Диссертация (Изучение высвобождения лекарственных веществ в биорелевантных средах), страница 12

Рассчитанная величина фактора сходимости f2 для профилей растворения препаратов таблетки 500 мг икапсулы 250 мг составила 32,03, что свидетельствует о неэквивалентностипрофилей.103100% высвободившегося ЛВ908070Таблетки 500 мг60Капсулы 250 мг50403020100051015202530354045время (мин)Рисунок 19. Усредненные профили высвобождения (n=6) действующего вещества из препаратов урсодезоксихолиевой кислоты, FaSSIF рН 6,5Среда растворения:Значение фактора сходимости f2FaSSIF рН 6,5Нормы55,64от 50 до 100Согласно требованиям Методических Указаний МинздравсоцразвитияРоссии «Оценка биоэквивалентности лекарственных средств», приложение 4,2008 г, руководства по экспертизе лекарственных средств, том 1, 2013 г, итом 3, 2014 г, профили растворения считаются эквивалентными, если факторсходимости f2 принимает значения от 50 до 100.

Рассчитанная величина фактора сходимости f2 для профилей растворения препаратов таблетки 500 мг икапсулы 250 мг составила 55,64, что свидетельствует об эквивалентностипрофилей.104Полученные результаты следует считать достоверными, поскольку относительные стандартные отклонения (RSD, %) не превышали 20% для первой временной точки и 10% для всех последующих временных точек длякаждого из препаратов.Рисунок 20. Профили растворения препаратов урсодезоксихолиевой кислотыТаким образом, можно сделать заключение о том, что для малоионизируемого по карбоксильной группе вещества на примере УРДХ, БРС имеютнизкую дискриминаторную силу, полного высвобождения не обеспечивают,и в случае применения БРС значения высвобождения ЛВ лимитируются растворимостью субстанции.

Проведенные исследования наглядно демонстрируют, что в фармакопейной среде больше высвобождения из таблеток 500 мг,а в БРС – из капсул 250 мг, это подтверждает вышесказанное.1053.5. Валидация методики количественного определения мелоксикама вбиорелевантной среде.3.5.1. Определение специфичности количественной аналитической методики.Специфичность – это способность аналитической методики давать правильный результат определения вещества в присутствии сопутствующих компонентов.Для валидируемой методики количественного определения должна бытьоценена ее специфичность в отношении определяемого вещества, т.

е. должно быть экспериментально подтверждено, что присутствие сопутствующихвеществ не влияет непредусмотренным образом на результат анализа.Специфичность оценивали анализом биорелевантной среды растворенияFaSSIF, не содержащей действующих веществ, а так же анализом плацебо.На хроматограмме не обнаруживалось детектируемых пиков, имеющих время удерживания, эквивалентное времени удерживания действующего вещества. Все хроматограммы представлены в разделе "ПРИЛОЖЕНИЯ".3.5.2. Аналитическая область методики.Аналитическая область методики – это интервал между верхним инижним значением аналитических характеристик определяемого компонентав объекте анализа (его количества, концентрации, активности и т.

п.). В этоминтервале получаемые с использованием валидируемой методики результатыдолжны иметь приемлемый уровень правильности и внутрилабораторной(промежуточной) прецизионности.Аналитическая область методики может быть установлена по диапазону экспериментальных данных, удовлетворяющих линейной модели.Приготовление растворов стандартов, результаты измерения и обработка полученных результатов проводились в соответствии с рекомендациямиUSP [113].Аналитическая область методики количественного определения действующего вещества мелоксикама в биорелевантной среде FaSSIF перекры-106вает интервал от 20% до 110% максимальной концентрации испытуемогораствора.3.5.3.

Линейность.Линейность методики – это наличие линейной зависимости аналитического сигнала от концентрации или количества определяемого вещества ванализируемой пробе в пределах аналитической области методики.Рекомендуемое значение квадрата коэффициента корреляции линейнойрегрессии должно составлять 0,997 (0,998) для 5 точек.Соотношение точки пересечения с осью координат (y-intercept) к величине сигнала при 100% рабочей концентрации, выраженное в процентах,должно быть не более 3,0%Номинальное значение (Со) концентрации действующего вещества вусловиях проведения теста «Растворение» для мелоксикама составляет:C o  15  900  0,016  мг/мл (16 мкг/мл), где15 – содержание мелоксикама в одной таблетке, мг900 – объем среды растворения, млДля приготовления стандартного раствора мелоксикама 0,020 г (точнаянавеска) стандарта мелоксикама количественно переносят в мерную колбувместимостью 100 мл, растворяют в 20 мл раствора натрия гидроксида 0.1 М,тщательно перемешивают до полного растворения стандарта и доводят объемдо метки FaSSIF рН 6,5.

