Автореферат (Изучение высвобождения лекарственных веществ в биорелевантных средах), страница 3

Время удерживания3 мин. Параллельно анализировалираствора1.2510.750.5соответствующейсреде.Типичная0.25хроматограммапредставленанарисунке 5.Валидация методики КО.0200225250275300325350375400Wavelength (nm)Рисунок 4. Спектр поглощения стандартногораствора мелоксикамаВалидационные характеристикиустанавливались при проведении анализа на модельной смеси и стандартныхрастворах соответствующей концентрации. На хроматограммах биорелевантнойсреды FaSSIF и модельной смеси-плацебо отсутствуют пики, по времениудерживания совпадающие с пиком действующего вещества, что являетсяподтверждением специфичности разработанной методики.14Линейность результатов, полученных по разработанной методике вдиапазоне содержания действующего вещества 20% - 110% от заявленногосодержания действующего веществаподтвержденамодельныхпутемсмесейвышеуказанныманализаплацебоссодержаниемдействующеговеществапоследующимипостроениемкалибровочнойкривой.ВеличинаРисунок 5.

Типичная хроматограмма образцамелоксикама в среде FaSSIFкоэффициента корреляции r = 0,999. Уравнение калибровочной прямойy=0,0122+0,9916x.Результаты определения правильности и прецизионности соответствовалинормам, поскольку для всех уровней концентраций величины относительногостандартного отклонения (RSD, %) не превышали 2% и относительнойпогрешности (ε, %) не превышали 5 %.Таблица 4Правильность и прецизионность, проба 1(inter-day)Код пробы1-20%1-70%1-110%введено(мкг/мл)3,211,217,6найдено (мкг/мл), среднеезначение (n=3)3,2311,5017,56S.D.RSD, %ε, %0,050,080,271,450,741,540,782,680,25Таблица 5Правильность и прецизионность, проба 2 (intra-day)Код пробы2-20%2-70%2-110%введено(мкг/мл)3,211,217,6найдено (мкг/мл), среднеезначение (n=6)3,2711,3317,70S.D.RSD, %ε, %0,070,240,242,091,861,382,261,030,56По результатам проведенных валидационных испытаний можно сделатьвывод о том, что разработанная методика определения мелоксикама вбиорелевантной среде FaSSIF методом ВЭЖХ является пригодной.15Изучениесравнительнойкинетикирастворенияпроводилосьвфармакопейной среде калий-фосфатный буфер pH 8,0 и в биорелевантных средахFaSSIF pH 6,5, SLS 0,05% pH 6,5, SLS 0,1% pH 6,5 и в растворе blank FaSSIF pH 6,5.Условия:Тип аппарата – «Лопастная мешалка»Число оборотов – 75 об/минТемпература – 37 ± 0,5°ССреда растворения – фармакопейная и биорелевантные средыОбъем среды растворения – 900 млВременные точки – 10, 15, 20, 30, 45, 60 минКоличественное определение – ВЭЖХ с УФ-детектированием λ=362 нм.Для получения статистически достоверных результатов исследованиепроводили 6 раз для каждого препарата.Всепрепаратымелоксикамахарактеризуютсяполнымпрофилемвысвобождения в фармакопейной среде.

Следует иметь в виду, что калийфосфатныйбуфер,рекомендованныйдляисследованиявысвобождениямелоксикама, имеет значение рН 8,0, что не соответствует значению рНбиологических жидкостей ЖКТ человека.Достаточно полным было высвобождение ДВ из ТДЛФ в биорелевантныхсредах (FaSSIF, SLS), что позволяет использовать их как альтернативуфармакопейной среде.Таблица 6Результаты изучения высвобождения действующего вещества из изучаемыхЛС мелоксикама для временной точки 15 минВысвобождение мелоксикама, %ПрепаратМовалисМелоксикам ТеваКалий-фосфатныйбуфер79,7684,49blank FaSSIFFaSSIFSLS 0,05%SLS 0,1%40,2439,1960,0649,2074,1865,6476,6564,12Полученные результаты являются достоверными, поскольку относительныестандартные отклонения (RSD, %) не превышали 20% для первой временнойточки и 10% для всех последующих временных точек для каждого из препаратов.16МовалисМелоксикам Тева100%100%50%50%0%020blank FaSSIF0.05% SLSКалий-фосфатный буфер400%60FaSSIF0,1% SLS020blank FaSSIF0.05% SLSКалий-фосфатный буфер40FaSSIF0,1% SLS60Рисунок 6.

