей нижняя граница активности АлАТ в кровив референтных рядах составляет ≈ 2.7 МЕ/л [Кирк Р., 2005].

Поэтому на уровнеконтроля 8 МЕ/л можно отметить (p < 0.05; относительная погрешность — не более 1%) только значительное падение — до 1.0 МЕ/л (при 0.05 Вт/см2, 500 Гц; 0.4и 1.0 Вт/см2, 10 Гц) — либо возрастание активности — до 19 МЕ/л (0.2 Вт/см2,20 Гц).Активность АсАТ плазмы крови МДЖ повышалась почти на всех режимах;лишь при 0.7 Вт/см2 (10–20 Гц) установлено понижение у собак на 27±2 %. У лошадей активность сохранялась на уровне контроля или превышала его. Исключение — понижение более, чем на 200 МЕ/л (p < 0.05), при 1.0 Вт/см2, νм = 20 Гц.Повышение активности КК у кошек (p < 0.05) происходит после обработкиУЗ в трёх режимах: 0.05 Вт/см2, νм = 70–80 и 800 Гц; 0.4 и 0.7 Вт/см2, νм = 800 Гц.У собак практически при всех режимах воздействия активность значительно повышена; исключением послужили режимы 0.05 Вт/см2, 800 Гц (падение на≈ 170 МЕ/л) и 0.7 Вт/см2, 50 Гц (на ≈ 55 МЕ/л).

У лошадей влияние инсонации разнонаправленное. Наибольшим было уменьшение активности на ≈ 122±4 МЕ/л при0.4 Вт/см2, 20 Гц; увеличение — на ≈ 100±5 МЕ/л при 0.2 Вт/см2, 10 Гц.Значительного понижения активности ЛДГ (p < 0.05; относительная погрешность — не более 5%) в плазме крови кошек не было отмечено; после УЗ воздействия 0.7 Вт/см2, 800 Гц активность возрастала на ≈ 35 МЕ/л. У собак установлено понижение активности в двух случаях — на ≈ 90 МЕ/л (0.4 Вт/см2, 30 Гц)28и ≈ 60 МЕ/л (0.7 Вт/см2, 800 Гц). При остальных параметрах УЗ активность повышалась, в том числе: на ≈ 360 МЕ/л (0.2 Вт/см2, 10–20 Гц), на ≈ 260 МЕ/л(0.05 Вт/см2, 800 Гц), на ≈ 215 МЕ/л (0.4 Вт/см2, 40 Гц).Уровень активности ЩФ плазмы крови кошек (p < 0.05) повышался при всехрежимах УЗ обработки.

У собак установлено и возрастание, и сохранение активности на контрольном уровне, и значительное понижение активности (на ≈ 35 МЕ/лпосле инсонации 0.7 Вт/см2, частотой 800 Гц). Максимальное повышение активности —на ≈ 200 МЕ/л после интенсивности 0.05 Вт/см2 и νм = 800 Гц.Эти изменения свидетельствуют о видовой чувствительности собак, кошек илошадей к воздействию УЗ.ВИДОВЫЕ ОСОБЕННОСТИ ИЗМЕНЕНИЯ ФЕРМЕНТАТИВНОЙ АКТИВНОСТИАнализ результатов влияния УЗ на активность ферментов гомеостаза здоровых особей МДЖ и лошадей показал, что воздействие от 60 c и дольше непрерывным УЗ интенсивности 0.4–0.7 Вт/см2 (p < 0.05) вызывало увеличение активностиЩФ и ЛДГ плазмы крови кошек; АсАТ, КК, ЩФ и ЛДГ — плазмы крови собак;и активности АсАТ, КК и ЩФ — плазмы крови лошадей. Уменьшение активностивыявлено после обработки плазмы крови собак (АлАТ) и лошадей (АсАТ, ККи ЛДГ).Однонаправленное сочетанное изменение активности ферментов плазмыкрови кошек установлено (p < 0.05) при интенсивности 0.7 Вт/см2: увеличение активности ЩФ и ЛДГ в 2 раза после воздействия непрерывным УЗ, а также с наложением модуляции 800 Гц.

Одновременного понижения активности несколькихферментов в сыворотке крови кошек при всех применённых режимах не происходит.Сочетанное изменение активности ферментов плазмы крови собак установлено после воздействия непрерывным УЗ интенсивностью 0.4 Вт/см2: увеличениеактивности АсАТ, КК, ЩФ и ЛДГ от 1.6 (АсАТ) до 2.7 раз (ЛДГ);Разнонаправленное изменение активности ферментов плазмы крови лошадейустановлено при обработке непрерывным УЗ. Диапазон интенсивности 0.4–0.7 Вт/см2 инициирует понижение активности АлАТ (в 1.5 раза) и подъём активности остальных ферментов — АсАТ, КК, ЩФ, ЛДГ — от 1.6–1.75 до 2.6 раз (ЛДГ).Угнетение в 1.3 раза активности одновременно КК и ЛДГ можно вызвать УЗ облучением 1.0 Вт/см2.