Диссертация (Влияние мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток на регенерацию печени после ее обширной резекции (экспериментальное исследование)), страница 8

4, рисунок 8,9). Медиана жизниживотных после операции составила 12 часов.Рис. 8. Регенерированная печень крысы на разные сроки после 90%резекции печени53Рис. 9. Определение предельно больших объемов резекциипечени у крыс в эксперименте54Поданным3.4 Обсуждениеразных авторов летальностьотмечаетсякакпривыполнение 85% резекции печени, так и 90% резекции [164; 178]. Налетальность влиял не только объем операции, но и наркоз, применениеглюкозы в раннем послеоперационном периоде [73; 96]. В зарубежныхработах препарат Золетил не применялся.

Учитывая тот факт, что в ранеевыполненных работах не изучалось влияние наркоза Золетил налетальность и продолжительность жизни решено провестиисследование намоделях с 70%, 85%, 90% резекцией печени.В нашем исследовании не отмечено летальности при выполнении70% и 85% резекции печени. Зарубежные авторы при использовании вкачестве наркоза этаминал-натрия на животной модели при резекции 85%печени отметили 60% летальность, в дальнейшем они применяли даннуюмодель для изучения влияния ММСК на летальность и продолжительностьжизни [178].Таким образом, модели с 70% и 85% резекцией печени сприменением в качестве наркоза Золетила являются не подходящими дляоценки летальности и продолжительности жизни, но могут бытьиспользованы для оценки эффективности ММСК КМ на разных, в томчисле длительных, сроках после операции.В нашей работе, после выполнения 90% резекции печени всеживотные погибли.

В зарубежных статьях при резекции 90% печени подизофлурановым наркозом летальность колебалась от 75,3% до 100% [73;85; 106]. Надо отметить, что нами используемый наркоз (Золетил)метаболизируется в печени в отличае от часто используемого изофлурана,что могло так же повлиять на продолжительность жизни животного. Вразных статьях использовались разные сроки вывода животных, разные55наркозы и количество животных [72; 85; 106; 178]. Влияние выборанаркоза на летальность отмечали и другие авторы при анализе применениянаркозов Кетамина и Изофлурна при резекциях 90% печени [73].Таким образом, для оценки летальности целесообразно применятьмодель с 90% резекцией печени.56Глава 4.

Влияния трансплантации аллогенных ММСК КМ налетальность, функцию, объем оставшегося ремнанта печени послевыполнения обширнойрезекции печени в эксперименте.На основании ранее полученных данных для дальнейшего изучениявлияния аллогенных ММСК КМ на летальность и продолжительностьжизни выбрана модель с 90% резекцией печени,для изучения влиянияданных клеток на массу крысы, печени, синтетическую функцию печени иактивность печеночных ферментов выбрана модель с 70% резекциейпечени.4.1 Влияние трансплантации мезенхимальных мультипотентныхстромальных клеток костного мозга на летальность ипродолжительность жизни после выполения предельно большихрезекций печени у крыс в экспериментеПосле резекции 90% печени и трансплантации ММСК КМ всеживотные погибли в течение 2 суток. По сравнению с резекцией 90%печени без трансплантации ММСК отмечено статистически не значимоеувеличение средней продолжительности жизни на 1,75 часа, однакомедиана осталась не измененной ((12 часов) р=0,66)) (табл 5, рисунок 10).Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ неувеличивает продолжительность жизни после резекции 90% печени.Таблица 5Влияние ММСК КМ на летальность и продолжительностьжизни после 90% резекции печениPПоказательММСК КМ -ММСК КМ +Продолжительность жизни12 (12-24)12 (12-24)Летальность100%100%0,661,0057Рис.

10. Влияние трансплантации аллогенных ММСК КМ налетальность и продолжительность жизни животного после резекции90% паренхимы печени4.2 Динамика массы крысы и печениУ всех крыс в 2 исследуемых группах (4 и 5) масса крысы и печениполностью восстанавливалась к 14 суткам, а учитывая, что крысапродолжала расти, к данному сроку вес крысы и печени превышалпервоначальную на 25 – 63%. В экспериментальной группемасса крысы ипечени быстрее возвращалась к исходным показателям. Статистическаяразница между исследуемыми группами отмечена на 4 сутки послеоперации (табл.

6, рисунки 11, 12).Таким образом, трансплантация ММСК КМ приводит к болеебыстрому восстановлению массы крысы и печени.Таблица 6Анализ динамики массы крысы и печениОценкаСуткиДинамика массыкрысы (г)12Контрольная группаПроцентили (25 % Медиана75 %)-8,00- 11 - -5-13,50- 24,00 - -7,00Экспериментальная группаПроцентили (25 % Медиана75 %)-8,00-10,00 - -6,00-12,00-16,00 - -4,00Р0,940,4058Окончание таблицы 6Динамикамассы крысы(г)Динамикимассы печенив%(относительномассы всейпечени)4-10,00-22,00 - -8,00-4,00-6,00 – 50,009*1455,0049,00 – 61,0055,0050,00 – 59,000,7410,480,39 – 0,500,410,40 – 0,460,27720,630,62 – 0,680,680,67 – 0,750,1440,830,81 – 0,870,880,87 – 0,920,009*141,251,23 – 1,391,271,25 – 1,350,848Рис.

