Автореферат (Изменения цитоархитектоники, метаболической активности нейронов и экспрессии эстрогеновых рецепторов в ядрах гипоталамуса и передне-базального комплекса мозга человека при старении, болезни Альцгеймера и сосудистом слабоумии), страница 3

С использованием специальных программ проводилосьизмерение площади сечения нейронов, площади нейронов, занимаемойиммуноцитохимическиокрашеннымаппаратомГольджи,количестванейронов, экспрессирующих эстрогеновые рецепторы  и .Статистические методыНормальное распределение данных изучалось с помощью тестовКолмогорова-Смирнова и Шапиро-Уилка. Различия профильной площади АГи перикарионов нейронов, а также процентное содержание клеток с ядерными цитоплазматическим типом окрашивания эстрогеновых рецепторов междумужчинами и женщинами в различных возрастных группах и у пациентов сБоАл и СС оценивались с помощью одно- и двухфакторного теста ANOVA, атакже с помощью тестов Крускалла-Уоллиса и Манн- Уитни.

Дляопределения корреляции изучаемых показателей с различными параметрами,такими как длительность фиксации, промежуток между моментом смерти ивзятием материала, возраст, пол, генотипAPOE, наличие болезниАльцгеймера, использовался анализ линейной регрессии. Значение p < 0.05считалось достоверным.12РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕИзучение цитоархитектоники и метаболической активности нейроновпередне-базального мозга и гипоталамуса человека при старении иболезни АльцгеймераДля оценки метаболической активности нейронов использовалисьцитоархитектонические показатели - размеры аппарата Гольджи и площадьядер и перикарионов нейронов, которые по многочисленным даннымлитературы достоверно отражают изменения метаболической активностинейроноввклеткахразличныхтипов,атакжеприразличныхфизиологических состояниях и нейропсихических заболеваниях (Jongkindand Swaab, 1967; Swaab and Jongkind, 1971; Swaab et al., 1971; Gibson et al.,1988; Mourelatos et al., 1993; Raghavendra Rao et al., 1993; Lucassen et al., 1994;Ruela et al., 1994; Salehi et al., 1994; Salehi et al., 1995a,b; Dal Canto, 1996;Stieber et al., 1996; Gonatas et al., 1998; Stieber et al., 1998).Размеры АГ и перикарионов нейронов ВЯДБ у контрольных случаеви пациентов с БоАлПо результатам тестов ANOVA и Kruskal-Wallis статистическидостоверных отличий площади АГ и перикарионов нейронов среди четырёхгрупп контрольных случаев, разделенных по полу и возрасту 50 лет намолодых мужчин, молодых женщин (≤ 50 лет), пожилых мужчин, пожилыхженщин (> 50 лет), обнаружено не было.

У пожилых контрольных случаев (>50 лет) отмечено значительное увеличение размеров АГ при старении (r =0.814; p = 0.002). У людей с БоАл наблюдалась отчётливая тенденция кувеличению АГ нейронов ВЯДБ по сравнению с контрольными случаями(ME: F(1;21) = 3.508; p = 0.077). Этот эффект оказался ещё болеезначительным при разделении второй экспериментальной группы с учётомвозраста 70 лет: (ME (главный эффект): F(2;21) = 3.820 (БоАл) и = 1.521(возраст 70 лет), p = 0.067 и p = 0.234 соответственно; IE (эффектвзаимодействия двух факторов, влияющий на изучаемый показатель) междуБоАл и возрастом 70 лет: F(1;21) = 5.612; p = 0.030). Подобное разделение на134 группы (пациенты с БоАл  70 лет, пациенты с БоАл > 70 лет, контрольныеслучаи  70 лет, контрольные случаи > 70 лет) по данным теста KruskalWallis справедливо (p = 0.032). В этом случае площадь АГ достовернобольше у пациентов с БоАл, чем у контрольных случаев в возрасте до 70 лет(p = 0.030 по результатам теста Манн-Уитни и p = 0.037 согласно тестуБонферрони), а у контрольных случаев старше 70 лет больше, чем у людей от56 до 70 лет (p = 0.009 по результатам теста Манн-Уитни).

Активизациюнейронов ВЯДБ при БоАл, проявляющуюся большими размерами АГ, можнообъяснить повышением уровня фактора роста нервов (NGF) в гиппокампе(Hock et al., 2000), что, по-видимому, приводит к увеличению ретроградноготранспорта NGF в ВЯДБ. Не исключено, что похожий механизмзадействован и в возрастной активизации нейронов ВЯДБ у пожилыхконтрольных случаев. Альтернативное объяснение повышения NGF вгиппокампе нарушением ретроградного транспорта в ВЯДБ при старении иБоАл маловероятно, т.к.