Полученный раствор имеет концентрацию мелоксикама 0,2 мг/мл.Растворы для оценки валидационных характеристик готовили в интервале концентраций 20% - 110% от номинального значения (Со), что соответствует диапазону концентраций 3.2 мкг/мл – 18 мкг/мл в соответствии с рекомендациями USP по определению линейности при проведении тестов"Растворение" [113].107Таблица 44Приготовление растворов для оценки валидационных характеристикИсходный стандартный растворm, мгV, млCконцентрата мг/мл201000,2Растворы для оценки валидационных характеристикКоличество исходного стандартного раствора, мклРазведение,С, мкг/млмл% от изначального Со160103,220240104,8304001085055010117070010149080010161009001018110Результаты оценки линейности методики приведены в Таблице 45.

Прямая линейной зависимости в нормализованных координатах (введено\найдено)растворов мелоксикама в среде FaSSIF для оценки валидационных характеристик приведена ниже на Рисунке 21.Таблица 45Оценка линейности методики количественного определения мелоксикама всреде растворения FaSSIF рН 6,5Концентрацияполученногостандартногораствора,мкг/мл (введено)3,2Концентрация полученного стандартного раствора,% от номинального (введено)Концентрацияполученногостандартногораствора,мкг/мл (найдено)203,42Концентрацияполученногостандартногораствора, %от номинального (найдено)21,404,8304,9530,928508,0550,30108117011,1070,64149014,1090,641610016,00100,001811018,10110,63120,00%y = 0,9916x + 0,0122R2 = 0,9999110,00%100,00%90,00%Найдено, %80,00%70,00%60,00%50,00%40,00%30,00%20,00%10,00%0,00%0%10%20%30%40%50%60%70%80%90%100%110%120%Введено, %Рисунок 21. Оценка линейности методики количественного определения мелоксикама в нормализованных координатах «введено-найдено» (FaSSIF рН6,5)Коэффициент корреляции линейной регрессии r=0,9999.Y-intercept (значение точки пересечения с осью ординат) составляет0,0122.Slope (угол наклона кривой) равен 0,9916.3.5.4.

ПравильностьПравильность методики характеризуется отклонением среднего результата определений, выполненных с ее использованием, от значения, принимаемого за истинное.109Валидируемая методика признается правильной, если значения, принимаемые за истинные, лежат внутри доверительных интервалов соответствующих средних результатов анализов, полученных экспериментально по данной методике.Правильность оценивали с применением подхода рассмотрения результатов изучения линейности валидируемой методики: если свободный член вуравнении, статистически достоверно не отличается от нуля, то использование такой методики дает результаты, свободные от систематической ошибки.3.5.5. Прецизионность.Прецизионность методики характеризуется рассеянием результатов,получаемых с ее использованием, относительно величины среднего результата.

Мерой такого рассеяния является величина стандартного отклонения результата отдельного определения, полученная для выборки достаточнобольшого объема.Прецизионность оценивается для любой методики количественногоопределения по результатам не менее 3 определений для каждого из 3 уровней определяемых величин (нижнего, среднего и верхнего), лежащих в пределах аналитической области методики.Таблица 46Прецизионность, проба 1(inter-day)Кодпробывведено(мкг/мл)найдено(мкг/мл)найдено (мкг/мл),среднее значение(n=3)S.D.RSD,%ε, %3,230,051,450,7811,500,080,742,6817,560,271,54-0,253,1761-20%3,23,23043,268811,54081-70%11,211,557611,40321-110%17,617,867211017,401617,3984Таблица 47Прецезионность, проба 2 (intra-day)Кодпробы2-20%введено найдено(мкг/мл) (мкг/мл)найдено (мкг/мл),среднее значение(n=6)S.D.RSD, %ε, %3,270,072,092,2611,330,241,861,0317,700,241,380,563,36243,23,263,336811,09122-70%11,211,163211,137617,70562-110%17,617,886417,936Результаты определения правильности и прецизионности соответствовали нормам [2Ошибка! Источник ссылки не найден.,113], поскольку длявсех уровней концентраций величины относительного стандартного отклонения (RSD, %) не превышали 2% и относительной погрешности (ε, %) непревышали 5 %3.5.6.