Текст отзыва оппонента 1 (Изменения цитоархитектоники, метаболической активности нейронов и экспрессии эстрогеновых рецепторов в ядрах гипоталамуса и передне-базального комплекса мозга человека при старении, болезни Альцгеймера и сосудистом слабоумии)

отзь1вофициального оппоненга на диссертационную работу Ишуниной Т.А. «Измененияцитоархитекгоники, метаболической аmивности нейронов и экспрессииэстрогеновь1х рецепторов в ядрах гипоталамуса и передне-базального комплексамозга человека при старении, болезни Альцгеймера и сосудистом слабоумии»,представленную к защите на соискание учёной степени докгора медицинских наукпо специальности о3.03.04 - клеточная биология, цитология, гистология вдиссертационный совет д 208.040.01 при ФГАОУ ВО Первый Московскийгосударственный медицинский универсигет им. И.М. Сеченова1. Актуальность избранной темыСлабоумие имеет высокую распространенность в популяции здоровых пожиль1хлюдей.

Проявления этого нейрального феномена описаны достаточно подробно, нолежащие в его основе молекулярные и клеточнь1е механизмы изучены недостаточно. Внейропатологии часть1е признаки деменции зарегистрированы при болезни Альцгеймера исосудистом слабоумии. Вышеупомянутые механизмы наиболее изучены и продолжаютактивно исследоваться при болезни Альцгеймера благодаря разработке и применениюразличных экспериментальных моделей, новь1х исследовательских технологий и пр. , чтооказалось возможнь1м вследствие беспрецедентно мощною привлечения к решению этойпроблемы финансовых ресурсов в высокоразвигь1х с'1ранах.

Тем не менее, изучениецитоархитектоники и метаболической активности нейронов в передне-базальномкомплексе и в ядрах гипоталамуса в мозге человека при старении, болезни Альцгеймера исосудистом слабоумии продолжает сохранять свою актуальность с учетом, во-первых,участия этих структур в познавательнь1х процессах, во-вторь1х, их принадлежности кхолинергическим струкгурам, поражение которьK преимущественно наблюдается приболезни Альцгеймера и, в-третьж, первоочередности при этом заболевании пораженияструкгур передне-базального комплекса и их щjоекций в новую кору и гиппокамп.Половые стероиды могуг влиять на риск возникновения болезни Альцгеймера поразличным путям, а именно ингибируя воспалигельный ответ, модулируя глиаI1ьнь1еклетки и регулируя взаимодействия между различными факгорами риска.

Эстрогенывлияют на нейрогенез и функционалы1ую активность нейральных клеток. Работы,посвященные изучению возрастнь1х изменений экспрессии рецепторов эстрогенов альфа(ЕRG) и бета фRР) в гиппокампе, исследования на мутантньK мь1шах и при помощивирус-опосредованной доставки генов этих рецепторов свидетельствуют о том, что этиизменения сопровождают естественный процесс снижения продукции эстрогенов вгонадах и вь1зывают нарушение транскрипции, функционирования внутриклеточныхсигнальнь1х путей, нейропротекции, синаптогенеза и поддержания нервнш связей.действие эстрогенов на классические геномные механизмы в нейральных клеткахопосредовано через ряд внутриклеточных сигнальных каскадов, что в итоге обеспечиваетнейропротекцию при воздействии стрессоров и др.

повреждающих факгоров, влияет нарост аксонов и синаптическую пластичность.Превентивная заместительная терапия эстрогенами замедляет когнитивнь1енарушения при менопаузе и задерживает возрастное снижение умственнь1х способностей.В этом отношении актуально определение уровня локального синтеза эстрогенов вструктурах мозга, что и было реат1изовано в работе Т.А. Ишуниной путем определенияакгивности ароматазы. Однако положительный эффект терапии эстрогенами снижается свозрастом пациента, а также зависиг от продолжительности гормональной депривации.Все это напрямую может быть связано с изменением экспрессии рецепторов эстрогенов внейральных клетках-мишенях.Изменение экспрессии рецепторов эстрогенов может быть причиной связанного свозрастом снижения памяти и объяснить особеннос'ги реакций на заместителы1уютерапию эстрогенами.

Экспрессия рецепторов эстрогенов детально изучена в гиппокампечеловека. Анализ экспрессии рецепторов эстрогенов в ядрах гипоталамуса и передне-базального комплекса мозга человека не был проведен и требовал углубленногоисследования, что укавывает на актуальность работы Т.А. Ишуниной. В соответствии ссуществующим представлением, экспрессия сплайсинговьк вариантов рецепторовэстрогенов снижает эффективность данного рецепторного входа или полностью отменяетдействие эстрогенов вне зависимости от их содержания в мозге. Именно поэтомупредставлялось важнь1м оценшъ возможность появления этих вариантов рецепторовэстрогенов как потенциальной причины ослабления эффектов данных гормонов поподдержанию функции ядер гипоталамуса и передне-базального комплекса мозга ипредотвращению развития слабоумия. С учетом этих обстоятельств, фрагментдиссертационной работы Т.

