Автореферат (Изучение высвобождения лекарственных веществ в биорелевантных средах), страница 2

Приведено 60 таблиц, 51 рисунок.Публикации.Основное содержание работы отражено в 9 публикациях, из них 3 – визданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫМатериал и методы исследованияВ качестве объектов исследования были выбраны оригинальные ивоспроизведенные ЛС, содержащие ДВ, отнесённые ко 2 классу БКС: нифедипин,мелоксикам и урсодезоксихолиевая кислота.Нифедипин: Коринфар 10 мг, таблетки. Кордафлекс 10 мг, таблетки.Кордипин 10 мг, таблетки.Мелоксикам: Мовалис 15 мг, таблетки. Мелоксикам Тева 15 мг, таблетки.Урсодезоксихолиевая кислота: таблетки, покрытые пленочной оболочкой 500мг, капсулы 250 мг.8Используемые в исследовании стандартные образцы были предоставленыФилиалом«Клиническаяфармакология»Федеральногогосударственногобюджетного учреждения науки «Научный центр биомедицинских технологийФедерального медико-биологического агентства»:Нифедипин (Nifedipine, USP Reference Standard, Cat.

No 1463508, Lot L0J059);Мелоксикам (Meloxicam, USP Reference Standard, Cat. No 1379401, Lot R02670);Урсодезоксихолиевая кислота (Ursodiol, USP Reference Standard, Cat. No 1707806,Lot H0H204).В работе использовалось следующее оборудование:Высокоэффективный жидкостной хроматограф «Shimadzu» с UV-VISспектрофотометрическим детектором SPD-6AV и насосом LC-10AD (Япония);Высокоэффективный жидкостной хроматограф Waters Alliance 2695 с диодноматричным детектором 2998 (США); UV-Vis спектрофотометр «Agilent 8453»(США); прибор «Erweka DT-600», тип «Лопастная Мешалка» (Германия); прибордля проведения теста «Растворение» Sotax, AT7 Smart (Швейцария); рН-метр«MetroHM» (Швейцария); весы аналитические «ViBRA HT» (Япония); анализаторжидкости Five FE20 в комплекте с электродом LE409; весы лабораторные MettlerToledo, AL 204 (Швейцария); аппарат для фильтрации и дегазации растворов Waters,Solvent Clarification Kit (США); ванна ультразвуковая Сапфир, ТТЦ 2,8 л (Россия);магнитная мешалка IKA Basic, Финляндия.В работе использовались следующие реактивы:ВодадистиллированнаяГОСТ6709-72;Хлористоводороднаякислота,квалификация ХЧ, ГОСТ 3118-77; Калий фосфорнокислый однозамещенный (калийдигидрофосфат) КH2PO4, квалификация ЧДА, ГОСТ 4198-75; Натрия гидроксид,классификация ХЧ, ГОСТ 4328-77; Натрия лаурилсульфат (SLS), квалификация ХЧ,ТУ 2481-023-50199225-2002; Натрий хлористый (натрия хлорид), квалификация ЧДА,ГОСТ 4233-77; Натрий фосфорнокислый однозамещенный двухводный (натрийдигидрофосфат дигидрат) NaH2PO4x2H2O, квалификация ЧДА ГОСТ 245-76; Спиртэтиловый 96 %, квалификация ХЧ, ГОСТ Р 51652-2000; Порошок SIF Powder дляприготовления среды растворения FaSSIF (состав: лецитин 0,75 (мM), натриятаурохолат 3,0 (мM), натрия хлорид 105,9 (мM), натрия дигидрофосфат 28,4 (мM),9натрия гидроксид 8,7 (мM)), ePhares, Швейцария (серия 1012 054/03, годен до09.2015); Метанол для ВЭЖХ, ГОСТ 6995-77; Ацетонитрил для ВЭЖХ, ТУ 6-091092-83.Результаты исследованияСреда растворения blank FaSSIF рН 6,5 представляет собой буферный раствор,не содержащий лецитина и натрия таурохолата и включающий в себя натриягидроксид, натрия дигидрофосфата дигидрат и натрия хлорид.Среда растворения FaSSIF рН 6,5 готовилась путём добавления коммерческидоступной смеси SIF Powder к blank FaSSIF рН 6,5.Предложенныевработеподобранныеэмпирическимпутёмсредыпредставляют собой растворы SLS различной концентрации в blank FaSSIF рН 6,5.Для оценки высвобождения ДВ из ТДЛФ было необходимо разработатьметодики их количественного определения (КО) в средах растворения, с этой цельюна основании литературных данных и собственных эмпирических исследованияхбыли разработаны унифицированные условия КО в каждой из предложенной средрастворения.Препараты нифедипина.Количественноеопределениенифедипина проводили на жидкостномхроматографеShimadzuукомплектованномспектрофотометрическимSPD-6AVинасосом(Япония),UV-VISдетекторомLC-10AD.Условия: хроматографическая колонкаРисунок 1.

