91901 (Лабораторная диагностика мочи), страница 3

Патол. - бывают - обсолютные и относительные.

Обсолют. - из костного мозга (первичная - эритремия; вторичная - при забол. и явл. симптомом заб. сердца, легких). Относит. - при снижении колич. - плазмы сгущение крови (профузный понос, рвота, экссудаты, транссудаты).

>Эритроцитопения – м.б. при кровопотерях, гемолит. кризы, анемии (гипоаплазии - опустош. костн. мозга), при рассасыв. отеков.

N диаметр. Er - 6,7 - 7,7мкм,

>6,7 - микроциты,

< 7,7 - макроциты,

<12 - мегалоциты.

Изменение формы - пойкилоцитоз, серповидные (гемолитическая анемия) стоматоциты (В12 фоливая), окантоциты (гемм.анемия, В12 анемия) овалоциты, шизоциты и т.д.

По окраске - бледно - окраш. - гипохромные;

Интенсивно - гиперхромные.

Включения Er:

- базофильная зернистость мелкая т.синего цвета (свинц. интокс.)

- тельца Жолли – круг.фиол. - крас. включения (остатки ядра).

- кольца Кебота - ярко - красные тонкие нити в виде кольца, восьмерки, эллипса(остатки ядра) - при тяж. анемиях, лейкозы.

- тельца Гейнца - Эрлиха - мелкие включения по периферии - по 1 реже 2 - 3, явл. денатуированными липопротеинами Er стромы, выявляются при спец.окраске.

- ядерные пылинки Педенлейха – мелк. азурофильн. зернистость при глубоких наруш. обезядр. Er.

Лейкозы и лейкопении, характеристика морфологии гранулоцитов при патологии

К гранулоцитам относятся–нейтроф.,эозиноф., базофилы.

Патология возникает при нарушении функций, количества и морфологических изменений гранулоцитов.

Нейтрофилы - дефект защитной системы – ведет к хр. рецидивирующим инфекциям, м.б. врожденными или приобретенными (вторичными).

Фагоцитоз (приближение, захват, переваривание) - нарушаются при заболеваниях: почек, сах.диабете, циррозе печени, тяж.инфекциях, ожогах, лучевой болезни, прием медикаментов; оценка активности нейтрофилов – «ФАГ» - иммунологическое исследование.

Увеличение или уменьшение количества нейтрофилов в крови – обуславливает изменение общего количества L, лейкоцитоз или лейкопению.

Количество нейтрофилов в крови определяется:

- продукцией в костном мозге,

- распределение между краевым и циркулирующим пулом,

- скоростью выхода из сосудов в ткани,

- потреблением в тканях.

Появление незрелых нейтрофилов – нейтрофильный сдвиг в лево – дегенеративное изменение клеток (тяж. интоксикации – страдает костный мозг):

Токсогенная зернистость – грубая,обильная сине - фиолетового цвета (при тяж.интоксикациях - сепсис, гнойные процессы, распад опухолей)

Тельца Деле – маленькие округлые пятна в цитоплазме, окраш. в голубой или серо - голубой цв. - появляются при очень тяжелых интоксикациях.

Пельгеризация ядер - (гипосегментированые ядра) – ранний морфологический признак нарушения гранулоцитопоэза (пенсне, гантелей, коротких толстых палочек, боба)

Вакуолизация ядер –появление жировой дегенерации клеток – патологические состояния.

Гиперсегментация ядер – содержание более 5 сегментов (сдвиг нейтрофилов вправо) – при нарушении синтеза ДНК – мегалобластные анемии, прием цитостатиков, редкая аномалии лейкоцитов.

Усиленный пикноз ядра - темное, безструктурное, либо все ядро, либо отдельные участки – пикноз ядра – морфологическое проявление гибели клетки (апоптоза), может усиливаться при при лейкозах, после облучения.

К дегенеративным изменениям относят:

- кариорексис (распад ядра на фрагменты)

- анизоцитоз (наличие микро и макро форм нейтрофилов

- асинхронность в созревании ядра и цитоплазмы

- уменьшение количества нейтрофильных гранул

- лизис ядра или всей клетки.

Увеличение количества эозинофилов – аллергические заб., глистные инвазии, злокачественные опухоли, лейкозы (хр.миелолейкоз и о.лейкоз), злокачественные лимфомы (лимфогрануломатоз, лимфосаркома), аутоиммунные заболевания(сист.красная волчанка, ревматизм, склеродермия), в период выздоровления от о.инфекций, воздействие ионизирующей радиации в малых дозах, снижение продукции гормонов коры надпочечников, идеопатический гиперэозинофильный синдром - беспричинная эозинофилия.

Снижение количества эозинофилов - в о.период инфекций и интоксикаций, при повышенной продукции кортикостероидов,гипоплазии костного мозга, лучевой болезни.

