Диссертация (Исследования по разработке и стандартизации комплексного урологического растительного средства), страница 29

6Хроматография.Приготовление растворов.Раствор стандартного образца (СО) лютеолин-7-гликозида. Около 0,05 гСО лютеолин-7-гликозида растворяют в мерной колбе (объемом 100 мл) в 50 млсмеси растворителей: этилацетат-метанол (95:5) и полученный раствор доводят дометки тем же растворителем, перемешивали.Раствор СО арбутина. Около 25 мг СО арбутина растворяют в мерной колбе(объемом 100 мл) в 10 мл метанола, перемешивают.Раствор СО гидрохинона. Около 25 мг СО гидрохинона растворяют в мернойколбе (объемом 100 мл) в 10 мл метанола, перемешивают.Раствор СО галловой кислоты. Около 25 мг СО галловой кислотырастворяют в мерной колбе (объемом 100 мл) в 10 мл метанола, перемешивают.Раствор СО фруктозы.

Около 0,05 г СО фруктозы растворяют в мернойколбе (объемом 100 мл) в 5 мл воды и доводят до метки 50% этанолом,перемешивают.а) Аналитическую пробу сбора измельчают до величины частиц сырья,проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Далее отмеряют точнуюнавеску сбора массой 1,0 г, помещают в колбу (объемом 100 мл), добавляют 10 мл70% этилового спирта. Колбу с навеской в спиртоводной смеси соединяют собратным холодильником и нагревают на кипящей водяной бане с моментазакипания в течение 1 ч.

Охлаждают при комнатной температуре в естественныхусловиях. После охлаждения проводят фильтрование через фильтровальнуюбумагу (испытуемый раствор). Испытуемый раствор упаривают на водяной бане иостаток растворяют в 2 мл смеси этилацетат-метанол (95:5).На линию старта хроматографической пластины «Kieselgel 60 F254» (Merck,Германия) размером 20×20 см наносят точкой 20 мкл испытуемого раствора ирядом 20 мкл раствора СО лютеолин-7-гликозида. Предварительно камеру длявосходящей тонкослойной хроматографии насыщают смесью растворителей212ФС 42-С.

7изопропанол-муравьиная кислота-вода (2:5:5), затем размещают пластину«Kieselgel 60 F254» с нанесенными пробами. Окончание элюирования фиксируютвизуально по финишной линии, когда растворитель пройдет 80-90% от линиистарта.Далее пластину вынимают из камеры, высушивают при комнатнойтемпературе в вытяжном шкафу до полного улетучивания растворителей. Затемобрабатывают 2% раствором алюминия хлорида (III) в 95% этаноле и выдерживаютв сушильном шкафу при температуре 100-105ºС в течение 5 минут ипросматривают в УФ-свете.На хроматограмме СО лютеолин-7-гликозида должна обнаружится желтаязона адсорбции.На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаружится зонаадсорбции, окрашенная в желтый цвет, на уровне зоны адсорбции нахроматограмме раствора СО лютеолин-7-гликозида. Допускается обнаружениедополнительных зон адсорбции (флавоноиды).б) Аналитическую пробу сбора измельчают до величины частиц сырья,проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

Далее отмеряют точнуюнавеску сбора массой 2,5 г, помещают в колбу (объемом 50 мл), добавляют 25 млсмеси метанол-вода (1:1). Колбу с навеской в спиртоводной смеси соединяют собратным холодильником и нагревают на кипящей водяной бане с моментазакипания в течении 10 мин. Для отделения частиц сырья от полученной вытяжкипроводят фильтрование через фильтровальную бумагу в мерную колбувместимостью 100 мл.

Полученный объем вытяжки доводят до метки тем жерастворителем (испытуемый раствор).На линию старта хроматографической пластины «Kieselgel 60 F254» (Merck,Германия) размером 15×20 см наносят 20 мкл испытуемого раствора и 10 мклрастворов СО: арбутина, гидрохинона, галловой кислоты. Предварительно камерудля восходящей тонкослойной хроматографии насыщают смесью растворителеймуравьиная кислота-вода-этилацетат (6:6:88), затем размещают пластину213ФС 42-С.

8«Kieselgel 60 F254» с нанесенными пробами. Окончание элюирования фиксируютвизуально по финишной линии, когда растворитель прошел 80-90% от линиистарта. Далее пластину вынимают из камеры, помещают в сушильный шкаф ирастворитель удаляют при температуре 100-105°C. Хроматограмму вначалеобрабатывают 1% раствором дихлорхинонахлоримида в метаноле и затем 2%раствором натрия карбоната безводным.После детектирования хроматограммы наблюдают появление 2-х зонголубого цвета (арбутин), (гидрохинон) и зоны коричневого цвета (галловаякислота).На хроматограмме СО арбутина должна обнаружится голубая зонаадсорбции; СО гидрохинона – голубая; СО галловой кислоты – коричневая.На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаружится 2 зоныадсорбции, окрашенные в голубой цвет, на уровне зон адсорбции нахроматограмме растворов СО арбутина и гидрохинона и зона адсорбции,окрашенная в коричневый цвет на уровне зоны адсорбции на хроматограммераствора СО галловой кислоты.

