Автореферат (Имидазолиевые ионные жидкости в качестве экстрагентов, модификаторов кварцевого капилляра и хиральных селекторов в капиллярном электрофорезе), страница 4

Энантиомеры аналитов могутвключаться в полость гидроксипропилпроизводного β-ЦД и ассоциировать сположительно заряженым катионом ионной жидкости, сорбированной на поверхностикварцевого капилляра. Образование ассоциатов может происходить за счет π-πвзаимодействий с имидазольной группой, а дополнительное образование водородныхсвязей между энантиомерами и анионом аминокислотной ионной жидкости[C4MIm][L-Pro] приводит к росту селективности разделения.311’11’ 40 мМ1.0 мМ2.5 мМа)3«Анаприлин»1'13б)«КарведилолЗентива»22’422’22’411’322’11’5 мМ422’[C4MIm][L -Pro]Рис. 14. а) Электрофореграмма рацемической смеси пропранолола, карведилола, триптофана итирозина; б) Электрофореграммы лекарственных препаратов ««Анаприлин» и «Карведилолзентива».

Условия: «СЕ 7100» а) 20 мМ фосфатный буфер (pH = 2.5), 5 мМ HP- β-CD,[C4MIm][L-Pro]; б) 20 мМ фосфатный буфер pH = 2.5, 5 мМ HP- β-CD, 5 мМ [C 4 MIm][L-Pro];230 нм; 30 кВ.Аналиты: 1- R-(+)-пропранолол, 1’- S-(-)-пропранолол, 2- R-(+)-карведилол,2’- S-(-)-карведилол, 3-DL-Trp, 4-DL-Tyr.Достигнутые значения факторов разрешения для пропранолола (Rs = 0.8) икарведилола (Rs = 1.6) позволили перейти к определению соотношения энантиомеров влекарственных препаратах «Анаприлин» и «Карведилол Зентива» (табл. 4).Таблица 4.

Характеристики и результаты анализа лекарственных препаратовПрепаратα, Rs«Анаприлин» («Медисорб», Россия)пропранолол гидрохлорид 40 мгα = 1.02±0.01Rs = 1.16±0.04«Карведилол Зентива» («Zentiva», Чехия)карведилол 25 мг (рацемическая смесь стереоизомеров)α = 1.03±0.01Rs = 1.86±0.05РезультатыколичественногоопределенияR (+) -19.2±0.3 мгS (-) -17.9±0.3 мгR (+) – 12.1±0.2 мгS (-) -11.9±0.2 мг176-ая глава посвящена исследованию экстракционных процессов аминокислот истероидных гормонов в гидрофобные ионные жидкости C 6MImNTf2, C6MImBF4,C8MImBF4.

Показано, что степени извлечения аминокислот уменьшаются приувеличении длины алкильного радикала в имидазолиевом катионе ИЖ, а наибольшиезначения достигнуты для C6MImNTf2 (90-100 %) (Рис. 15а) при соотношении фаз 1:1.Изучена зависимость степеней извлечения аминокислот в ионную жидкостьC6MImNTf2 от рН водной фазы (Рис.

15б). Полученные результаты позволяютзаключить, что экстракция, скорее всего, протекает по ионообменному механизму.а)б)Рис. 15 (а) Зависимость степеней извлечения аминокислот в C6MImNTf2 от соотношения фаз(рН = 1.0). (б) Зависимость степеней извлечения аминокислот в ионную жидкость C6MImNTf2от рН водной фазы (VИЖ/Vводная = 1:1, объемн.).Обратная экстракция аминокислот протекала при повышении рН водной фазыдо 9.3.Подобнаялогикаэкспериментабылареализованаиприизученииэкстракционных процессов стероидных гормонов из водной фазы в гидрофобныеионные жидкости. Показано, что степени извлечения наименее гидрофобногокортизола(F)растутпризаменеанионавсоставемолекулыИЖбис(трифторметилсульфонил)имида на тетрафторборат, и при увеличении длиныалкильного радикала (Рис. 16).Рис. 16.

