Автореферат (Иммуноморфология селезенки при действии гомо- и гетеротипических стрессоров на разных этапах онтогенеза)

На правах рукописиЧЕРНОВ ДМИТРИЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ«Иммуноморфология селезенки при действии гомо- и гетеротипическихстрессоров на разных этапах онтогенеза»03.03.04 - клеточная биология, цитология, гистологияАвтореферат диссертации на соискание ученой степеникандидата медицинских наукМосква - 2019 г2Работа выполнена в ФГАОУ ВО ПервыйМосковскийгосударственныймедицинский университет им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовскийуниверситет)Научный руководитель:член-корреспондент РАН, доктор медицинскихнаук, профессорКузнецов Сергей ЛьвовичОфициальные оппоненты:Лебединская Ольга Витальевна – доктор медицинских наук, профессор,ФГБОУ ВО «Пермский государственный медицинский университет имениАкадемика Е.А. Вагнера» Минздрава России, кафедра гистологии, эмбриологиии цитологии, доцент кафедры.Ерофеева Людмила Михайловна – доктор биологических наук, профессор,ФГБНУ"Научно-исследовательскийинститутМорфологиичеловека",центральная патологоанатомическая лаборатория, ведущий научный сотрудник.Ведущаяорганизация:ФГБОУВО"Оренбургскийгосударственныймедицинский университет" Минздрава России.Защита диссертации состоится «____»______________2019 годав______часов на заседании диссертационного совета Д 208.040.01 при ФГАОУ ВОПервый МГМУ им.И.М.

СеченоваМинздраваРоссии (Сеченовскийуниверситет) по адресу 119991, г. Москва, ул. Трубецкая, д. 8, стр. 2.С диссертацией можно ознакомиться в ЦНМБ ФГАОУ ВО Первый МГМУ им.И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский университет) по адресу 119034,г. Москва, Зубовский бульвар, 37/1 и на сайте http://sechenov.ruАвтореферат разослан «____» _______________2019 годаУченый секретарь диссертационного советадоктор медицинских наук, профессорБлинова Екатерина Валерьевна3ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫАктуальность темы исследования:Широкийдиапазониммуномодулирующихэффектовстрессаотстимулирующего до глубокого угнетающего действия на иммунную системуорганизма человека и экспериментальных животных показан в многочисленныхисследованиях последних лет [Dhabhar F.S., 2014; Markes A.N., 2014; NicolaidesJ., 2015].

Вектор стресс-ассоциированной иммуномодуляции зависит от многихфакторов, как внешних так и внутренних, среди которых ведущими внешнимифакторами считаются продолжительность и тип стрессорного воздействия, авнутренними – возраст, пол испытуемого, тип приспособительного поведения ипредыдущий опыт стрессорных экспозиций [Costa F.A., 2010; Gądek-MichalskaA., 2013; Oster D., 2014]. Действие на организм любых иммуномодулирующихфакторов, в том числе таких, как хронический стресс, во время активного роста,способствует наложению возрастных изменений на индуцированные сдвиги, чтоможет оказать драматическое действие на иммунный ответ.

Принято считать, чтохроническийстрессявляетсяиммунодепрессивным,однакомеханизмыиммуносупрессии по-прежнему нуждаются в дальнейшем изучении, что даствозможность разрабатывать адресные фармакологические методы минимизациииммуносупрессивных последствий стресса [Ahmad A., 2014; Hu D., 2014; LiH.,2014].Степень разработанности темы исследования. В последнее времяпоявилсярядработ,посвященныхизучениювлиянияхроническогогетеротипического стресса, т.е.

стрессорного воздействия с меняющимсястрессором [Kopp B.L., 2013; Babb J.A., 2014; Zhang B., 2014], затрагивающего,главным образом, нейроэндокринную систему. Продемонстрировано, чтоактивация гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной оси при повторномдействии гомотипического стресса снижается, а гетеротипического – напротив,усиливается [Gagliano H., 2014].4Сведений о влиянии гетеротипических стрессоров на лимфоидные органынаразныхэтапахбольшинствопостнатальногоподробныхиммунологическихонтогенезеисследованийметодовнемного.выполненоисследования,Подавляющеесприменениемпозволяющихопределятьпопуляционный состав клеток крови, в то время как гистологическиеисследования данной проблемы проводились с применением преимущественнорутинных методов, не позволяющих оценить тонкие изменения в компартментахиммунных органов и определить их механизмы.Селезенкаявляетсяпериферическиморганомиммуногенеза.Существование в ней двух принципиально различных зон – красной и белойпульпы, а в последней Т- и В-зон с их компартментами (периартериальныелимфоидные влагалища, лимфоидные узелки, маргинальная зона), отличающихсяпо строению и функции, делает ее иммуногистохимическую характеристикувесьма информативной в плане оценки иммунного статуса организма.