Отсутствие – плохой прогностический признак, сдвиг влево до миелоцитов, метомиелоцитов, палочкоядерных, найболее частое морфологическое изменение – вакуолизация цитоплазмы.

В период аллергической реакции снижение количества эозинофилов и базофилов т.к. они скапливаются в очагах аллергических реакций.

Классификация лейкозов: - На острые и хронические.

Острые лейкозы – злокачественные опухоли системы крови, стволовых клеток - утрачивают способность дифференцироваться до зрелых форм, преобретают способность к неограниченному делению:

- лимфобластные

- миелобластные

Хр.Лейкозы

– миелоидн. (хр.миелолейкоз, эритремия,

мегакариоцитарный л., моноцитарный л.)

- лимфоидн. (хр.лимфолейкоз, миеломная б - нь)

Остр. Лейкоз – степень угнетения нормальных ростков кроветворения, лимфолейкоз, анемия, тромбоцитопения, в крови - бластн.кл., отсутствуют созревающие клетки (лейкимический провал или зияние), СОЭ - ускор.

Хр.лимфолейкоз.

- Лейкоцитоз обсолютн. лимфоцитоз за счет зрелых лимфоц. 70 - 90%, Нв и Er в N позже развивается анемия, тромбоциты в N.обн. ретикулоциты и бластные кл.

Хр. миелолейкоз.

Нв и Er в N – м.б. умеренная анемия.

В формуле сдвиг влево до промиелоцитов, мало эозинофилов, базофилов, встречаются нормоциты, фрагменты ядер мегакариоцитов. СОЭ в N.

Эритремия.

Нв - до 200, L - в начале в N, затем лимфоцитоз с нейтроф.

Сдвиг влево, много базофилов., тромбоцитов

Лейкимоидные реакции – изм. в крови и (или) органах кроветворения, напоминающие лейкозы. Хотя имеют принципиальные отличия лейкозоподобных реакций от опухолей системы крови: наличие конкретной причины (их вторичность), переходящий характер – исчезают после лечения основного заболевания и никогда не трансформируются в тот лейкоз, который напоминают.

Причины ЛР – разнообразны: тяж. бактериальн. и вирусн. инф., интокс. Энд - и экзог. характера, кислород. голод., о.кровотеч., лечен. кортикостероидами или др. препар. - цитостатиками.

Лабораторная диагностика инфекционного мононуклеоза

Инфекционный мононуклеоз: - самостоят. забол. (детского и молодого возраста, пожилые б. редко) - возб. Вирус Эпштейна –Барр, цитомегаловирус, реже др.вирусы сем.герпеса, избирательно пораж. В - лимфоциты – в рез.чего происх. бласттрансформация большего числа клеток. Параллельно на параж. клетки реагируют Т - лимфоциты, в переф. крови появл. в больш. кол - ве активированные лимфоидные клетки (назыв. - атипичные мононуклеары)

- Острое начало, высокая t, ангина, увеличение лимфоузлов, ув. селезенки.

Кровь: Нв и Er в N, L - тоз умеренный.

Формула: увелич. кол - ва лимфоидных клеток атипичных мононуклеаров до 15% - 20% (на различной стадии развития) может достигать 70% клеток в лейкоцит. формуле. при осложн. - сдвиг влево и дегенеративн. измен. нейтроф.

Диагноз ставят на основании обнаружения в лейк. формуле атипичных мононуклеаров, а для подтверждения - серологические реакции, опред. уровень гетерофильных антител (реакция Пауля - Буннелля). В последнее время исп. иммуноферм. и молекул. - генетич.(ПЦР) методы диагностики.

Образование и морфология тромбоцитов. Определение количества тромбоцитов. Клинико-диагностическое значение

Тромбоциты – 3 форм. элемент крови, кровяные пластинки 2 - 4 мкм - осколки гиганских клеток костн. мозга - мегакариоцитов - уч. в гемостазе (1 - 2 гемостаз) в N - 150 - 450. (сост. из перефир. зоны - гиаломира и центрацьной зернистой зоны - грануломер). Срок жизни 70 д.

Количество Т. - непостоянно и колеблется – во время сна, после приема пищи, и т. д.

< Тромбоцитоз - о. кров. потеря, физ нагрузки (спортсмены), асфикция, ожоги, после операционный период (спленоктомия - удаление селезенки), в предменструальный период (до 90 - 100),при эритремиях, при некоторых опухолях, метостазах.

>Тромбоцитопения - при аппластич. анемиях, о. лейкозах, при нарушении образования в костн. мозге (после облучения, лечен.цитостатиками), геморрагических диатезах, поражении почек, печени, инф.заб., при синдроме ДВС (дессиминированная внутрисосудистая свертываемость).