Спектр поглощения стандартногоμBondapack Phenyl column, 300 х 3,9раствора Нифедипинамм, 5 мкм (Waters, Ирландия); комнатная температура; подвижная фаза:ацетонитрил — 0,03% водный раствор фосфорной кислоты (40:60); скоростьпотока–1мл/мин;детектированиепри238нм(данныеполученыэкспериментально, спектр поглощения стандартного раствора нифедипинапредставлен на рисунке 1); время анализа 10 мин. Время удерживаниянифедипина при проведении анализа в данных условиях составляло около 7,510мин.Параллельноконцентрациейанализировали0,02мг/млвстандартныерастворысоответствующейсреде.нифедипинасХроматограммапредставлена на рисунке 2.Валидация методики КО.Валидация разработанных методик проводилась согласно действующимроссийским и зарубежным руководствам (руководства FDA и EMA, «Валидацияаналитических методик для производителей лекарств», М., 2008).Валидационные характеристики устанавливались при проведении анализа намодельной смеси и стандартных растворах соответствующей концентрации.На хроматограммах биорелевантной среды FaSSIF и модельной смеси-плацебоотсутствуют пики, по времени удерживания совпадающие с пиком действующеговещества, что является подтверждением специфичности разработанной методики.Линейностьрезультатов,полученных по разработанной методикев диапазоне содержания действующеговещества 10% - 110% от заявленногосодержанияанализаподтвержденамодельныхвышеуказаннымдействующегопутемсмесейссодержаниемвеществаиРисунок 2.

Типичная хроматограмма образцанифедипина в среде FaSSIF.последующим построением калибровочной кривой. Величина коэффициентакорреляции r = 0,999. Уравнение калибровочной прямой y=0,011+x.Результаты определения правильности и прецизионности соответствовалинормам, поскольку для всех уровней концентраций величины относительногостандартного отклонения (RSD, %) не превышали 2% и относительнойпогрешности (ε, %) не превышали 5 %.Таблица 1Правильность и прецизионность, проба 1(inter-day)Код пробы1-10%1-70%1-110%введено(мкг/мл)21422найдено (мкг/мл), среднеезначение (n=3)2,0914,2522,3511S.D.RSD, %ε, %0,020,170,171,081,180,784,461,761,60Таблица 2Правильность и прецизионность, проба 2 (intra-day)Код пробы2-10%2-70%2-110%введено(мкг/мл)21422найдено (мкг/мл), среднеезначение (n=6)2,1014,4022,39S.D.RSD, %ε, %0,020,220,120,781,500,534,752,821,77По результатам проведенных валидационных испытаний можно сделатьвывод о том, что разработанная методика определения нифедипина вбиорелевантной среде FaSSIF методом ВЭЖХ является пригодной.Изучение сравнительной кинетики растворениятаблеток нифедипинапроводилось в фармакопейной среде 0,1 М HCl pH 1,2 и в биорелевантных средахFaSSIF pH 6,5, SLS 0,05% pH 6,5, SLS 0,1% pH 6,5 и в растворе blank FaSSIF pH 6,5.Условия:•Тип аппарата – «Лопастная мешалка» (сосуды тёмного стекла)•Число оборотов – 75 об/мин•Температура – 37 ± 0,5°С•Среда растворения – фармакопейная и биорелевантные среды•Объем среды растворения – 500 мл•Временные точки – 10, 15, 20, 30, 45, 60 мин•Количественное определение – ВЭЖХ с УФ-детектированием λ=238 нм.Для получения статистически достоверных результатов исследованиепроводили 6 раз для каждого препарата.Для всех препаратов нифедипина отмечен низкий уровень высвобождениядействующего вещества в фармакопейной среде 0,1 М HCl pH 1,2 (не более 40%от дозировки).