До сих поризучение этого органа при стрессе при действии повторяющегося и варьирующихстрессоровсприменениемсовременныхметодовколичественнойиммуногистохимии не проводилось, хотя именно оно может помочь раскрытьзакономерности стресс-ассоциированных иммуномодуляционных сдвигов ворганизме.Цельдействияисследования:стрессанасравнительнаяморфологиюоценкаселезенкииммуномодулирующегопридействиигомо-игетеротипических стрессоров в различные возрастные периоды до наступленияполовой зрелости у крыс.Задачи исследования:1.Провести на гистологических срезах селезенки неполовозрелых крысинфантильногоиперипубертатногопериодовонтогенезаиммуногистохимические реакции на маркеры стромальных и лимофоидныхклеток, пролиферации и апоптоза с последующим анализом изображения.2.Изучить изменения морфометрических показателей популяций Т- (CD8+ ,CD4+, CD90+) и В-клеток (CD20+) в селезенке крыс инфантильного и5перипубертатного периодов онтогенеза, вызванные гомо- и гетеротипическимстрессом3.Выявить особенности стресс-ассоциированной динамикипопуляцийстромальных клеток (ОХ-62- и белок S100-иммунопозитивных) в селезенке крысинфантильного и перипубертатного периодов онтогенеза, обусловленные гомо- игетеротипическим стрессом.4.Для выяснения механизмов стресс-ассоциированной динамики популяцийлимфоидных и дендритных клеток провестианализ содержания PCNA- икаспаза-3-иммунопозитивных клеток в селезенке крыс инфантильного иперипубертатного периодов онтогенеза.5.Провестисравнительнуюиммуногистохимическуюоценкумикромофологическуюхроническогодействияигомо-игетеротипических стрессоров на селезенку у неполовозрелых крыс в разныевозрастные периодыНаучная новизна исследования:Впервыепроведенасравнительнаяиммуногистохимическаяоценкахронического действия гомо- и гетеротипических стрессоров на селезенку унеполовозрелых крыс в разные возрастные периоды (инфантильный иперипубертатный периоды онтогенеза).Впервые получены данные количественного иммуногистохимическогометода исследования с последующей цифровой обработкой изображения,позволяющего определить степень постстрессовой иммуномодуляции в селезенкекрыс инфантильного и перипубертатного возраста .Впервые определены особенности стресс-ассоциированной динамикиCD8+, CD4+, CD90+, CD20+ субпопуляций лимфоцитов, ОХ-62- и белок S100иммунопозитивных клеток, а также PCNA- и каспаза-3- иммунопозитивныхклеток селезенки крыс инфантильного и перипубертатного периодов онтогенеза,вызванные хроническим гомо- и гетеротипическим стрессом.Впервые показано, что изменения, затрагивающие популяции лимфоидныхи стромальных клеток в селезенке, а также интенсивность апоптоза иммуноцитов6в разные периоды раннего постнатального онтогенеза при хроническом действиигетеротипическогострессапревосходятпозначимостиизмененияпригомотопическом стрессе.Продемонстрировано, что нейроэндокринные и иммунные изменения,опосредованные различными видами стресса, накладываются на возрастныеперестройки органов иммунной и эндокринной систем,что формируетотличающиеся иммуномодуляционные изменения при гомо- и гетеротипическомстрессе на разных этапах раннего постнатального онтогенеза.Теоретическая и практическая значимость работы:Научныеположениядиссертационногоисследованияраскрываютзакономерности стресс-ассоциированных иммуномодуляционных сдвигов придействии хронического стресса на селезенку крыс раннего постнатальногопериода онтогенеза.Изменения в селезенке растущего организма при хроническом действиигомо- и гетеротипических стрессоров различаются по динамике клеточныхпопуляций в ее Т- и В-зонах.

Диапазон этих различий связан с возрастнымиособенностями активации гипоталамо- гипофизарно-адренокортикальной оси прихроническом стрессе.Полученные данные могут использоваться при разработке адресных мерпрофилактикииммуносупрессивныхнарушенийврастущеморганизме,пережившем хроническое действие гомо- или гетеротипических стрессоров.Результаты диссертационного исследования могут применяться в учебномпроцессе и быть использованы при написании учебных пособий по клеточнойбиологии, цитологии, гистологии, иммуноморфологииОсновные положения, выносимые на защиту:1.Стресс-ассоциированные изменения в селезенке растущего организмапри хроническом действии гомо- и гетеротипического стресса различаютсядинамикой клеточных популяций лимфоцитов и дендритных клеток, уровнямиапоптоза и пролиферации клеток в ее Т- и В-зонах.72.Диапазонэтихразличийимеетвозрастныезакономерности,изменения при хроническом действии гетеротипических стрессоров превосходятпо значимости изменения при гомотопическом стрессе.Внедрение результатов работы в практикуМатериалы диссертации используются в учебном процессе кафедрыгистологии, цитологии и эмбриологии лечебного факультетаМосковскийФГАУ ВО Первыйгосударственный медицинский университет им.

И.М. СеченоваМинздрава России (Сеченовский университет).Степень достоверности и апробация результатовдиссертационногоисследования.Достоверностьподтверждаетсяполученныхдостаточнымпри проведении исследования результатовколичествомморфологическогоматериала,репрезентативным объемом выборки проведенных исследований, адекватнымиметодами статистической обработки данных.