Зависимость степенейизвлечения кортизола (F) в ионные жидкостиот соотношения фаз (объемн.).Установлено,извлечениявчтостепеньионнуюжидкостьвозрастает с увеличением гидрофобностианалита.Максимальныезначения18степеней извлечения кортикостероидов получены при использовании в качествеэкстрагентаионнойжидкостиC8MImBF4.Длядезоксикортизона (S) наблюдается практическикортикостерона(B)и11-количественная экстракциявС8MImBF4 (соотношение органической и водной фаз - 1:10, объемн.).Выявленные закономерности извлечения стероидных гормонов позволиливыбрать ионную жидкость C8MImBF4 в качестве экстрагента для осуществлениядисперсионной микроэкстракции.

Отработка процедуры заключалась в варьированииприроды диспергатора (метанол, ацетонитрил, ацетон), его объема (0.1-1.5 мл) (Рис.17а) и объема экстрагента (50-250 мкл) (Рис. 17б). Большие степени извлечениястероидных гормонов (68-91%) из водной фазы достигались при использовании вкачестве диспергатора ацетона (0.5 мл) и 150 мкл С8MImBF4.абРис. 17. Зависимость степеней извлечения стероидных гормонов от объема ацетона (а)и объема C8MImBF4 (б).В 7-ойглавезакономерностейпредставленыпроцессовпрактические примененияэкстракциииустановленныхэлектрофоретическогоразделенияаминокислот, катехоламинов и стероидных гормонов в анализе биологическихжидкостей: предложены схемы определения аналитов в образцах мочи (Рис. 18).В табл.

5 представлены сравнительные результаты литературных данных иполученные в данной работе. Степени извлечения аналитов различной природы ипределов обнаружения сопоставимы, а в ряде случаев в условиях, достигнутых вданной работе, выше.19Подкисление образов мочиПодкисление образцов мочи1 М раствором HClТвердофазная экстракция наAl2O3Жидкостно-жидкостнаяэкстракция аминокислот вC6MImNTf2Элюирование 1 М растворомуксусной кислотыЭлектрофоретическоеопределение:«Капель 105М»Кварцевый капилляр сковалентным покрытием наоснове ИЖФоновый электролит:10 мМ NaH2PO4 (рН = 2.0)50 мМ ДДСННапряжение:+20 кВа)Обратное извлечение0.3 М боратный буферныйраствор (рН = 9.3)Электрофоретическоеопределение:Agilent-7100 (λ=230 нм)Фоновый электролит:75 мМ NaH2PO4 (рН = 2.0),5 мМ С16MImClНапряжение:-20 кВ,Ввод пробы: 10с×50мбарДисперсионнаяжидкостно-жидкостнаямикроэкстракция вС8MImBF 4Разбавление МеОНЭлектрофоретическоеопределение:Капель 105МФоновый электролит:20 мМ NaH2PO4 (рН = 2.0)25 мМ ДДСН5 М мочевинаНапряжение: -20 кВДлина волны: 240 нмВвод пробы: 5с 50 мбарб)в)Рис.

18. Схемы определения биогенных аминов (а), аминокислот (б) и стероидныхгормонов (в) в образцах мочи.Таблица 5. Сопоставление полученных результатов с литературными даннымиАналитыИонные жидкости - экстрагентыСтепени извлеченияОбразцы мочи: тирозин 92±4 %,С6MImNTf23,4-дигидроксифенилаланин - 96±5 %,триптофан 100±4%Лекарственные препараты:С4MImPF 6 [1]триптофан 99±2%Дисперсионная жидкостно-жидкостнаямикроэкстракцияОбразцы мочи:кортизол (F) - 69±7%, кортизон (E) - 74±7%,кортикостерон (B) - 92±5%, 11-дезоксикортизол(S) С8MImBF493±4%.Жидкостно-жидкостная экстракцияВодные растворы:кортизол (F) - 97±3%, кортизон (E) - 98±2%,кортикостерон (B) - 98±2%,11-дезоксикортизол(S) - 98±2%Жидкостно-жидкостная экстракцияОбразцы мочи:CH3Cl [2]кортизол (F) - 102±3%, кортизон (E) - 94±3%,кортикостерон (B) - 70±3%, 11-дезоксикортизол(S) 71±3%.Модификаторы электрофоретических системПределыФакторыЭффективностьМодификаторобнаруженияразрешения (Rs)(N), тыс.

