Диссертация (Взаимосвязь маркеров нитроксидпродуцирующей системы эндотелия с сердечно-сосудистыми факторами риска у больных эссенциальной артериальной гипертензией), страница 8

Нормальные показатели ИМТ – 18,5- 24,9кг/м2; избыточная масла тела –25,0 – 29,9 кг/м2, ожирение I степени – 30-34,9 кг/м2, ожирение II степени –35-39,9 кг/м2, ожирение III степени> 40 кг/м2[28].Измерение АД проводили непрямым методом Короткова после 15минутного отдыха в положении сидя при помощи ручного сфигмоманометра,трехкратно.

САД определялось при появлении 1 тона (1 фаза тоновКороткова), ДАД – при исчезновении тонов (5 фаза тонов Короткова). Прианализе использовали среднее значение из полученных данных.2.2.2. Лабораторные методы исследованияПоказатели биохимического анализа крови (липидный профиль,глюкоза крови, креатинин и др.) определяли в биохимической лабораторииГКБ№61. Забор крови для лабораторной диагностики проводился излоктевой вены в период между 8.00 и 9.00 часами утра после 12-часовогоголодания.Исследование гормонального профиляЗабор крови у пациентов осуществлялся натощак в охлажденныепробирки с ЭДТА.

Перед забором крови исключались физические нагрузки(бег, подъем по лестнице), эмоциональное возбуждение. Производили44центрифугирование пробирок при скорости 3000 об\мин. В течение 10 мин. Спомощью пипетки отделяли 2 мл надосадочной жидкости, переносили ее втермостойкую пластиковую пробирку и замораживали при температуре -20С.Уровни альдостерона, эстрадиола, лептина исследовали в сыворотке крови спомощью радиоиммунного анализа на приборе Immonotech «BechmanColltercompany».Оценка уровня МАУС целью полуколичественного исследования содержания альбумина вмоче использовались диагностические полоски «УРИСКАН» (фирма «YDDiagnostics», Корея), которые представляют собой пластиковую полоску сприкрепленными тестовыми зонами, с нанесенными на них реактивами.Исследование МАУ проводилось в утренней порции мочи.

Пациентамподробно разъясняли правила и технику проведения процедуры. Утромпациент в подготовленную емкость осуществлял сбор мочи, после чего мыпогружали тест-полоску на 2 сек в мочу и сопоставляли цветовоеокрашивание тест-полоски с цветовой шкалой на упаковке.Исследование уровня NOxДля исследования функционального состояния эндотелия определялиуровень суммарных метаболитов NO (нитритов и нитратов) (NOx) в плазмекрови по методике, предложенной H.Moshage в 1995г [154]. Всем больнымАГ и пациентам из группы контроля определялась концентрация NOx вплазме крови.

Венозную кровь у всех пациентов забирали из кубитальныхвен утром натощак с 8.00 до 9.00. После центрифугирования сывороткукрови замораживали и хранили при температуре -20С. Принцип методаопределения NOx в плазме крови основан на восстановлении нитрата внитрит при участии фермента нитрат-редуктазы и калориметрическомопределении концентрации нитритов по азо-красителю, образующемуся пореакции Грисса. Реакция Грисса основана на 2-х стадийной реакциидиазотирования, в которой кислый NO2 производит нитрозатирующий агент,реагирующий с сульфаниловой кислотой с образованием иона диазония.45Этот ион присоединяется к N – (1-нафтил) этилендиамину с формированиемцветного азо-производного.