Профили растворения препаратов мелоксикамаИз полученных результатов следует, что среды FaSSIF, 0,05% SLS и 0,1%SLS являются достаточно дискриминирующими и обеспечивают полноевысвобождение ДВ.Урсодезоксихолиевая кислота.Количественное определение урсодезоксихолиевой кислоты проводили нажидкостном хроматорафе Waters Alliance 2695 с диодно-матричным детектором.Условия хроматографирования: хроматографическая колонка LiChrospher 100 RP18, 5 мкм, 250 x 4,6 мм; комнатная температура; подвижная фаза: 0,075 M растворKH2PO4, значение pH доводили до 3,0 ортофосфорной кислотой (85%) –ацетонитрил (50:50); скорость потока – 1,2 мл/мин; детектирование при 214 нм;время анализа 8,5 мин.

Время удерживания урсодезоксихолиевой кислоты припроведении анализа в данных условиях составляло около 7 мин. Параллельноанализировалистандартныерастворыурсодезоксихолиевойкислотысконцентрацией 0,5 мг/мл в соответствующей среде.Валидация методики КО.Валидационные характеристики устанавливались при проведении анализа намодельной смеси и стандартных растворах соответствующей концентрации.На хроматограммах биорелевантной среды FaSSIF и модельной смесиплацебо отсутствуют пики, по времени удерживания совпадающие с пиком17действующеговещества,чтоявляетсяподтверждениемспецифичностиразработанной методики.Линейность результатов, полученных по разработанной методике вдиапазонесодержаниядействующего вещества 10% 110% от заявленного содержанияподтвержденапутеммодельныханализасмесейвышеуказаннымдействующегоссодержаниемвеществапоследующимипостроениемкалибровочной кривой.

Величинакоэффициента корреляции r =0,999. Уравнение калибровочнойРисунокпрямой y=0,003+1,009x.Результатыопределения7.Типичнаяхроматограммаобразцаурсодезоксихолиевой кислоты в среде FaSSIFправильности и прецизионности соответствовали нормам, поскольку для всехуровней концентраций величины относительного стандартного отклонения (RSD,%) не превышали 2% и относительной погрешности (ε, %) не превышали 5 %.Таблица 7Правильность и прецизионность, проба 1(inter-day)Код пробы1-10%1-70%1-110%введено(мкг/мл)50350550найдено (мкг/мл), среднеезначение (n=3)48,26351,24554,20S.D.RSD, %ε, %0,070,441,270,150,120,23-3,480,350,76Таблица 8Правильность и прецизионность, проба 2 (intra-day)Код пробы2-10%2-70%2-110%введено(мкг/мл)50350550найдено (мкг/мл), среднеезначение (n=6)48,62351,25555,5718S.D.RSD, %ε, %0,420,591,750,870,170,31-2,760,361,01По результатам проведенных валидационных испытаний можно сделатьвывод о том, что разработанная методика определения урсодезоксихолиевойкислоты в биорелевантной среде FaSSIF методом ВЭЖХ является пригодной.Изучениесравнительнойкинетикирастворенияпроводилосьвфармакопейной среде калий-фосфатный буфер pH 8,0 и в биорелевантных средахFaSSIF pH 6,5.Условия:Тип аппарата – «Лопастная мешалка»Число оборотов – 75 об/минТемпература – 37 ± 0,5°ССреда растворения – калий-фосфатный буфер pH 8,0 и биорелевантнаясреда FaSSIF pH 6,5Объем среды растворения – 1000 млВременные точки – 10, 15, 20, 30, 45 минКоличественное определение – ВЭЖХ с УФ-детектированием λ=214 нм.Для получения статистически достоверных результатов исследованиепроводили 6 раз для каждого препарата.Для всех препаратов урсодезоксихолиевой кислоты отмечено полное ибыстрое высвобождение в фармакопейной среде.