А. Ишуниной по анализу рецепторов эстрогенов в ядрахгипоталамуса и передне-базального комплекса мозга человека при старении, болезниАльцгеймера и сосудистом слабоумии также является акгуальным.2. Степень обоснованности научных положений, вьIводов и рекомендаций,сформулированных в диссертацииРезультаты исследования цитоархитекгонических показателей позволил авторусформулировать обоснованное представление о гендернь1х особенностях измененийметаболической активности струкгур гипоталамуса и передне-базаjlьного мозга пристарении, которое сопровождается падением уровня циркулирующих эстрогенов иандрогенов. Автором убедительно продемонс'1рировано увеличение размеров ядер иперикарионов нейронов в базальном ядре, туберомамиллярном ядре и медиальноммамиллярном ядре (кримечаше: чтобы облегчигь понимание материаm, в отзьше использованы те женазвания анатомических с'Iруктур, что и в диссертации, но о1ш не всегда совпадают с их назЕанием вТегmiпоlоgiа Апаtоmiса) у пожиль1х людей, что может указывать на повь1шениеметаболической активности нейронов, участвующих в реализации когнитивных функций.При старении ме'габолическая активность нейронов гипоталамуса и передне-базальногомозга может возрастать или существенно не изменяться.При болезни Альцгеймера зарегистрировано отсутствие закономерности внаправленности сдвигов метаболической акгивности нейронов в различнь1хисследованнь1х ядрах.

При этом заболевании у пациентов в вертикальном ядредиагонального поля синтетическая активность нейронов возрастает, в медиальноммамиллярном ядре и супраоптическом ядре не изменяется, а в базальном ядре итуберомамиллярном ядре снижается ,Сосудистое слабоумие в основном харакгеризуется тенденцией к снижениюметаболической активности нейронов в структурах гипоталамуса и передне-базальногомозга.

При этой форме слабоумия выявленнь1е изменения могут быть следствиемнарушения кровоснабжения головного мозга.Таким образом, полученные Т.А. Ишуниной результаты изученияцитоархитектоники и метаболической акгивности нейронов в передне-базальномкомплексе и в ядрах гипоталамуса человека обоснованно указывают на морфофункциональные изменения в этих структурах при старении, болезни Альцгеймера исосудистом слабоумии.Сформулированные автором положение 1, вынесенное на защиту, и выводы 1Ц,касающиеся раздела работы по анализу метаболической активности некронов, вь1текаютиз полученных результатов и полностью им соответствуют.В специальном разделе диссертационной работы исследована плотностьрасположения нейронов и глиальных клеток в струmурах передне-базального мозга игипоталамуса при болезни Альцгеймера и сосудистой деменции.

Автором убедительнопоказаны различия по этим харакгеристикам в конкретных структурах мозга. Глиознаиболее выражен при болезни Альцгеймера и в наибольшей мере проявляется вбазальном ядре, но также показан в супраоптическом ядре, туберомамиллярном ядре имедиальном мамиллярном ядре при обеих формах деменции. При этих формах слабоумия2автором вь1явлена корреляция между снижением метаболической активности нейронов иувеличением количества глиальнь1х клеток. Ингерпретировать эти результаты по глиозуприменительно к оценке численности популяции гибнущих холинергических нейронов втерминах молекул, сигналов и внутриклеточнь1х сигнальнь1х путей не представляетсявозможным из-за отсутствия данных по принадлежности наблюдаемь1х глиальнь1х клетокконкретном типу и, что особенно важно, к подтипу (А1 и 2 для астроцитов, М1 и 2 длямикроглии), поведение которь1х достаточно хорошо изучено на моделях болезниАльцгеймера.

В связи с приобретающим все большую популярность представлением оположительной роли глиоза в качестве защитной реакции и экспрессии в реакгивнь1хастроцитах молекулярных факгоров, сдерживающих проявления нейродегенерации,оценка феномена глиоза для выживания\гибели нейронов и поддержания специфическихнервных связей становится неоднозначной. В условиях развития нейродегенерации такжеостается неясной связь между метаболической активностью нейронов и потенциальнойвозможностью их гибели. Увеличению вероятности вступления нейронов в апопотозможет одинаково предшествовать как увеличение, так и снижение их метаболическойактивности.

В русле этого представления встает вопрос о том, насколько валиднь1м приболезни Альцгеймера является фактор метаболической аюивности нейронов для оценкивыраженности нейродегенерации и прогноза гибели нейронов. На этот вопрос отвечаетсам автор диссертации: «повышение метаболической активности . . . не гарантируетзащиты от нейродегенеративнь1х изменений.

. . », упоминая изменения метаболическойактивности нейронов в медиальном мамиллярном ядре (с.181 -182). В целом, результатыэтого раздела работы Т.А. Ишуниной, включая данные по гибели нейронов инейродегенеративным изменениям в исследованнь1х ядрах при болезни Альцгеймера исосудистой деменции, представляются достоверными и адекватно отражены в выводе 5.В гипоталамусе и передне-базальном мозге при болезни Альцгеймера установленоувеличение экспрессии ЕRG, что логично обсуждается автором в связи с изменениямилокальною синтеза эстрогенов или нарушением деградации ERG при протеасомномпротеолизе. При этом констатировано отсутствие прямой связи между выраженностьюпатологического процесс в виде амилоиднь1х бт1яшек и нейрофибриллярнь1х клубков ифеноменом увеличения экспрессии ERoL в изучаемых структурах.

Иммуноцитохимическийанализ экспрессии ERG в этих структурах при сосудистой деменции не вь1явилдостовернь1х сдвигов. Эти результаты, как достоверные и значимые, обоснованноотражены в положении 2, вь1несенном на защигу и в выводе 6.Методом полимеразной цепной реакции в медиальном мамиллярном ядрегипоталамуса человека впервые вь1явлены сплайсинговые варианты ЕRot, которые могутэкспрессироваться на уровне белка. И каудального гипоталамуса человека авторомизолирован новый сплайсинговый варианг ЕRсі МВ 1 и изучены особенности егоэкспрессии, связаннь1е с полом, возрастом и менопаузой. Экспрессия hШ1 увеличиваетсяу женщин в пери- и пост-менопаузе, что свидетельствует о накоплении мутантнь1х формERct в ядрах гипоталамуса при снижении уровня циркулирующих эстрогенов.