Диссертация (Изучение высвобождения лекарственных веществ в биорелевантных средах), страница 8

Кинетика растворения лекарственных средств считается эквивалентной, если значение f2 лежит в пределах от 50 до 100. В том случае, если более85% лекарственного средства переходит в раствор в течение 15 мин, кинетика растворения считается эквивалентной без математической оценки.2.2.6.1. Препараты нифедипина.2.2.6.1.1. СФМКоличество нифедипина, перешедшего в раствор, в процентах (Q%) вычисляли по формуле:Q% D  a 0  20  500  PD  a0  2  P, гдеD 0  L  50  100D0  LD – оптическая плотность исследуемого раствора нифедипина;D0 – оптическая плотность стандартного раствора нифедипина;a0 – навеска стандартного образца нифедипина, мг;L – заявленное содержание нифедипина в таблетке, мг;P – cодержание нифедипина в стандартном образце, %.542.2.6.1.2.

ВЭЖХКоличество нифедипина, перешедшего в раствор, в процентах (Q%) вычисляли по формуле:Q% S  a 0  20  500  PS  a0  2  P, гдеS 0  L  50  100S0  LS – площадь пика нифедипина на хроматограмме испытуемого раствора;S0– площадь пика нифедипина на хроматограмме стандартного раствора;a0 – навеска стандартного образца нифедипина, мг;L – заявленное содержание нифедипина в таблетке, мг;P – cодержание нифедипина в стандартном образце, %.2.2.6.2.

Препараты мелоксикама2.2.6.2.1. СФМКоличество мелоксикама, перешедшего в раствор, в процентах (Q%) вычисляли по формуле:Q% D  a 0  50  900  PD  a 0  1,125  P, гдеD 0  L  100  4  100D0  LD – оптическая плотность исследуемого раствора мелоксикама;D0 – оптическая плотность стандартного раствора мелоксикама;a0 – навеска стандартного образца мелоксикама, мг;L – заявленное содержание мелоксикама в таблетке, мг;P – cодержание мелоксикама в стандартном образце, %.2.2.6.2.2. ВЭЖХКоличество мелоксикама, перешедшего в раствор, в процентах (Q%) вычисляли по формуле:Q% S  a 0  50  900  PS  a 0  1,125  P, гдеS 0  L  100  4  100S0  L55S – площадь пика мелоксикама на хроматограмме исследуемого раствора;S0 – площадь пика мелоксикама на хроматограмме стандартного раствора;a0 – навеска стандартного образца мелоксикама, мг;L – заявленное содержание мелоксикама в таблетке, мг;P – cодержание мелоксикама в стандартном образце, %.2.2.6.3.

Препараты урсодезоксихолиевой кислоты.Количество урсодезоксихолевой кислоты, перешедшей в раствор, впроцентах (Q%) вычисляли по формуле:S  a 0  1000  РS  a 0  10  Р, где:S 0  L  100S0  LS – площадь пика урсодезоксихолевой кислоты на хроматограмме испыQ% туемого раствора;S0– площадь пика урсодезоксихолевой кислоты на хроматограмме стандартного раствора урсодезоксихолевой кислоты;a0 – навеска стандартного образца урсодезоксихолевой кислоты, мг;L – заявленное содержание урсодезоксихолевой кислоты в таблетке/капсуле, мг;P – cодержание урсодезоксихолевой кислоты в стандартном образце, %.2.2.7.

Валидация аналитических методик.Валидацию аналитических методик проводили согласно протоколу ICH[80]. Валидация методики количественного определения действующих веществ в биорелевантных средах проводилась по следующим валидационнымпараметрам: специфичность (specificity); аналитическая область (range); линейность (linearity);56 правильность (trueness); прецизионности (precision); робастность (robustness).Более подробно теоретические аспекты процесса валидации описаны вразделе в литературе [2, 46, 80], практическое применение в данной работе –в разделах 3.5-3.7. «Валидация методики количественного действующего вещества» Главы 3.2.2.8.

Нормативная документация в исследовании кинетики растворения.Исследование кинетики растворения проводили согласно рекомендациям проекта ОФС 42-0135-09 «Растворения для твердых дозированных лекарственных форм» Государственной фармакопеи РФ XII изд., Методическихуказаний МЗ РФ «Оценка биоэквивалентности лекарственных средств» иобщих рекомендаций ВОЗ.57ГЛАВА 3. ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ3.1. Изучение кинетики растворения препаратов нифедипина.Изучение сравнительной кинетики растворения проводилось в фармакопейной среде 0,1 М HCl pH 1,2 и в биорелевантных средах FaSSIF pH 6,5,SLS 0,05% pH 6,5, SLS 0,01% pH 6,5 и в растворе blank FaSSIF pH 6,5.3.1.1.

Методика Тип аппарата – «Лопастная мешалка» Число оборотов – 75об/мин Температура – 37 ±0,5°С Среда растворения –фармакопейная и биорелевантные средыРисунок 4. Спектр поглощения стандартного раствора Нифедипина Объем среды растворения – 500 мл Временные точки – 10, 15, 20, 30, 45, 60 мин Количественное определение – 1. ВЭЖХ с UV-Vis спектрофотометрическим детектором λ=238 нм 2. СФМ λ=238 нм.Длина волны детектирования нифедипина была выбрана в соответствиис экспериментальными данными. Спектр поглощения стандартна нифедипина предложен на рисунке 4.В сосуд для растворения, заполненный 500 мл изучаемой среды растворения t=37°С, помещали по 1 таблетке препарата нифедипина до начала вращения мешалки.