Следует иметь в виду, чтокалий-фосфатный буфер, рекомендованный для оценки растворения препарата,имеет рН 8,0, не соответствует значению рН биологических жидкостей ЖКТчеловека.Таблица 9Результаты оценки высвобождения действующего вещества из изучаемыхЛС урсодезоксихолиевой кислоты для временной точки 15 минПрепаратТаблетки 500 мгКапсулы 250 мгВысвобождение урсодезоксихолиевой кислоты, %Калий-фосфатный буферFaSSIF93,1222,0067,3924,51Полученные результаты являются достоверными, поскольку относительныестандартные отклонения (RSD, %) не превышали 20% для первой временнойточки и 10% для всех последующих временных точек для каждого из препаратов.19Таблетки 500 мгКапсулы 250 мг100%100%80%80%60%60%40%40%20%20%0%0%010FaSSIF20304050600Калий-фосфатный буфер1020FaSSIF30405060Калий-фосфатный буферРисунок 8.

Профили растворения препаратов урсодезоксихолиевой кислотыВрезультатепроведенногоисследованияустановлено,чтодлямалорастворимого в физиологическом диапазоне рН и мало ионизируемого покарбоксильной группе вещества на примере урсодезоксихолиевой кислоты,биорелевантные имеют низкую дискриминаторную силу, полного высвобожденияне обеспечивают, и в случае применения биорелевантных сред значениявысвобождения ДВ лимитируются растворимостью субстанции.ОБЩИЕ ВЫВОДЫ1.На основании имеющихся в литературе данных об использованиибиорелевантных сред для проведения испытаний по оценке высвобождениядействующего вещества из твердой дозированной лекарственной формыосуществлён научно-обоснованный выбор объектов исследования, относящихсяко 2 классу БКС и характеризующихся как малорастворимые и практическинерастворимые соединения: слабых кислот (мелоксикам), слабых оснований(нифедипин) и практически нерастворимых веществ (урсодезоксихолиеваякислота).2.Разработаныопределениянифедипина,унифицированныемелоксикама,методикиколичественногоурсодезоксихолиевойкислотывфармакопейных и биорелевантных средах растворения: нифедипин – ВЭЖХ-УФ238 нм, мелоксикам – ВЭЖХ-УФ 362 нм, урсодезоксихолиевая кислота – ВЭЖХУФ 214 нм.203.Проведенаопределениявалидациянифедипина,фармакопейныхиразработанныхмелоксикама,биорелевантныхметодикколичественногоурсодезоксихолиевойсредахрастворенияпокислотывкритериям:специфичность, линейность, правильность, прецизионность.

Данные, полученныев результате всех валидационных испытаний, отвечают заданным критериямприемлемости.Аналитическийдиапазонконцентрацийдляпрепаратовнифедипина составляет 10% - 110% от заявленного содержания, для препаратовмелоксикама 20% - 110% и для препаратов урсодезоксихолиевой кислоты 10% 110% от заявленного содержания. Показана пригодность разработанных методикдля количественного определения действующих веществ при проведениисравнительного теста кинетики растворения в биорелевантных средах длятвердых дозированных лекарственных форм.4.В результате изучения высвобождения действующих веществ извыбранных объектов исследования в фармакопейных и биорелевантных средахрастворения установлено, что для препаратов нифедипина фармакопейные средырастворения не обладают достаточной дискриминирующей способностью припроведенииисследованияиспользоватькинетикибиорелевантныефармакопейные,такирастворения,среды.Длябиорелевантныепоэтомупрепаратовсредыцелесообразномелоксикамаявляютсякакдостаточнодискриминирующими и обеспечивают полное высвобождение действующеговещества.