Диссертация (Влияние мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток на регенерацию печени после ее обширной резекции (экспериментальное исследование))

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТОЕУЧРЕЖДЕНИЕГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТРРОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ БИОФИЗИЧЕСКИЙЦЕНТР ИМЕНИ А.И. БУРНАЗЯНА ФМБА РОССИИНа правах рукописиРудаков Владимир СергеевичВЛИЯНИЕ МУЛЬТИПОТЕНТНЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХСТРОМАЛЬНЫХ КЛЕТОК НА РЕГЕНЕРАЦИЮ ПЕЧЕНИПОСЛЕ ЕЕ ОБШИРНОЙ РЕЗЕКЦИИ(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)14.01.17 – хирургияДиссертация на соискание ученой степеникандидата медицинских наукНаучный руководитель:д.м.н. Восканян Сергей ЭдуардовичМосква – 20172ОглавлениеВЕДЕНИЕ ........................................................................................................ 5Актуальность исследования ......................................................................... 5Степень разработанности темы исследования ............................................

8Цель и задачи исследования ......................................................................... 8Новизна результатов исследования ............................................................. 9Теоретическая и практическая значимость исследования.......................... 9Основные положения диссертации, выносимые на защиту ....................... 9Апробация работы ...................................................................................... 10Внедрение результатов исследования в практику .................................... 10Личный вклад автора .................................................................................. 11Соответствие диссертации паспорту научной специальности .................

11Публикации ................................................................................................. 11Структура и объем работы ......................................................................... 11ГЛАВА1.Применениеклеточныхтехнологийприобширныхрезекциях печени - обзор литературы ....................................................... 121.1 Исторический экскурс .......................................................................... 121.2 Регенерация печени............................................................................... 151.3 Использования клеточных продуктов при заболеваниях печени.......

211.4 Модели острой печеночной недостаточности ..................................... 281.5 Оценка эффективности клеточнойтерапии.......................................... 32ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ..................... 402.1 Дизайн исследования ............................................................................ 4032.2 Получение мезенхимальных мультипотентных стромальных клетоккостного мозга............................................................................................. 432.3 Техника операций .................................................................................

442.3.1 Резекция 70% печени ...................................................................... 442.3.2 Резекция 85% печени ...................................................................... 452.3.3 Резекция 90% печени ......................................................................

462.4 Техника введения мезенхимальных мультипотентных стромальныхклеток костного мозга................................................................................. 472.5 Оценка эффективности клеточного продукта ..................................... 482.6 Морфология и морфометрия ................................................................

482.7 Статистическая обработка данных....................................................... 50ГЛАВА 3. Разработка оптимальной экспериментальной моделипострезекционной печеночной недостаточности. ................................... 513.1 Влияние 70% резекции печени на летальность и продолжительностьжизни ........................................................................................................... 513.2 Влияние 85% резекции печени на летальность и продолжительностьжизни ...........................................................................................................

513.3 Влияние 90% резекции печени на летальность и продолжительностьжизни ........................................................................................................... 523.4 Обсуждение ........................................................................................... 54Глава 4. Влияния трансплантации аллогенных ММСК КМ налетальность, функцию, объем оставшегося ремнанта печени послевыполнения обширнойрезекции печени в эксперименте. ..................... 5644.1Влияниестромальныхтрансплантацииклетокпродолжительностьмезенхимальныхкостногожизнипослемозгавыполениянамультипотентныхлетальностьпредельноибольшихрезекций печени у крыс в эксперименте ................................................... 564.2 Динамика массы крысы и печени.........................................................

574.3 Синтетическая функция печени ........................................................... 594.4 Активность печеночных ферментов .................................................... 624.5 Обсуждение ........................................................................................... 64Глава 5. Влияние трансплантации аллогенных ММСК КМ напролиферативную,митотическуюактивностьгепатоцитовиморфометрические критерии регенерации паренхимы печени послеобширной резекции печени в эксперименте. ...........................................

675.1 Определение количества митозов ....................................................... 675.2 Определение количества PCNA позитивных клеток .......................... 685.3 Определение диаметра ядра гепатоцитов ............................................ 695.4 Определение площади гепатоцитов ..................................................... 705.5 Определение размера печеночных долек ............................................ 705.6 Обсуждение ...........................................................................................

77Заключение ................................................................................................... 79Выводы .......................................................................................................... 85Практические рекомендации ..................................................................... 85СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ..................................... 86Список литературы...................................................................................... 895ВЕДЕНИЕ(общая характеристика работы)Актуальность исследованияВо всем мире отмечается тенденция к увеличению числа больных созлокачественными и доброкачественными очаговыми заболеваниями впечени,которымтребуетсяоперативноелечение.У20-30%онкологических больных наблюдается метастатическое поражение печени,что является показанием к резекции.

Тем не менее, радикальныеоперациивыполняются только 5% -15% нуждающихся[57; 166].Несмотря на развитие новых технологий и совершенствованиетехники операции, риск развития угрожающих жизни осложнений остаетсявысоким, в особенности при гигантских размерах новообразований, убольных с низким функциональным резервом печени, а такжеприлокализации образований в кавальных или глиссоновых воротах печени. Внастоящее время летальность после обширных резекций печени (ОРП)составляет3,2%[11],однако,осложнения,возникающиепослевыполнения данной операции, остаются на высоком уровне и достигают47%[65].Частымосложнениемпослерезекциипечениявляетсяпострезекционная печеночная недостаточность (ППН), которая возникает втрети наблюдений и проявляется, так же как и острая печеночнаянедостаточность (ОПН) нарушением синтетической функции печени,печеночной энцефалопатией и, в ряде случаев, может привести к смерти[69].Для профилактики ППН перед выполнением ОРП применяютдвухэтапные операции, на первом этапе выполняют эмболизацию илиперевязку портальной вены на стороне поражения, которые могут быть6дополнены транссекцией паренхимы печени, что приводит к гипертрофиипротивоположной доли.

На втором этапе удаляют пораженную частьпечени. По данным литературы после 1 этапа операции объем остаточнойпаренхимы печени увеличивается на 24-160% [77;169]. Основнымнедостаткомтакогоподходаявляетсянеобходимостьдлительногоожидания гипертрофии здоровой доли печени, что сопряжено свозможностьюпрогрессированияиспользованиипервымэтапомосновногозаболевания,транссекцииотмечаетсяапривысокаячастотаосложнений и летальных исходов [77;169].Таким образом, остаетсяактуальной разработка способов профилактики и лечения данногоосложнения в послеоперационном периоде.С развитием клеточной медицины стало возможным применениеклеточных продуктов в леченииОПН, в частности мультипотентныхмезенхимальных стромальных клеток (ММСК) [148].