Допускается обнаружение дополнительныхголубых и коричневых зон адсорбции.в) Аналитическую пробу сбора измельчают до величины частиц сырья,проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Далее отмеряют точнуюнавеску сбора массой 1,0 г, помещают в колбу (объемом 200 мл), добавляют 70 мл50% этилового спирта. Колбу с навеской в спиртоводной смеси соединяют собратным холодильником и нагревают на кипящей водяной бане с моментазакипания в течении 1 ч. Охлаждают при комнатной температуре в естественныхусловиях. После охлаждения для отделения частиц сырья от полученной вытяжкипроводят фильтрование через фильтровальную бумагу в мерную колбувместимостью50мл.Полученныйобъемрастворадоводятдометкисоответствующим растворителем – 50% этиловым спиртом (испытуемый раствор).214ФС 42-С. 9На линию старта хроматографической пластины «TLC Silicagel 60 F254»размером 15×20 см наносят точкой 20 мкл испытуемого раствора и рядом 20 мклраствора СО фруктозы.

Предварительно камеру для восходящей тонкослойнойхроматографиинасыщаютсмесьюрастворителейпиридин-этилацетат-вода(20:60:40), затем размещают пластину «TLC Silicagel 60 F254» с нанесеннымипробами. Окончание элюирования фиксируют визуально по финишной линии,когда растворитель пройдет 80-90% от линии старта. Далее пластину вынимают изкамеры, высушивают на воздухе и обрабатывают проявляющим реагентом: тимолсерная кислота конц.-спирт этиловый 95% (0,5:5:95), выдерживают 10 мин всушильном шкафу при 100-105°С.На хроматограмме СО фруктозы должна обнаружится красно-фиолетоваязона адсорбции.На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаружится зонаадсорбции, окрашенная в красно-фиолетовый цвет, на уровне зоны адсорбции нахроматограмме раствора СО фруктозы. Допускается обнаружение дополнительныхзон адсорбции (сахара).Арбутин.

Не менее 1,3%.Сумма флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-гликозид. Не менее 0,4%.Сумма полисахаридов в пересчете на фруктозу. Не менее 1,7%.Экстрактивные вещества, извлекаемые водой. Не менее 21%.Влажность. Не более 12%.Зола общая. Не более 14%.Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 5%.Измельченность. Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиямиразмером 7 мм, – не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиямиразмером 0,18 мм, – не более 5%.Посторонние примесиОрганическая примесь. Не более 1,5%.215ФС 42-С. 10Минеральная примесь. Не более 1%.Однородность массы для недозированного сбора. В соответствии стребованиями ОФС «Отбор проб лекарственного растительного сырья илекарственных растительных препаратов».Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определениесодержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственныхрастительных препаратах».Тяжелые металлы.

В соответствии с требованиями ОФС «Определениесодержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье илекарственных растительных препаратах».Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС«Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительномсырье и лекарственных растительных препаратах».Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС«Микробиологическая чистота».Количественное определение.1. Определение содержания арбутина.Аналитическую пробу сбора измельчают до величины частиц сырья,проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, помещают в колбу объёмом100 мл, добавляют 50 мл воды очищенной и далее проводят определениесодержания арбутина согласно методике ГФ XI изд., вып.

2, ст. 27.2. Определение содержания суммы флавоноидов в пересчете налютеолин-7-гликозид.Приготовление раствора.Раствор СО лютеолин-7-гликозида: точную навеску СО лютеолин-7гликозида (массой 0,03 г) помещают в мерную колбу (объемом 100 мл), растворяютв 50 мл 70% этанола и доводят тем же растворителем до метки – 70% этиловымспиртом, перемешивают.216ФС 42-С.11Аналитическую пробу сбора измельчают до величины частиц сырья,проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. Около 10,0 г (точнаянавеска) измельченного сбора помещают в колбу со шлифом объёмом 200 мл,добавляют 50 мл 70% этилового спирта.

Колбу с навеской в спиртоводной смесисоединяют с обратным холодильником и нагревают на кипящей водяной бане смомента закипания в течение 1 ч. После охлаждения для отделения частиц сырьяот полученной вытяжки проводят фильтрование через фильтровальную бумагу вмерную колбу (объемом 100 мл). Экстракцию повторяют с 50 мл 70% этиловогоспирта в течение 1 ч.