Текст отзыва оппонента 3 (Изменения цитоархитектоники, метаболической активности нейронов и экспрессии эстрогеновых рецепторов в ядрах гипоталамуса и передне-базального комплекса мозга человека при старении, болезни Альцгеймера и сосудистом слабоумии)

Отзь1вофИЦИаЛЬНОГО ОППОНеНТа,доктора медицинских наук, доцента Павлова Артёма Владимировича надиссертацшо Ишуниной Татьяны Александровны на тему «Измененияцитоархитектоники, метаболической активности нейронов и экспрессииэстрогеновых рецепторов в ядрах гипоталамуса и передне-базальногокомплекса мозга человека 1кри старении, болезни Альщеймера и сосудистомслабоумии», представленную на соискание ученой степени докторамедицинских наук по специальности о3.03.04 - клеточная биология,цигология, гистология.Актуальность темы исследованиядиссертащонная работа Т.

А. Ишуниной посвящена изучениюособенностей структурной организации, метаболической актImности,экспрессии эстрогеновых рецепгоров (как классических, так и мутантных) вряде ядер базальной части переднего мозга и ядрах гипоталамуса человека пристарении, болезни Альцгеймера и сосудистой деменции.Последние наблюдения показывают, что населения мира стареет:увеличение доли пожилых jподей в общей численности населения планетыотмечается в большинстве стран. По данным Wогld Population Ageing Rерогt(ООН) в 2017 году численность пожилых людей составила 13% всегонаселения мира.

В последующие два десятилетия общая доля пожилых людейможет достигнуть четверти жигелей планеть1. демокрафическое старениенаселени заставляет рассматривать пожилых жителей планеты в качествеактиЬных участншов политических и экономических программ на всехуровых.

На пу1`и адекватной интегращи пожилых Тподей в жизнь страныстоиг проблема старческого слабоумия. По данным Международногообщества болезни Альцгеймера (Аlzhеimег DeSeaSe IпtеmаtiОпаl) к серединевека в странах мира доля пожилых людей, страдающих деменцией можетдостигнуть 60%. В связи с этим аЕнуальность исследования морфологическогосубстрата развигия старческого слабоумия на пр"ере болезни Аjшщеймераи сосудистой деменции очевидна.Степень обоснованности научных положений и выводов, достоверностьполученных результатовНаучные положения диссертационной работы обоснованы грамотнымметодологическим подходом к исследованию.

достоверность полученныхавтором результатов основана на достаточном объеме выборки, грамотнымпланировании работы, использованием как класСических гистологическихметодов исследования, так и современных методов : иммуногистохимических,компьютерного морфометрического анализа, гибридизации in situ, цепнойполимерной реакции. Результаты исследования проиллюстркрованы болышmdколичеством микрофотографий, графиков и таблиц.Научная обоснованность положений и выводов, сформулированных вдиссертации, подтверждается также проведенным с помощью совреме1шыхадекватных методов статистики корректным анализом фактическогоматериала. НОрмальное распределение данных изучалось с помощью тестовКолмогоровафСмирнова и Шапиро-Уилка.

Различия площади сеченияаш1арата ГОльджи и перикарионов нейронов, а также процентное содержаниеметок с ядерным и щггоплазматическим тшом окрашивания эстрогеновыхрецепторов между мужчинами и женщинами в различных возрастных группахи у пациентов с болезшю Альцгеймера и сосудистой деменцией оценивалисьс помощью одно- и двухфакторного теста АNОVА, а также с помощью тестовКрускалла-УОллиса и Манн-Ушни. для определения коррелящи изучаемыхпоказателей с различными параметрами использовался анализ линейнойрегрессии. Значение р <0. 05 счшалось достовернымРезультаты,полученныеавтором,можнорассматриватькакдостоверные и значимые, а на основании представленного объёмаморфометрических данных можно говоригь о репрезентативностиисследования и возможности экстраполяции результатов на генеральнуюсовокупность.

Выводы логично и закономерно вытекают из содержа1шяработы.Научная новизна исследованияВ диссертационном исследовании Т.А. Ишуниной впервые проведенокомплексное изучение изменешй метаболической активности нейронов рядаядерных образований базальной части конечного мозга и гипоталамуса пристарении и двух патогенетически разных формах деменции: сосудистой иболезни Альщеймера. Убедительно показано, что в выбраш1ых для изученияядрах 1кри старении и в случаях деменции показатели метаболическойактивности нейронов изученных ядер разнонаправле1ш1.

Впервые наматериале головного мозга человека с помо1цью цепной реакщ1и полимеразывь1явлены сплайсинговые варианты эстрогенового рецептора G, а также спомощью поликлональных антител изолирован и изучен сплайсишовыйвариа]Еп` эстрагенового рецептора о МВ1 в серобугорно-сосцевидном ядрепреоптической области гшоталамуса. Кроме того, Определены особенностиэкспрессии ароматазы в иучешш1х ядрах головного мозга человека пристарении, болезни Альцгеймера и сосудистой деменции.Значимость для науки и практикиПредставленная работа имеет несомненную научную и практическуюзначимость.Теоретическая значимость работы состоиг в получениприоритетныхда1шыхобособенностяхскруктурно-функциональныхизменений нейронов ядер гипоталамуса и базальной части конечного мозгачеловека при старении, болезни Альщеймера и сосудистой деменции.Сведения об особенностях экспрессии эстрогеновых рецепторов G вядрах головного мозга при болезни Альщеймера могут быть использованы вкаче ств едиагно стич е скогокр игер ияданнойноз ол огиивпатологоанатомической практике.