Содержание NOx в плазме крови определялиспектрофотометрическим методом, при длине волны 520 нм, на аппаратеD450 Bacman, США.Исследование уровня других маркеров ЭДУ больных АГ и пациентов из группы контроля исследовались средниеконцентрации фактора фон Виллебранда (ФфВ), гомоцистеина (Гц) иэндотелина-1 (Э-1). Уровень ФфВ, Гц и Э-1 определялся в сыворотке кровииммуноферментным анализом, на анализаторе АИФР -01 «Униплан», нааппарате American Diagnostica, США.2.2.3.Исследование структурно-функционального состояния сердцаЭхоКГ исследование проводилось на аппарате Aloka SSD 2000 сиспользованием датчика с частотой импульсов 3,5 МГц.Исследованиепроводилось в М-и В-режимах (одномерное и двумерное изображение) пообщепринятой методике [177].Для оценки анатомических структур сердца измерялись следующиеЭхоКГ – параметры [177]: Конечный систолический размер (КСР) – минимальное расстояниемежду стенками ЛЖ в систолу (N<2,6 см). Конечный диастолический размер (КДР) – максимальное расстояниемежду стенками ЛЖ в диастолу(N<5,5 см). тМЖП в конце диастолы (N<1,1 см). тЗСЛЖ в конце диастолы (N<1,1 см).На основании указанных измерений рассчитывали показатели ММЛЖ,ИММЛЖ и индекс относительной толщина (ИОТ) [Roberto M.Lang, Michelle] ММЛЖ рассчитывали по формуле Devereux B.R.

ReichekN.:ММЛЖ=1,04х[(КДРЛЖ+тМЖП+тЗСЛЖ)3-КДРЛЖ3]-13,6(г).46 ИММЛЖ рассчитывали по формуле: ИММЛЖ=ММЛЖ/S, где S –площадь поверхности тела, рассчитанная по формуле DuBois и DuBois:S=масса тела0,425х рост0,725х 0,007184. ИОТ= (2хТЗМд)/КДР (N≤0,42 )Наличие ГЛЖ диагностировали при ИММЛЖ>115г/м2 у мужчин и >95г/м2 у женщин. При соотнесении ИОТ и ИММЛЖ определяли тип геометриисердца[177]: нормальная геометрия сердца (ИОТ≤0,42, и ИММЛЖ≤115г/м2 умужчин и ≤95 г/м2 у женщин), концентрическое ремоделирование (ИОТ>0,42, и ИММЛЖ≤115г/м2 умужчин и ≤95 г/м2 у женщин), концентрическая гипертрофия (ИОТ>0,42, и ИММЛЖ>115г/м2 умужчин и >95 г/м2 у женщин) эксцентрическая гипертрофия (ИОТ≤0,42, и ИММЛЖ>115г/м2 умужчин и >95 г/м2 у женщин) (рис.

5)Рисунок 5. Различные типы ремоделирования миокарда2.2.4.Исследование почек методом ДСПОпределение СКФСкорость клубочковой фильтрации (СКФ) определяли при проведениидинамической ангионефросцинтиграфии. Исследование проводилось влаборатории радиоизотопных методов (зав. отделением - доцент Н.Е.Гайдамакина) ГКБ №61 г. Москвы. Для оценки СКФ использовали гамма47камеру МВ-9100 с компьютерной системой обработки "Сцинтипро".Динамическая сцинтиграфия почек проводится с использованием ДТПА99тТс (диэтилентриаминпентаацетат меченный технецием-99т).СКФ рассчитывалась по формуле: СКФ = 999,7x(CxOsl)/Q-6,2, где Q введенная активность, С - накопление в почках на 2 минуте, Osl коэффициент ослабления излучения от почек для Тс99т.2.2.5.

Расчет уровня риска по шкале SCOREШкала SCORE (Systematic COronary Risk Evaluation) разработана дляоценки риска смертельного сердечно-сосудистого заболевания в течение 10лет. При расчете используются следующие показатели: пол, возраст, уровеньсистолического АД, курение и уровень общего холестерина. Полученныерезультаты интерпретировались следующим образом: низкий риск <1%,умеренный 1-5%, высокий – 5-10% и очень высокий>10% .Для оценки риска по шкале SCORE использовался калькулятор(калькулятор http://www.klinrek.ru/calcs/score.htm) [81].2.3. Статистический анализ результатовПристатистическойобработкеполученныхрезультатовиспользовались стандартные статистические методы и пакет программ дляперсонального компьютера Microsoft EXCEL 2003 и Statistica 7.0.