Последовательный отбор проб проводили через 10,15, 20,30, 45 и 60 мин по 5 мл, причем такой же объем соответствующего буферного раствора добавляли в среду растворения для сохранения объема. Получен-58ные пробы фильтровали через бумажный фильтр «синяя лента». Для получения статистически достоверных результатов исследование проводили 12 раздля каждого препарата.3.1.2.

Количественное определениеКоличественный анализ проводили двумя методами: методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с UV-Vis спектрофотометрическимдетектором и методом УФ-спектрофотометрии.Площадь пика измеряли на жидкостном хроматографе Shimadzu (Япония).Условияхроматографирования:хроматографическаяколонкаμBondapack С18 Phenyl column, 300 х 3,9 мм, 5 мкм (Waters, Ирландия); комнатная температура; подвижная фаза: ацетонитрил — 0,03% раствор фосфорной кислоты (40:60); скорость потока – 1 мл/мин; детектирование при 238 нм(данные получены экспериментально); время анализа 10 мин.

Время удерживания нифедипина по данной методике составляло около 7,5 мин. Параллельно анализировали стандартные растворы нифедипина с концентрацией0,02 мг/мл в соответствующей среде.Оптическую плотность проб измеряли на спектрофотометре Agilent,оснащенный компьютерной программой для обработки данных, при длиневолны 238 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. Параллельно измеряли оптическую плотность раствора стандарта нифедипина с концентрацией 0,02мг/мл в соответствующем буфере. В качестве раствора сравнения брали тотже буферный раствор, который использовался в качестве среды растворения.3.2. Изучение кинетики растворения препаратов мелоксикама.Изучение сравнительной кинетики растворения проводилось в фармакопейной среде калий-фосфатный буфер pH 8,0 и в биорелевантных средахFaSSIF pH 6,5, SLS 0,05% pH 6,5, SLS 0,01% pH 6,5 и в растворе blank FaSSIFpH 6,5.593.2.1.

Методика Тип аппарата – «Лопастная мешалка» Число оборотов – 75 об/мин Температура – 37 ± 0,5°С Среда растворения – фармакопейная и биорелевантные среды Объем среды растворения – 900 мл Временные точки – 10, 15, 20, 30, 45, 60 мин Количественное определение – ВЭЖХ с UV-Vis спектрофотометрическим детектором λ=362 нм и СФМ λ=362 нм.Длина волны детектиро-2.25вания мелоксикама была вы2брана в соответствии с экспериментальнымиданными.1.75Спектр поглощения стандарт-1.5на рисунке 5.В сосуд для растворения,Absorbance (AU)на мелоксикама представлен1.251заполненный 900 мл изучае0.75мой среды растворения t=37°С,помещали по 1 таблетке препарата мелоксикама до начала0.50.25вращения мешалки.

Последо0вательный отбор проб прово-200225250275300325350375400Wavelength (nm)дили через 10,15, 20, 30, 45 иРисунок 5. Спектр поглощения стандартно-60 мин по 5 мл, причем такойго раствора Мелоксикамаже объем соответствующего буферного раствора добавляли в среду растворения для сохранения объема.

Полученные пробы фильтровали через бумажный фильтр «синяя лента». Для получения статистически достоверных результатов исследование проводили 12 раз для каждого препарата.603.2.2. Количественное определениеКоличественный анализ проводили двумя методами: методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с UV-Vis спектрофотометрическимдетектором и методом УФ-спектрофотометрии.Количественное определение методом ВЭЖХ проводили на жидкостномхроматорафе Shimadzu (Япония). Условия хроматографирования: хроматографическая колонка mBondapack Phenyl column, 300 х 3,9 мм, 5 мкм (Waters,Ирландия); комнатная температура; подвижная фаза: ацетонитрил-вода(30:70); скорость потока – 1 мл/мин; детектирование при 362 нм; время анализа 5 мин. Время удерживания мелоксикама по данной методике составлялооколо 3 мин. Параллельно анализировали стандартные растворы мелоксикама с концентрацией 0,016 мг/мл в соответствующей среде.Оптическую плотность проб измеряли на спектрофотометре Agilent,оснащенном компьютерной программой для обработки данных, при длиневолны 362 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Параллельно измеряли оптическую плотность раствора стандарта мелоксикама с концентрацией 0,016мг/мл в соответствующем буфере. В качестве раствора сравнения брали тотже буферный раствор, который использовался в качестве среды растворения.3.3. Изучение кинетики растворения препаратов урсодезоксихолиевойкислоты.Изучение сравнительной кинетики растворения проводилось в фармакопейной среде калий-фосфатный буфер pH 8,0 и в биорелевантной среде FaSSIF pH 6,5.3.3.1. Методика Тип аппарата – «Лопастная мешалка» Число оборотов – 75 об/мин Температура – 37 ± 0,5°С61 Среда растворения – калий-фосфатный буфер pH 8,0 и биорелевантная среда FaSSIF pH 6,5 Объем среды растворения – 1000 мл Временные точки – 10, 15, 20, 30, 45 мин Количественное определение – ВЭЖХ с диодно-матричным детектором.В сосуд для растворения, заполненный 1000 мл изучаемой среды растворения t=37°С, помещали по 1 таблетке\капсуле препарата урсодезоксихолиевой кислоты до начала вращения мешалки.