11. Динамика массы крысы на разные сроки после операции сприменениемаллогенныхмультипотентныестромальныеММСКклеткиКМ(мезенхимальныекостногомозга)ибезприменения ММСК КМ* - статистически значимый результат между сравниваемымигруппами на одинаковые сутки после операции (P<0,05).v - статистически значимый результат между 0 сутками (выбранозначение 0) и выбранными сутками в одной группе (P<0,05).59Рис.

12. Масса печени в % на разные сроки после операции сприменениемаллогенныхмультипотентныестромальныеММСКклеткиКМ(мезенхимальныекостногомозга)ибезприменения ММСК КМ* - статистически значимый результат (P<0,05).v - статистически значимый результат между 0 сутками (выбранозначение 1) и выбранными сутками в одной группе (P<0,05).4.3 Синтетическая функция печениПри сравнении уровня прямого билирубина в крови не былоотмечено статистической значимой разницы в двух группах на всех срокахпосле операции. Прямой билирубин на 1, 2, 4 сутки был выше нормы в 2-5раз (в зависимости от сроков), в дальнейшем к 14 суткам нормализовался.Уровень общего белка в крови в первые сутки уменьшался,вдальнейшем отмечалось постепенное восстановление его концентрации.Более высокий его уровень был выявлен в экспериментальной группе на 4и 14 сутки (рисунок 13А).

Уровень альбумина снижался в двух группах на60первые сутки после операции, в дальнейшем с 2, 4 суток отмеченпостепенный подъем в контрольной группе, в экспериментальной группеподъем уровня альбумина наблюдали с 4 суток. Статистически значимыеотличия в 2 группах выявлены на 4 и 14 сутки после операции (рисунок13Б).Уровень АЧТВ в контрольной группе (по отношению к 0 суткам) на1 сутки был повышен в 2 раза (р=0,002). В экспериментальной группе (поотношениюк0послеоперационномсуткам)периоде.неотмеченоПриповышениесравненииАЧТВконтрольнойвиэкспериментальной групп статистически значимые изменения выявлены на1 сутки (рисунок 13В). Нормализация МНО в контрольной группезафиксирована на 14 сутки, в экспериментальной группе на 4 сутки,статистически значимые изменения выявлены на 1, 2, 4 сутки послеоперации (рисунок 13Г).Таким образом, трансплантация ММСК способствует более раннемувосстановлению синтетической функции печени.61Рис.

13. Концентрация общего белка, альбумина, значение АЧТВ иМНО в крови на разные сроки после операции с применениемаллогенныхММСККМ(мезенхимальныемультипотентныестромальные клетки костного мозга) и без применения ММСК КМ. А- Концентрация общего белка; Б – Концентрация альбумина; В –Значение АЧТВ в крови; Г – Значение МНО в крови* - статистически значимый результат (P<0,05).v - статистически значимый результат между 0 сутками ивыбранными сутками в одной группе (P<0,05).624.4 Активность печеночных ферментовВконтрольнойиэкспериментальной группах небыло выявлено статистическойзначимой разницы в измененияхконцентрации АЛТ и АСТ на всехсроках после операции (рисунки14А, 14Б). В контрольной группеуровень ЩФ на 1 и 2 сутки былповышен в 2 раза, снижениеначиналосьс2нормализацияотмеченассуток,показателей4суток.Вэкспериментальной группе на 1суткиотмеченоповышениеданного показателя в 1,5 раза, на2 сутки в 2 раза с последующейпостепенной нормализацией к 4суткам.СтатистическизначимыеконцентрацииизмененияЩФмеждуконтрольнойэкспериментальнойигруппамивыявлены на 1 сутки послеоперации (рисунок 14В).Рис.

14. Уровень АЛТ,АСТ, ЩФ в крови на разные сроки после операции с применением63аллогенныхММСККМ(мезенхимальныемультипотентныестромальные клетки костного мозга) и без применения ММСК КМ. А– Уровень АЛТ в крови; Б – Уровень АСТ в крови; В – Уровень ЩФ вкрови.* - статистически значимый результат (P<0,05)v - статистически значимый результат между 0 сутками ивыбранными сутками в одной группе (P<0,05).Таким образом, трансплантация аллогенных ММСК КМ уменьшаетактивность ЩФ в послеоперационном периоде, но не влияет на АЛТ иАСТ.644.5 ОбсуждениеС целью оценки влияния трансплантации аллогенных ММСК КМ налетальность и продолжительность жизни была выбрана модель с 90%резекцией печени, т.к. при ее выполнении отмечали летальность.Статистической значимой разницы в летальности и продолжительностижизни между двумя группами выявлено не было.