Автореферат (Изменения цитоархитектоники, метаболической активности нейронов и экспрессии эстрогеновых рецепторов в ядрах гипоталамуса и передне-базального комплекса мозга человека при старении, болезни Альцгеймера и сосудистом слабоумии), страница 6

ПриСС изменения в ТМЯ аналогичны таковым при БоАл.В ММЯ при БоАл увеличена плотность расположения нейронов иглиальных клеток, повышен нейроглиальный индекс. Эти изменениясвидетельствуют о наличии глиоза и сморщивании ядра. Собственныерезультаты, касающиеся уменьшения объёма ММЯ, согласуются с даннымилитературы. В соответствии с другими исследованиями указаний на гибельнейронов в этом ядре не выявлено. Более того, метаболическая активностьнейронов ММЯ при БоАл также не претерпевает значительных изменений.

Всвязи с этим, увеличение числа глиальных клеток в этом ядре нельзярассматриватьвкачествекомпенсаторногоответанаснижениеметаболической активности. Не исключено, что глиоз в ММЯ при БоАлсвязан с наличием сенильных бляшек и НФК. При СС изменения в ММЯ, также, как и в ТМЯ, ограничены глиозом. В ТМЯ случаев с СС увеличениепопуляции глиальных клеток можно рассматривать как компенсаторныйответ на снижение метаболической активности нейронов.Экспрессия эстрогеновых рецепторов  и  в ядрах передне-базальногомозга и гипоталамуса при старении, болезни Альцгеймера и сосудистойдеменцииБолезнь Альцгеймера (БоАл) является наиболее распространённойформой деменции среди людей пожилого возраста, с более высокой частотойвстречаемости у женщин.

Исследования у женщин после менопаузы,получавшихзаместительнуютерапиюэстрогенами,предположилизначительное снижение у них риска развития БоАл (Schneider et al., 1996; vanDuijn, 1999; Waring et al., 1999). К тому же, исследования у женщин сустановленным диагнозом БоАл подтвердили, что уменьшение уровня27эстрогенов является важным фактором патогенеза БоАл (Inestrosa et al., 1998;van Duijn, 1999; Waring et al., 1999). В ряде работ показана связь междунизким уровнем свободных эстрогенов и риском развития БоАл (Yaffe et al.,2000).

Следует отметить, что на взаимосвязь между БоАл и эстрогенамимогут влиять полиморфизм эстрогенового рецептора (Ween et al., 1999) игенотип APOE (Yaffe et al., 2000). Однако, в ряде исследованийположительных эффектов эстрогенов при лечении БоАл не обнаружено(Henderson et al., 2000; Wang et al., 2000). В связи с этим механизм влиянияэстрогенов на познавательные функции при лечении нейродегенеративныхзаболеваний, таких как БоАл, является предметом оживлённого спора междуклиницистами и исследователями нервной системы (Solerte et al., 1999).Значительный интерес представляет тот факт, что гены, кодирующиехолинацетилтрансферазуиацетилхолинэстеразу,содержатнесколькоэстроген чувствительных элементов.

В нейронах БЯМ женщин с БоАлобнаружено больше повреждений цитоскелета, чем у пациентов мужскогопола (Salehi et al., 1998). Эксперименты на животных (Gibbs and Aggarwal,1998; Gibbs, 1996; Luine, 1985; McMilan et al., 1996; Mufson et al., 1999; Singeret al., 1998) также указывают на взаимосвязь половых гормонов ихолинэргической системы. Так как БЯМ и ВЯДБ – основные источникиацетилхолина (Mesulam et al., 1983), снижение уровня которого являетсяпатогномоничным для пациентов с БоАл (Price et al., 1985), то настоящаядемонстрация эстрогеновых рецепторов в этих ядрах представляет основудля потенциальных эффектов эстрогенов у пациентов с БоАл.ЭР и ЭР при старении и БоАл в БЯМ и ВЯДББЯМНаличие ЭР показано в основном в ядрах и в меньшей степени вцитоплазме нейронов без существенных половых и возрастных различий.Значительно более высокая интенсивность окраски ядерных ЭР отмечена вБЯМ и ВЯДБ пациентов с БоАл по сравнению с контрольными случаямиИммуноцитохимическое окрашивание ЭР выявлено в цитоплазме и ядрах28нейронов с явным преобладанием цитоплазматической локализации как уконтрольных, так и у случаев с БоАл.По результатам двухфакторного теста ANOVA процентное содержаниенейронов БЯМ с ядерными и цитоплазматическими эстрогеновымирецепторами  и  в контрольной группе от пола и возраста не зависело.Анализ линейной регрессии позволил выявить тенденцию к положительнойкорреляции процента нейронов с ядерными ЭР с возрастом (r=0.305,p=0.053), что означает некоторое увеличение содержания ЭР при старении.После разделения по половому признаку, статистически достовернаяположительная корреляция процента нейронов БЯМ с ядерными ЭР ивозрастом была установлена у мужчин (r=0.612, p=0.003) и отсутствовала уженщин (r=0.011, p=0.963).