Важное значение имеют результаты,полученныесприменениемиммуноцитохимическогоисследованияароматазы, которые вносят вклад в понимание процессов биосинтезаэстрогенов,и могут послужитьосновой для разработкиспособовфармакологической коррекции уровня половых стероидных гормонов влечении и профилактже возрастных нарушений структуры и функщйголовного мозга.Объем и структура диссертациидиссертащя изложена на 284 страницах машшописного текста написана вклассическом стиле и состоит из введения, обзора литературы, описанияматериалов и методов, результатов собственных исследований, обсужденияполученных результатов, выводов и указателя литературы.

Иллюстративныйматериал представлен 38 таблицами, 40 графиками, 4 диаграммами, 43фотомонтажами,включающими161микрофотографшо.Указательлитературы включает 107 отечественных и 412 зарубежных источников.ВО главе «Общая характеристика работы» автором раскрыта и доказанаактуальность темы работы, степень ее разработанности. диссертантом четкосформулирована цель работы, дI1я реализации которой предусмакриваетсярешение 5 конкретных задач. данный раздел содержит сведения о научнойновизне, теоретической и практической значимости кредставленной работы.Здесь же сформулированы положения, выносимые на защиту, которыеобоснованы грамотным методологическим подходом к исследованшо.Представлена информация об апробации работы и публикациях.В главе 1 диссертации представлен аналитичесшй обзор данныхлитературы по изучаемой проблеме. Глава состоит из шести частей, в которыхосвещаются современные данные о ключевых моментах исследования.

Наосновании критического анализа данных в тексте обзора выделенынерешенные вопросы и обоснована необходимость диссертационногоисследования.Глава 2 посвящена описаншо материала и методов исследования. В нейприведена общая характеристика исследованного материала, в необходимомобъеме дано о1шсание использованных методов исследования, среди которыхкл ас сич е скиеметодыгистологиче ског оис сл едов ания ,иммуно1щохимический метод, молекулярно-биологическое исследованиесосцевидных тел,метод гибридизащи in Situ мР1Ж вазопрессина,компьютерный анализ, а также методы статистической обработки, полностьюсоотв етствующие характеру проводимых исследований.Глава 3 содержиг описание полученных результатов, котороесоставляет основную часть работы.

Глава состоиг из семи основнь1х разделов.Вразделе3.1методично приведены результаты исследованияцитоархитектоники ядер гипоталамуса и базальной части конечного мозга пристарении и болезни Альщеймера. Выявлено, что на основании изученияразмеров а1шарата Гольджи и перикарионов, возрастные изменения в ядрахгипоталамуса имеют свои половь1е особенности. Показано отсутствие единойкартины структурных изменений в изученных ядрах головного мозга приболезш Альцгеймер а.В разделе 3.2 представлены даш1ые о изменениях структуры иметаболической активности нейронов в ядрах гипоталамуса и базальной частиконечного мозга при сосудистой деменции. Показано, что описаш1ыеизменения могут быть связаны со снижением мозгового кровотока,обусловленного ишемическими повреждениями и сосудистой патологией упациентов с сосудистой деменцией, а их неоднородность - с различиямианатомической локализации ядер в мозге, что обусловливает их повреждениепри ишеми,Раздел 3.3 посвящен измененим нейро-глиального индекса в ядрахбазальной части конечного мозга и гипоталамуса при болезни Альщеймера исосудистой деменции.

Вьшвлено снmкеIше метаболической анивностинейронов как в случае болезни Альцгеймера, так и при сосудистой демещии.Вместе с тем, 1ри болезни Альцгеймера в базальном ядре Мейнерта авторомрегистрировалась гибель нейронов.В разделе 3.4 представлены данные об увеличении эксперссииэстрогенового рецептора G при болезни Альщеймера в изученных ядрах.Следует отметить, что в данной части работы впервые представлены данные оувеличение иммуно1щохимической эксщtессии эстрогенового рецептора otщщ болезни Альщеймера в медиальном сосцевидном ядре, шо наглядноподтверждено микрофотографиями и диаграммами.Раздеjl 3.5посвящен описанию обнаруженных в медиальномсосцевидном ядре спласешовых форм мР1Ж ЭРG дэ7, Аэ4 и Аэ2. Наличиеданных форм позволило автору предположить отсутствие или снижениеэфективности действия эстрогенов при заместигельной гормональной терапии1щи болезни Альщеймера.Вразделе3.6авторомпРшодятсярезультатысобственныхисследований иммунореактивной ароматазы.

В данной части своей работыавтор впервые приводит сведения о изменениях ее экспрессии в зависимостиот возраста. Кроме того, отмечен феномен мозаичности ее экспрессии в ядрахразличных отделов головного мозга человека.Раздел 3.7 логично посвящен изучению мутантного белка УБВ+1,представляющегособоймаркернарушенияпротеосомы.Авторомубедительно показано, что его экспрессия более выражена при болезниАльцгеймера.Результатыполученныхисследованйпродокумешированымикрофотографиями, графиками и таблицами, что подтверждает шобъективность.