нейроны ВЯДБ скорее активизированы, нежелиатрофичны. Эта возможность отрицается и увеличением при старении иБоАлметаболическойактивностивгипоталамическихструктурах,иннервируемых ВЯДБ (например, СОЯ и ПВЯ). Несмотря на повышениеактивностинейронов,активностьхолинацетилтрансферазы(ХАТ)иацетилхолинэстеразы (АХЭ) значительно снижены в ВЯДБ и гиппокампепациентов с БоАл по сравнению с контрольными случаями (Henke and Lang,1983; Allen et al., 1997). В связи с этим уместно отметить, что ХАТгиппокампа в значительной степени коррелирует с показателями памяти нанедавние события у пациентов с БоАл (Pappas et al., 2000). Таким образом,выявленное увеличение метаболических маркеров в ВЯДБ может отражатькомпенсаторные изменения в ответ на начальные этапы дегенерации в этомядре.

Однако указанный процесс не прогрессирует до степени выраженности,отмеченной в БЯМ при БоАл.Половые и возрастные различия АГ и размеров перикарионов нейроновТМЯ14В контрольной группе размеры перикарионов нейронов ТМЯ (r = 0.374; p= 0.046) увеличивались с возрастом. После разделения на мужчин и женщинэта корреляция наблюдалась у мужчин (r = 0.677; p = 0.006) и отсутствовала уженщин (r = 0.167; p = 0.569).

Возрастных изменений АГ установлено небыло. Более того, размеры перикарионов (но не АГ) нейронов ТМЯ упожилых мужчин (> 60 лет) значительно превышали таковые у молодыхмужчин ( 60 лет) (F[1;15] = 27.415; p = 0.0001). У молодых женщин этотпараметр был больше, чем у молодых мужчин (F[2;23] = 6.736; p =0.006).Размеры перикарионов нейронов ТМЯ у молодых и пожилых женщин неотличались (F[1;14] = 0.082; p = 0.779). Отсутствие изменений площадиперикарионов с возрастом у женщин, и постепенное снижение уровняандрогенов у мужчин (Seidman and Walsh, 1999; Sternbach, 1998; Vermeulen,1993), свидетельствуют о том, что именно снижение уровня андрогенов умужчин лежит в основе увеличения размеров гистаминэргических нейроновв ТМЯ. Наличие андрогеновых рецепторов у последних и большие размерынейронов ТМЯ у молодых женщин по сравнению с молодыми мужчинамиподтверждаютэтугипотезу.Скореевсего,ингибирующийэффектандрогенов не очень выраженный, так как ни половых, ни возрастныхразличий размеров аппарата Гольджи выявлено не было.

Незначительныеполовые различия профильной площади перикарионов нейронов ТМЯ до 60лет можно объяснить более медленным снижением уровня андрогенов пристарении у мужчин (Seidman and Walsh, 1999; Sternbach, 1998; Vermeulen,1993) по сравнению с резким падением уровня эстрогенов в периодменопаузы у женщин. Следует отметить, что ингибирующий эффектандрогенов был отмечен и в соседнем с ТМЯ вентромедиальном ядре.Размеры АГ и перикарионов нейронов ВМЯ у контрольных случаевИнтенсивность окраски АГ и размеры АГ нейронов ВМЯ оказалисьбольше у мужчин старше 50 лет по сравнению с мужчинами в возрасте до 50лет.

Более интенсивное иммуномечение АГ отмечено и у молодых женщинпо сравнению с молодыми мужчинами. С помощью двухфакторного теста15ANOVA был показан достоверный эффект взаимодействия пола и возрастадля размеров АГ в нейронах ВМЯ (основные эффекты (ME): F(2;28) = 0.158 и0.214, p = 0.695 и 0.648; эффект взаимодействия (IE): F(1;28) = 5.129, p =0.032), для пропорционального соотношения АГ к профильной площадинейронов (ME: F(2;28) = 0.013 и 1.862, p = 0.910 и 0.185; IE: F(1;28) = 4.183, p= 0.052). Согласно однофакторному ANOVA соотношение площади АГ кплощади перикарионов было значительно больше у молодых женщин, чем умолодых мужчин (ME: F(1;15) = 7.648, p = 0.005), а у пожилых мужчинпревышало таковое у молодых мужчин (ME: F(1;12) = 7.588, p = 0.019).Достоверных различий размеров перикарионов нейронов ВМЯ среди 4-хгрупп обнаружено не было.

Анализ линейной регрессии продемонстрировал,что при учёте всех случаев размеры АГ достовернокоррелировали сразмерами перикарионов нейронов (r = 0.379, p = 0.043) и пропорциональнымсоотношением АГ к площади сечения нейронов (r = 0.808, p = 0.0001). Приэтом корреляций указанных параметров с возрастом (r = 0.047, p = 0.809) иполом (r = 0.048, p = 0.805) отмечено не было. После разделения на мужчин иженщин, достоверная корреляция соотношения АГ/площадь перикариона свозрастом была обнаружена у мужчин (r = 0.568, p = 0.043) и отсутствовала уженщин (r = 0.086, p = 0.752).

Так как относительный размер АГ к площадиперикарионов был больше у молодых женщин по сравнению с молодымимужчинами, а у пожилых мужчин больше, чем у молодых, уместнопредположить ингибирующий эффект андрогенов на метаболическуюактивность нейронов ВМЯ человека. В пользу этой гипотезы говорятследующие аргументы.