Диссертация (Имидазолиевые ионные жидкости в качестве экстрагентов, модификаторов кварцевого капилляра и хиральных селекторов в капиллярном электрофорезе), страница 9

Затем раствором солянойкислоты или гидроксидом натрия доводили рН до требуемого и добавлялидистиллированную воду до объема 1 мл. Далее вносили 1000 мкл ионнойжидкости C6MImNTf2 и ставили на 1 час в шейкер при температуре 30 0С (табл.8).Таблица 8.

Степени извлечения (%) аминокислот (25 мкг/мл) в ионнуюжидкость С6MImNTf2 в зависимости от рН водной фазы (n=3, p=0.95).АминокислотаDOPATyrTrp1.6±0.195±593±699±13.0±0.280±576±593±6Значение рН водной фазы4.0±0.25.0±0.239±417±344±421±364±529±46.0±0.28±210±212±27.0±0.22±13±15±1II.3.2. Экстракция кортикостероидов в ионные жидкостиII.3.2.1. Жидкостно-жидкостная экстракция кортикостероидов вионные жидкости С6MImNTf2, С6MImBF4, С8MImBF4.В пробирки типа Эппендорф вносили 5 мкл стандартных растворовкортикостероидов,980мклдистиллированнойводыитщательноперемешивали.

Затем добавляли 100, 250, 500, 1000 мкл ионной жидкости иставили на 1 час в шейкер при температуре 30 0С.Степени извлечения аналитов оценивали по формуле (3) (табл. 9).68Таблица 9. Степени извлечения (%) кортикостероидов (5 мкг/мл) в ионныежидкости при разном соотношении фаз ИЖ:вода (n=3, p=0.95).Гормон1:10Кортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)17±251±575±676±6Кортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)36±462±670±678±6Кортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)53±542±494±695±5Соотношение фаз ИЖ:вода, объемн.1:41:2C6MImNTf231±441±571±789±888±794±688±794±6C6MImBF475±786±686±795±591±596±495±597±3C8MImBF493±695±596±497±397±398±297±398±21:159±797±398±298±294±598±298±298±297±398±298±298±2II.3.2.2. Жидкостно-жидкостная экстракция кортикостероидов вионную жидкость С8MImBF4 с добавкой циклодекстринов в водную фазуВ пробирки типа Эппендорф вносили 5 мкл стандартных растворовкортикостероидов, добавляли 100, 200, 400, 800 мкл 10 мМ раствора βциклодекстрина (β-ЦД) или его производного (ГП-β-ЦД), доводили объем до 1мл дистиллированной водой, тщательно перемешивали.

Вносили в виалу 100мкл ионной жидкости и ставили на 1 час в шейкер при температуре 30 0С (табл.10).69Таблица 10. Степени извлечения (%) кортикостероидов (5 мкг/мл) в ионнуюжидкость C8MImBF4 с добавкой β-циклодекстрина или его производного вводной фазе (n=3, p=0.95).ГормонКортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)053±542±494±695±5Кортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)053±542±494±695±5Концентрация β-ЦД в водной фазе, мМ12428±313±21±128±323±320±380±756±653±587±779±771±7Концентрация ГП-β-ЦД в водной фазе, мМ12420±316±310±256±652±649±563±659±655±686±678±570±681±115±248±560±686±244±550±565±6II.3.2.3.

Обратная экстракция кортикостероидов из ионной жидкостиС8MImBF4 в водную фазу с добавкой циклодекстриновВ пробирки типа Эппендорф вносили 5 мкл стандартных растворовкортикостероидов,980мклдистиллированнойводыитщательноперемешивали. Затем добавляли 1000 мкл ионной жидкости и ставили на 1 час вшейкер при температуре 30 0С. Затем водную фазу отделяли от органическойпутем декантации.В стеклянные виалы вносили 250, 500, 750, 1000 мкл 10 мМ раствора βциклодекстрина или его гидроксипропилпроизводного, доводили объем до 1 млдистиллированнойводой,тщательно перемешивали.Полученныетакимобразом растворы вносили в виалу, содержащую органическую фазу, и ставилина 1 час в шейкер при температуре 30 0С (табл.

11).70Таблица 11. Степени извлечения (%) кортикостероидов (5 мкг/мл) из ионнойжидкости С8MImBF4 в водную фазу с добавкой β-циклодекстрина и егогидроксипропилпроизводного (n=3, p=0.95).ГормонКортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)ГормонКортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)00±10±10±10±100±10±10±10±1Концентрация β-ЦД в водной фазе, мМ2.55.07.55±16±26±22±14±24±23±13±13±14±25±26±2Концентрация HP- β-ЦД в водной фазе, мМ2.55.07.55±16±26±23±14±24±23±13±13±15±27±28±210.07±24±24±27±110.08±24±24±29±2II.3.3.

Дисперсионная жидкостно-жидкостная микроэкстракциястероидных гормонов с участием ионной жидкости С8MImBF4В мерные пробирки вместимостью 10 мл вносили 5 мкл рабочихрастворов (100 мкг/мл) кортикостероидов, и доводили дистиллированной водойдо 5 мл. К пробе шприцем прибавляли 1 мл органического растворителя(метанол, ацетонитрил, ацетон), содержащего 100 мкл С8MImBF4. Содержимоепробирки встряхивали 1 мин и выдерживали 10 мин в ультразвуковой ванне.Разделение дисперсной системы проводили центрифугированием в течение 15мин при 4000 об/мин. Оценку степеней извлечения проводили по формуле (3) сучетом разбавления (табл. 12).Для оценки влияния объема диспергатора на степени извлечениястероидных гормонов к пробе шприцем прибавляли 100, 250, 500, 1000, 1500,мкл ацетона, содержащего 100 мкл С8MImBF4 (табл.