Качественные изменения зависят от морфологических особенностей мегакариоцитов:

- молодые с молодой зернистостью

- старые с грубой зернистостью

- вакуолизированные формы.

Тромбоциты - опр.2 - способа:

- прямой – подсчет в счетной камере (Горяева)

- непрямой - в окрашенных мазках.

N - 150 - 450*10*9/л

Основные лабораторные признаки диагностики анемий. Классификация анемий

Анемия - малокровие, группа заб. характеризуется снижением Нв и Er. класиф. анемий по клин. признакам (авт.Идельсон).

О. постгеморрагическая (Rt - цитоз, полихроматоф.)

Железодефицитная (Гиперхром., Н.цв.показ.Микроцитоз)

Сидероахрестическая (не усваение, дефицит В12 и фолиевой кислоты)

Нарушение синтеза РНК и ДНК, или мегалобластная.

Гемолитическая.(Выс. Rt - цитозом)

Гипоапластичесеские - угнетение пролиферации кл. костн. мозга.

Мегапластические - замещение кл. костн. мозга опух.

Дополнительная классификация анемий:

1.по степени тяжести:

- легкая ст. - 110 - 90

- сред.ст. - 90 - 70

- тяж. ст - ниже 70

2.по диаметру Er:

- нормоцитарные _ 6,7 - 7,7мкм

- микроцетарная >6,7мкм

- макроцитарная <7,7мкм

- мегалоцитарная <12мкм

3.по содержанию Нв в 1 Er.

- нормохромная – 28 - 33 Пкгр

- гипохромная - > 28 Пкгр

- гиперхромная - < 33 ПКгр

4.по степени ренегерации костного мозга (уровень содерж. ретикулоцитов)

Железодефицитные анемии, лабораторная диагностика, картина периферической крови

1.Fe - дефицитная анемия - распростр. заб. - сниженгие Fe в

сыворотке, нарушение образования Нв и Er (микроциты) и развивается гипохромная анемия.

- кровопотери о. и хр. при забол. ЖКТ, дезентерии.

- алиментарн. - недостаток пост. Fe с пищей, нар.всасыв. из - за заб. ЖКТ - энтероколиты, энтериты.

Клетки - Er, бледные, мишеневидные, при.тяж. анем. - вторичные бласты. Снижается сывороточное Fe в биохим ан. Отмечается снижение СОЭ, в костном мозге отмекчается гиперплазия красн. кост. мозга. при выраж. Fe –деф. Костн. мозг. м.б. - серым (полихроматофилов) в тяж.формах – синий (за счет диф.Fe)

2 О.постгеморрагическая – быстрая потеря значит.колич.крови (травмы –сосудов,легочные, маточные, желудочные - кровотечения), в начале формула м.б. неизменина - зависит от колич. потери крови (отмечается бледность кожных покровов, отдышка, тахикордия, цианоз, рвота), спустя время сниж.Нв, Er нормохромные, лейкоцытоз, сдвиг формулы влево до миелоцитов, тромбоцитоз, СОЭ ускоренное. Изменения появляются не сразу вследствии включения компесаторных функций организма. На 4 - 5 сутки в крови появляются ретикулоциты полихроматофилы (не зрелые Er),нормоциты. В результате кровопотери – гипоксия стимул.гипопоэтин (увел.кол.клет.красн.ряда) происходит постепенное восстановление показателей крови.

3. Сидероахристические - или сидеробластные – Fe - достаточно - синтеза не происходит т.к. нехватает перфирина, Fe - накапливается вызывая тяж.заб.

4.В12 - фоливая анемия - мегалобластная - связ с нарушением синтеза ДНК и РНК длясозревания Er появл.мегалобластные клетки - гиганские. Внутр.фактор - гастромукопротеин выдел.железами желудка. Внешний фактор - В12 и фолив к - та. Нарушение поступления спищей, выработи внутр.ф.,повыш.потребл,глистн.инвазии, аутоиммунные (появл.антител против внутр.ф.). В Er - т.Жолли, кольца Кбота, базофильная зернистость, лейкоцитопения, тромбоцитопения.

Правила взятия и хранения биологического материала для биохимических исследований

- забор производится одноразовым шприцем (а не иглой в пробирку).

- пробирки закрывают пробками.

- пробирки транспортируют в штативах, помещенных в бикс, на дне которого 4х слойная салфетка с дез.р - ром (кроме хлора).

- направление(я) в пакете рядом со штативом.

- пробирки пронумерованы согласно направлению(ям).

В направлении указываются ФИО, адрес, возраст, мед.уч. направившие материал, диагноз, время и дата забора материала, мед. уч. куда направлено и на какое исследоавание; печать мед.уч., печать врача.