Число нейронов БЯМ с цитоплазматическимиЭР увеличивалось при старении в контрольной группе независимо от пола(r=0.323, p=0.042).У пациентов с БоАл в базальном ядре Мейнерта отмечено болеевысокое содержание нейронов с ядерными ЭР (главный эффект тестаANOVA (ГЭ): F(1;23) = 9.992; p = 0.005), а также с цитоплазматическими(ГЭ: F(1;23) = 6.437; p = 0.019) и ядерными ЭР (ГЭ: F(1;23) = 4.805; p =0.039), чем у контрольных случаев (Рис.2).Рис. 229ВЯДБПо результатам однофакторного анализа ANOVA и теста КрускаллУоллис статистически достоверных различий в процентном содержаниинейронов ВЯДБ с ядерными и цитоплазматическими ЭР и ЭР средичетырёх групп контрольных случаев не обнаружено.

Анализ линейнойрегрессии выявил положительную корреляцию генотипа APOE (2 < 3 < 4)с процентом нейронов ВЯДБ с цитоплазматическими ЭР (r = 0.767, p =0.044) у пожилых контрольных случаев. Как у мужчин (r = 0.949, p = 0.051),так и у женщин (2 < 3 < 4; r = 1.000, p = 0.0001) наблюдалась зависимостьпроцента нейронов с цитоплазматическими ЭР от генотипа APOE.У пациентов с БоАл обнаружено значительно более высокоесодержание ядерных ЭР в нейронах ВЯДБ, чем у контрольных случаев (ME(главный эффект): F(1;21) = 9.415, p = 0.006 по данным ANOVA и p = 0.013согласно тесту Манн-Уитни).

У людей с БоАл с возрастом увеличивалосьпроцентное содержание нейронов с цитоплазматическими ЭР (r = 0.701, p =0.024). После разделения случаев по полу, оказалось, что процент нейронов сцитоплазматическими ЭР увеличивался с возрастом у мужчин с БоАл (r =0.865, p = 0.058), у мужчин в контрольной группе (r = 0.965, p = 0,008) ипрактически не изменялся у женщин.Эстрогеновые рецепторы  и  при старении и БоАл вгипоталамических ядрахСОЯПри старении в СОЯ у женщин наблюдается увеличение содержанияядерных ЭР и снижение экспрессии ядерных ЭР.

В то же время,достоверных различий количества нейронов с ЭР в ядрах (F[1;32] = 1.280; p= 0.267) и в цитоплазме (F[1;32] = 0.003; p = 0.954) ВП нейронов у пациентовс БоАл и контрольных случаев не установлено. После разделения на 4группы с учётом пола (контрольные пожилые мужчины, контрольныепожилые женщины, мужчины с БоАл, женщины с БоАл), процент ВП30нейронов с ядерными ЭР оказался выше у контрольных женщин посравнению с контрольными мужчинами (F[1;16] = 5.763; p = 0.031),подтверждая результаты предыдущих исследований, и был выше у мужчин сБоАл, чем у мужчин контрольной группы (F[2;23] = 4.278; p = 0.028).