Такой же низкий уровень растворения был характерен и для средыblank FaSSIF pH 6,5, который, по сути, представляет собой аналог фосфатногобуферного раствора. В то же время, использование биорелевантных средприводило к увеличению уровня высвобождения нифедипина из лекарственныхформ, причем наиболее близкий профиль растворения к биорелевантной средеFaSSIF pH 6,5 был отмечен для 0,1% SLS pH 6,5.12Таблица 3Результаты изучения высвобождения действующего вещества из изучаемых ЛСнифедипина в различных средах растворения для временной точки 60 минВысвобождение нифедипина, %0,1 М HCl blank FaSSIFFaSSIFSLS 0,05%SLS 0,1%Коринфар22,9120,6933,9228,3338,63Кордафлекс32,5932,4957,6350,1267,64Полученные результаты являются достоверными, поскольку относительныеПрепаратстандартные отклонения (RSD, %) не превышали 20% для первой временнойточки и 10% для всех последующих временных точек для каждого из препаратов.КоринфарКордафлекс50%80%40%60%30%40%20%20%10%0%0%0102030blank FaSSIFFaSSIF0,1% SLSHCl40500600.05% SLS102030blank FaSSIFFaSSIF0,1% SLSHCl4050600.05% SLSРисунок 3.

Профили растворения препаратов нифедипина в различных средахПолученныерезультатыпозволяютсделатьследующиенаучно-обоснованные заключения:•FaSSIF и 0,05% SLS обеспечивают одинаковый профиль растворениядля препаратов Коринфар и Кордафлекс;•0,05% SLS - достаточно дискриминирующая среда для препаратовКордафлекс и Коринфар;•FaSSIF - достаточно дискриминирующая среда для препаратовКордафлекс и Коринфар;•0,1% SLS - достаточно дискриминирующая среда для препаратовКордафлекс и Коринфар.

Однако в данной среде высвобождение происходитслишком быстро, что может привести к ложноположительным результатам.13Таким образом, предложенная среда 0,05% SLS может быть рекомендованадля проведения СТКР при разработке новых ЛС нифедипина наряду с оригинальнойбиорелевантной средой FaSSIF.Препараты мелоксикама.Количественное определение мелоксикама проводили на жидкостномхроматорафеShimadzu(Япония),укомплектованномUV-VISспектрофотометрическим детектором SPD-6AV и насосом LC-10AD. Условия:хроматографическая колонка mBondapack Phenyl column, 300 х 3,9 мм, 5 мкм(Waters, Ирландия); комнатная температура; подвижная фаза: ацетонитрил-вода(30:70); скорость потока – 1 мл/мин; детектирование при 362 нм (данные полученыэкспериментально,спектрпоглощенияпредставлен на рисунке 4); времястандартного2мелоксикама при проведении анализа1.75в данных условиях составляло околоконцентрацией0,016мг/млв1.5Absorbance (AU)стандартные растворы мелоксикама смелоксикама2.25анализа 5 мин.