Лазерная флуориметрия ансамблей локализованных донорно-акцепторных пар (на примере белков), страница 4

3.4.2, 3.4.3. Полученные кривые насыщения изображенына рис. 3 (для случая раствора с R и B формами). Определенныефотофизические параметры представлены в таблице 2.Рис. 3. Кривые насыщения донора (круги) и акцептора (квадраты) в белкеmRFP1 для R и B форм.Таблица 2. Значения фотофизических параметров ЛДА пар белка mRFP1.Параметр*ЗначениеЗначениеЗначениепараметра для параметра для параметра дляR формыB формыG формы-162σD(λex=266), 10 см1±0.29 -1KDA, 10 с3.7±0.77.8±12.5±0.7E0.890.940.84Aτ3 , нс3±11.9±0.41.7±0.4*в таблице:- σD(λex=266) – сечение поглощения донора на длине волны 266нм;- KDA и Е – скорость и эффективность переноса энергии с донора на акцептор;- τ3A – время жизни возбужденного состояния акцептора.15В заключении сформулированы основные результаты работы.1.

Методом лазерной флуориметрии, использующим согласованнонаносекундную кинетическую и нелинейную флуориметрию, одновременноопределены значения фотофизических параметров молекул триптофана вводе: сечений поглощения в основном и возбужденном синглетномсостояниях, времени жизни возбужденного состояния, суммы скоростейинтеркомбинационнойконверсиииспонтаннойионизацииизвозбужденногосинглетногосостояния.Определенызначенияфотофизических параметров триптофана в однофлуорофорном белкесывороточный альбумин человека: сечения поглощения, времени жизнивозбужденного состояния, скорости интеркомбинационной конверсии.2.

На основе совместного применения абсорбционной спектроскопии,классической и нелинейной лазерной флуориметрии разработан методопределения индивидуальных фотофизических параметров (сеченияпоглощения, скорости интеркомбинационной конверсии, времени жизнивозбужденного состояния) флуоресцирующего хромофора флуоресцентногобелка mRFP1 и родственных ему флуоресцентных белков. Метод позволяеттакже определять долю флуоресцирующего хромофора в смесихромопротеинов.3. Введено понятие коллективных состояний локализованных донорноакцепторных пар (ЛДА пар). Предложена модель, описывающая кинетикунаселенностей коллективных состояний ЛДА пар и позволяющаярассчитывать кривые насыщения и кинетики флуоресценции ансамблейЛДА пар при лазерном возбуждении.4. Предложена методика определения фотофизических параметровфлуорофоров в ЛДА паре, основанная на совместном применениинелинейной и кинетической лазерной флуориметрии.

Методика применена крастворам двухтриптофанового белка бычьего сывороточного альбумина ифлуоресцентного белка mRFP1. Установлена схема фотофизическихпроцессов в них как в представителях систем с локализованными донорноакцепторнымипарами.Определенызначенияиндивидуальныхфотофизических параметров флуорофоров (хромофоров) указанных белков:сечения поглощения, времени жизни возбужденного состояния, скоростивнутримолекулярного переноса энергии.16ПУБЛИКАЦИИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ1. Банишев А.А., Маслов Д.В., Фадеев В.В. Наносекундный лазерныйфлуорометр. // Приборы и техника эксперимента, 2006, №3, с.

143-148.2. Банишев А.А., Вржещ Е.П., Дмитриенко Д.В., Друца В.Л., Маслов Д.В.,Пащенко В.З., Ширшин Е.А., Вржещ П.В., Фадеев В.В. Методопределенияиндивидуальныхоптическиххарактеристикпосттрансляционных флуоресцентных форм флуоресцентных белков сиспользованием нелинейной флуориметрии. // Биофизика, 2007, т. 52,№.5, с.792-798.3. Банишев А.А., Ширшин Е.А, Фадеев В.В. Определение фотофизическихпараметров молекул триптофана методами лазерной флуориметрии. //Квантовая электроника, 2008, т.

38, №1, с. 77-81.4. Банишев А.А., Маслов Д.В., Фадеев В.В. Определение квантового выходасинглет-триплетной конверсии в молекулах сложных органическихсоединений методом нелинейной лазерной флуориметрии. // ВестникМосковского Университета. Серия 3. Физика, астрономия, 2008, №3,с.69-71.5. Банишев А.А., Маслов Д.В., Мешканцов А.А., Остроумов Е.Е., ФадеевВ.В. Кинетическая флуориметрия природных вод. // Сб. статей«Физические проблемы экологии (экологическая физика)», М.:МАКСПресс, 2005, №12, с.138-147.6. Ostroumov E.E., Banishev A.A., Fadeev V.V., Maslov D.V.

Determination ofphotophysical parameters of organic compounds and their complexes bymethods of laser fluorimetry. // Conference on Spectroscopy, Dublin, Ireland,4-6 April, 2005, Conf. Digest, p.80.7. Fadeev V.V., Dolenko T.A., Banishev A.A., Litvinov P.N., Maslov D.V.,Ostroumov E.E.

Matrix method in laser fluorimetry of organic compounds. //Proc. of SPIE, Opto-Ireland 2005: Optical Sensing and Spectroscopy, 2005,v. 5826, p.44-55.8. Банишев А.А., Маслов Д.В., Литвинов П.Н. Определениефотофизических параметров сложных органических соединений методомлазерной флуориметрии. // Труды четвертой международнойконференции молодых ученых и специалистов “Оптика-2005”, СанктПетербург, Россия, 2005, c.306-307.9. Фадеев В.В., Вржещ П.В., Маслов Д.В., Банишев А.А., Вржещ Е.П.,Дмитриенко Д.В., Ширшин Е.А. Флуоресцентные характеристики имолекулярные фотофизические параметры красного флуоресцентногобелка mRFP1.

// Труды конференции «Альманах клиническоймедицины», издается МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва, 2006.Том ХII, с. 42.10. Ширшин Е.А., Банишев А.А., Вржещ Е.П. Фотофизические параметры имеханизмы флуоресценции белка. // Международная научнаяконференция студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов172006»,секция “Физика”, Москва, Россия, апрель 2006, Тезисы докладов,с. 157.11. Banishev A.A., Shirshin E.A., Fadeev V.V.

Non-linear fluorimetry offluorescent proteins. // Technical Digest of International Conference on Lasers,Applications and Technologies, Minsk, Belarus, May 28-June 1, p. L06/II-4(on CD-ROM).12. Banishev A.A., Shirshin E.A., Fadeev V.V., Non-linear fluorimetry offluorescent proteins. // Proc. of SPIE, International Conference on Lasers,Applications and Technologies, Minsk, Belarus, May 28-June 1, V.6733,p.67331B.13. Banishev A.A., Shirshin E.A., Fadeev V.V. The investigation and laser controlof a new class of biosensors – fluorescent proteins. // Technical Digest ofInternational Conference on Laser Applications in Life Sciences (LALS 2007),Moscow, Russia, June 11-14, 2007, p. TuL03P14 (on CD-ROM).14. Банишев А.А., Загидуллин В.Э., Пащенко В.З., Ширшин Е.А., ФадеевВ.В. Лазерная флуориметрия белков.

// Сб. статей «Физические проблемыэкологии (экологическая физика)», М.: МАКСПресс, 2007, №14, с.43-61.18.