Приэтом интенсивность окраски ядерных ЭР была выше у случаев с БоАл посравнению с контрольной группой. Процентное содержание ВП нейронов сядерными ЭР оказалось ниже у пациентов с БоАл по сравнению сконтрольными случаями (F[1;31] = 4.774; p = 0.037), тогда как число ВПнейронов с цитоплазматическими ЭР в эти группах не отличалось (F[1;31] =0.556; p = 0.462).Рис. 3. Иммуноцитохимическое окрашивание ЭР в ВЯДБ у двух пациентов с БоАл (A, B)и у контрольных случаев того же возраста (C, D). У пациентов с БоАл обнаружена болеевысокая пропорция нейронов с более интенсивным ядерным окрашиванием ЭР, чем вконтрольной группе. Различная интенсивность окрашивания ЭР отмечена следующимобразом: "S" – сильное, "M" – умеренное, "W" – слабое, "VW" – очень слабое.

Масштаб =25 мкм.31ТМЯЦитоплазматическая экспрессия ЭР и ЭР снижалась при старении умужчин и не изменялась с возрастом у женщин. Наблюдалась тенденция кувеличениюпропорциинейроновсцитоплазматическимиЭРвконтрольной по сравнению с группой с БоАл (F[1;30] = 3.898; p = 0.058).Статистически достоверных различий в процентном содержании нейроновТМЯ с ядерными ЭР между контрольными и случаями с БоАл установленоне было (F[1;30] = 1.628; p = 0.213). Однако интенсивность окраски ядерныхЭР, как правило, была выше в группе с БоАл. У мужчин с БоАлнаблюдаласьположительнаякорреляцияпроцентанейроновсцитоплазматическими ЭР и генотипом APOE 4 (r = 0.775; p = 0.041).

Умужчин контрольной группы с генотипом APOE 4 положительнокоррелировала пропорция нейронов ТМЯ с ядерными ЭР (r = 0.885; p =0.019).Средний процент нейронов ТМЯ с цитоплазматическими ЭР был вышеу пациентов с БоАл по сравнению с контрольными случаями (F[1;30] = 4.514;p = 0.043). У мужчин в контрольной группе (r = 0.924; p = 0.025) и группе сБоАл (r = 0.763; p = 0.046), процент нейронов ТМЯ с ядерными ЭРположительно коррелировал с генотипом APOE (2 < 3 < 4).ММЯУ молодых женщин в ММЯ выявлена более высокая интенсивностьокрашивания ядерных ЭР по сравнению с молодыми мужчинами ипожилыми женщинами. У пожилых контрольных случаев мужского иженского пола слабое окрашивание ЭР локализовалось в цитоплазме ипрактически отсутствовало в ядрах нейронов. Таким образом, послеменопаузы у женщин происходит исчезновение ЭР из ядер нейронов ММЯ.Количество нейронов ММЯ с ядерными ЭР было значительно выше упациентов с БоАл по сравнению с контрольными случаями (F[1;22] = 12.415;p = 0.002).

При анализе сочетанного влияния БоАл и пола пациентов32пропорция нейронов ММЯ с ядерными ЭР оказалась выше у мужчин сБоАл по сравнению с мужчинами контрольной группы (F[2;16] = 4.744; p =0.028), и такая же тенденция только в меньшей степени отмечена у женщин(F[2;16] = 3.342; p = 0.065). У пациентов с БоАл пропорция нейронов ММЯ сядернымиЭРположительнокоррелироваласостадиейнейропатологических изменений по Braak (r = 0.726; p = 0.017). Процентноесодержание нейронов ММЯ с ядерными (F[1;22] = 0.954; p = 0.340) ицитоплазматическими (F[1;22] = 0.204; p = 0.657) ER между контрольнымии случаями с БоАл не отличалось.Сплайсинговые варианты мРНК ЭР в ММЯИтак,врезультатепроведенныхисследованияхобнаруженоповышение содержания ядерного рецептора  (ЭР) в нескольких областяхмозга, участвующих в контроле познавательных функций и поражённых приболезни Альцгеймера: в холинергических ядрах передне-базального мозгаБЯМ и ВЯДБ и в ММЯ. Первоначально эти результаты предполагаютдоступность (наличие) эстрогеновых рецепторов в указанных областях мозга,что делает их потенциальными мишенями для заместительной терапииэстрогенами при БоАл.