т.т./м(ПО), мкг/мл5 мМ С12MImСl0.9-1.50.5-2.0270-300Ковалентное покрытие1.6-2.70.2-0.8200-450ЭкстрагентАминокислотыCтероидныегормоныАминокислоты20Биогенныеаминына основе ИЖ9 мМ С12MImСlКовалентное покрытиена основе ИЖ0.5-1.60.7-1.2110-3301.5-5.50.3-0.5200-400ПсевдостационарнаяфазаФакторыразрешения (Rs)Пределыобнаружения(ПО), мкг/млЭффективность(N), тыс. т.т./мСтероидныегормоны15 мМ С16MImСl + 101.8-4.32160-450мМ β-ЦД15 мМ С16MImСl + 12>1.40.3-0.4250-750мМ –ГП-β-ЦД [3]25 мМ ДДСН + 0.5 мМ>0.70.2850-1000С16MImСl [3]80 мМ ДДСН + 5 М>1.35100-150мочевина [3]Варианты внутрикапиллярного on-line концентрирования на ковалентных покрытияхПределыВариантУсловияSEFhобнаруженияконцентрирования(ПО), нг/млАминокислотыСтэкинг с большим58-8511-95объемом вводимой пробыСвипинг с большим110-1805-40Ковалентное покрытие объемом вводимой пробына основе ИЖБиогенныеСтэкинг с большим105-13511-17аминыобъемом вводимой пробыСвипинг в сочетании с930-15001-2электростэкингомХиральные селекторыФакторы разрешения (Rs),Хиральный селекторСелективность (α)Энантиомеры[C4MIm][L-Pro] (рН=12.2)Тирозин: R s- 2.2±0.2, α – 1.17±0.07аминокислотметод ЛОКЭТриптофан: Rs- 5.2±0.3, α – 1.25±0.07[C6MIm][L-Pro] (рН=4.0)Тирозин: Rs- 4.27, α – 1.09метод ЛОКЭ [4]Триптофан: R s- 3.52, α – 1.08Энантиомеры5 мМ [C4MIm][L-Pro]+ 5 мМ ГППропранолол R s- 1.16, α – 1.02β-блокаторовβ-ЦДКарведилол R s- 1.86, α – 1.0330 мМ TMA-L-Arg + 20 мМ ГП-βПропранолол Rs- 2.36, α – 1.034ЦД [5][1] Smirnova S.V., Torocheshnikova I.I., Formanovsky A.A., Pletnev I.V.

Solvent extraction of amino acids into a roomtemperature ionic liquid with dicyclohexano-18-crown-6 // Anal. Bioanal. Chem. 2004 V. 378 P. 1369[2] Карцова Л.А., Бессонова Е.А., Объедкова Е.В., Даванков В.А. Использование сверхсшитого полистирола каксорбента для твердофазной экстракции при анализе лекарств в биологических объектах методомвысокоэффективной тонкослойной хроматографии (ВЭТСХ)// Сорбционные и хроматографические процессы 2010Т.10. Вып. 1 С.5[3] Bessonova E. A., Kartsova L. A., Gallyamova V. F. Effect of 3-methyl-1-cetylimidazolium chloride ionic liquid on theelectrophoretic preconcentration of steroid hormones// J.