13). Для оценки влиянияобъема С8MImBF4 на степень извлечения кортикостероидов к пробе шприцемприбавляли 500 мкл ацетона, содержащего 50, 100, 150, 200, 250 мкл С8MImBF471(табл. 14). Затем содержимое пробирки подвергали процедурам, описаннымвыше.Таблица 12. Степени извлечения (%) стероидных гормонов в ионную жидкостьС8MImBF4 в процессе дисперсионной микроэкстракции с использованиемразличных диспергаторов (n=3, p=0.95).АналитКортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)Метанол33±338±451±651±6Ацетонитрил50±544±562±765±6Ацетон57±658±682±784±8Таблица 13.

Степени извлечения (%) стероидных гормонов в ионную жидкостьС8MImBF4 в зависимости от добавленного объема ацетона (n=3, p=0.95).АналитКортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)100 мкл11±28±246±548±5250 мкл42±546±569±777±7500 мкл62±664±687±789±81000 мкл57±658±682±784±81500 мкл31±538±661±759±7Таблица 14.

Степени извлечения (%) стероидных гормонов в ионную жидкостьС8MImBF4 в зависимости от ее объема (n=3, p=0.95).АналитКортизол (F)Кортизон (E)Кортикостерон (B)11-Дезоксикортизон (S)50 мкл13±217±331±431±4100 мкл62±664±687±789±7150 мкл68±772±789±791±6200 мкл69±774±786±692±5250 мкл73±778±787±792±672II.4. Пробоподготовка образцов мочиII.4.1. Пробоподготовка образцов мочи для электрофоретическогоопределения аминокислотВ пробирку типа Эппендорф отбирали 1 мл мочи, вносили с помощьюдозатора 100 мкл 1 М раствора соляной кислоты.

Тщательно перемешивали идобавляли 750 мкл ионной жидкости C6MImNTf2. Смесь помещали в шейкер на1 час при температуре 30 0С. Затем центрифугировали в течение 3 мин (3000об/мин). Отбирали нижний слой. Для обратной экстракции аминокислот вводную фазу добавляли 1 мл 0.3 М боратного буферного раствора (рН=9.3),ставили в шейкер на 1 час при температуре 30 0С. Далее центрифугировали,отбирали водную фазу и высушивали под вакуумом масляного насоса.Полученный остаток растворяли в 0.25 мл 0.1 М раствора соляной кислоты иподвергали электрофоретическому анализу.II.4.2. Пробоподготовка образцов мочи для электрофоретическогоопределения катехоламиновПроцедура пробоподготовки мочи основана на ранее описаннойметодике сорбционного концентрирования с применением оксида алюминия[179] с некоторыми модификациями.К 5 мл образца мочи добавляли в качестве антиоксиданта 1.2 мл 50 мМраствора Na2ЭДТА, затем 1 М раствором Na2CO3 доводили рН образца до 8,5 ибыстро вносили 25 мг прокаленного оксида алюминия, перемешивали 2 мин иотфильтровывали с использованием системы Preppy с мембранным насосом.Далее сорбент промывали дистиллированной водой (2 × 3 мл) и элюировалианалиты 0.5 мл 1М раствором уксусной кислоты.73II.4.3.

Пробоподготовка образцов мочи для электрофоретическогоопределения стероидных гормоновВ мерные пробирки вместимостью 10 мл вносили 5 мл мочи, к пробешприцем прибавляли 0.5 мл ацетона, содержащего 150 мкл ионной жидкостиС8MImBF4. Содержимое пробирки встряхивали 1 мин и выдерживали 10 мин вультразвуковойванне.Разделениедисперснойсистемыпроводилицентрифугированием в течение 15 мин при 4000 об/мин. Затем 50 мкл нижнейфазы переносили в пробирки типа Эппендорф и добавляли 50 мкл МеОН.74ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВМетод капиллярного электрофореза с УФ-детектированием в его двухосновных вариантах – капиллярный зонный электрофорез и мицеллярнаяэлектрокинетическая хроматография – получил широкое распространение приопределенииионныхэффективности,инейтральныхэкспрессности,соединенийвозможностиблагодарясочетаниявысокойКЗЭсмасс-спектрометрическим детектором.

Однако при решении медико-биологическихзадач возникают проблемы: сорбция основных аналитов (аминов, аминокислот,катехоламинов, нуклеозидов, пептидов и белков) на стенках кварцевогокапилляра,чтопроявляетсявсниженииэффективности;инизкаячувствительность.Решением этих проблем может быть сочетание процессов on-lineконцентрирования с применением в составе фонового электролита веществ,способных блокировать группы -ОН кварцевого капилляра, тем самым устраняяили снижая сорбцию определяемых соединений. Подобный подход можетсопровождаться ростом эффективности и селективности разделения, а такжеснижением пределов обнаружения до значений, достаточных для определенияминорных и при этом диагностически важных аналитов в биологическихжидкостях.В связи с этим интересные перспективы открываются при использованиив капиллярном электрофорезе имидазолиевых ионных жидкостей.