Длясравнения групп использовались непараметрические методы статистики. Длясравнения средних показателей между двумя независимыми выборкамиприменяли тест Манн-Уитни. Для множественных межгрупповых сравненийиспользовалирегрессионныйкритерийанализ.Ньюмана-Кейлса,Статистическаямножественныйзначимостьлинейныйразличиймеждукачественными показателями оценивалась с помощью критерия χ2. Дляизучения корреляции использовался непараметрический метод Спирмена.

Повеличине коэффициента корреляции (R) оценивалась сила связи: R≥0,7 –сильная, R от 0,3 до 0,7 – средняя и R≤0,3 – слабая. Направленностькорреляционной связи определялась по знаку коэффициента корреляции.48Для выявления связи между несколькими независимыми переменнымииспользовался множественный линейный регрессионный анализ.Описательная статистика данных по группам представлена в виде M±m(среднее значение ±стандартная ошибка среднего) для нормальногораспределения признаков и в виде Med (95% CI) (медиана и 95%доверительный интервал), для признаков, распределенных отлично отнормального.Статистическидостовернымисчиталисьразличияпривероятности ошибки p <0,05, тенденцией – при 0,05<р<0,1.Показатели выживаемости и развития ССО определялись методомКаплана-Майера.

Влияние качественных параметров на время до развитияССО оценивалось с помощью критерия Гехана-Вилкоксона. Влияниеколичественных показателей на развитие ССО оценивалось методомлинейной регрессии Кокса. Показатели с коэффициентом значимости менее0,05 по результатам анализа множественной регрессионной моделисчитались независимыми прогностическими факторами развития ССО (ИМ,ОНМК, ИБС, смерти от ССЗ). Для этих показателей рассчитывалсяотносительныйриск(ОР).Нескольконезависимыхпрогностическихфакторов ССО объединялись в одну формулу в модели множественнойрегрессии Кокса.

Для данной формулы также определялся ОР.Пороговыезначенияпрогностическихзначимыхпараметровоценивались с помощью ROC – анализа (Receiver Operator Characteristicanalysis) с расчетом площади под характеристической кривой (Area Under theCurve, AUC) с доверительным интервалом (ДИ) 95%, чувствительности с95%ДИ,специфичностис95%ДИ,негативнойпрогностической значимости. Прогностическаяипозитивнойзначимость показателяоценивалась как статистически значимая при условии, если нижняя граница95%ДИ величины AUC составляла более 0,5.49ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.3.1.

Взаимосвязь уровня NOx с наличием АГ и ее характеристиками3.1.1 Взаимосвязь с наличием АГСредняя концентрация NOx в группе контроля составляла 28,3±9,6мкмоль/л. У больных эссенциальной АГ был выявлен достоверно болеевысокий уровень NOx (43,2 ±21,7 мкмоль/л) по сравнению с контрольнойгруппой (p<0,01) (рис. 6, таб. 5).мкмоль/лp<0,0143,228,3Рисунок 6. Уровень NOx у больных АГ и в контрольной группеБыла выявлена положительная корреляционная связь между уровнемNOx и фактом наличия АГ (r=0,31, p<0,05).3.1.2 Взаимосвязь с длительностью и степенью АГДля оценки взаимосвязи характеристик АГ с уровнем NOx больные АГбыли разделены на группы: в зависимости от длительности АГ попятилетиям и по степеням АГ (рис.

7).50Рисунок 7 Распространенность длительности и степеней АГ убольных эссенциальной АГУровень NOx у больных АГ при любой продолжительности был выше,чем в контрольной группе: 37,4±19,7 мкмоль/л при длительности АГ до 5 лет;44,6±20,4 мкмоль/л – при длительности АГ от 5-до 10 лет; 35,9±13,7мкмоль/л - при АГ более 10 лет. Однако, эти различия достигли уровнястатистической достоверности только в группе пациентов с длительностьюАГ 5-10 лет.При этом обращало на себя внимание снижение этогопоказателя в последующие годы развития АГ (рис.