Лабораторная диагностика мегалобластных анемий, морфологическая характеристика эритроидного ряда

Анемия - (от греческого - бескровие) - это сотстояние хар. снижением колич. Hb или Hb + Er в единице обьема крови.

Мегалобластные анемии связаны с нарушением ДНК, РНК, м.б. – приобретенная и наследственная. Характ. призн. явл. наличие в костном мозге мегалобластов - это крупные клетки красного ряда со своеобразной структурой хроматина ядра и цитоплазмы,

наруш. синтез нуклеиновых кислот в результате дефиц. вит. В12 или фолиевой кислоты. Сочетанный деф. встр. редко, только при наруш. кишечн. всасывания.

Er –колич. снижается в большей степени чем Hb, цветной показатель больше 1,5 до 1.6.

В Er - т. Жолли, кольца Кебота, базофильная зернистость, лейкоцитопения, тромбоцитопения, колич. Rt снижено или на нижней границе нормы. Наблюдается сдвиг в право, появляются полисегментированные найтрофилы (сегментов до 10 - 12) при N до 5. Одновременно м.б. сдвиг влево до метомиелоцитов и даже миелоцитов. Уменьшаестя кол - во эозинофилов вплоть до исчезновения. Снижается кол - во моноцитов, относительный лимфоцитоз.

Характеристика агранулоцитоза, как клинико - гемаррагического синдрома

Агранулоцитоза - клинико - гематологический синдром, хар. резким снижением в перефирической крови кол - ва Лейкоцитов менее1,0 или агранулоцитов менее 0,75 вплоть до полного их исчезновения.

Различают 3 формы:

Миелотоксический - разв. в результате воздействия на костный мозг, угнетающих факторов гранулоцитопоэз. Появл.кл. - предшественницы миелопоэза, снижается активность, наруш. дифференц. кл. гранулоц. ряда.

Для возникнов. нужна наследственная предрасположенность, гиперчувствительность к определенному лекарству - (цитостатики, амидопирин, аминозин и т.д.)

Иногда заб. может развиваться на фоне вирусных инф. (инф.монуклеоз, грипп) На ряду с угнетением гранулоцитопоэза часто страдают Tr - ный и красный ростки, появляется угроза кровотечения (геморрагический синдром) присоедин. анемия. Уменьш. кол - во L, моноциты, нейтроф. (в един. токсигенная зернистость цитопл., пикноз ядер). Отсутств. эозинофилы и базофилы. Tr - пения, Rt – отсутствуют, Er –снижено кол. В костном мозге сниж. общее кол. клеток – поражаются все три ростка (белый, красный, тромбоцитарный) при тяжелой форме может наступить полное опустошение костного мозга.

Иммунный агранулоцитоз – появление антител,

м.б. гаптеновым - при приеме лекарств гаптенов

(гаптен - это в – во соед. с белком – станов.антигеном и вызыв. образ. антигранулоцитарных антител: лейкоагглютеинов и лейколизинов)) при повторном приеме этих лекарств – разрушение гранулоцитов в переф. крови и в костн. мозге;

и аутоиммунным – разв при аутоиммунных процессах, системной красной волчанке, ревмат. артрит, гломерулонефрит,х р.лимфолейкозе; образ. аутоантитела к лейкоцитам.

В переф.крови – уменьш.кол - во гранулоцитов и моноцитов, в сохр. единичных нейтрофилах – дегенеративные изменения (токсиг.зернист.цитопл., пикноз,распад ядер), в костн.мозге сниж.

кол - во клеток. Er и Tr - ростки сохранены. При выздоровлении в переф. крови сначало появл. плазмот. кл., един. миелоциты, одноврем. - моноцитоз, а затем зр.гранулоциты; кол - во быстро увелич. в теч. недели сост. крови нормализуется.

Идиопатический - (причина разв. болезни не установлена)

Основные методы определения гемоглобина. Клинико - диагностическое значение

Нв - 2 - метода:

- гемиглобонцианидный (принцип: Hb - при взаимодействии

Fe - синеродистым калием окисляется в метгемоглобин (гемиглобин), образ. окраш. цианметглобин – интенсивн. = содерж. Hb)

- определение по Соли

КДЗ - снижение уровня Hb явл. одним из симптомов анемии (постгеморрагич., Fe деф., сидеробластных, В12 деф.), а так же при повыш. объема плазмы.

Методы количественного определения лейкоцитов. Понятие – лейкоцитозы и лейкопении, клинико-диагностическое значение

L – делятся на 2 группы:

– гранулоциты (нейтроф., эозинофилы, базофилы)

- агранулоциты (лимфоциты, моноциты)

L – ф. защитная - фагоцитоз (уничтожение всего чужеродного - белков, вирусов, бактерий)

- не специфический, и специфический - иммунитет

(антитело + антиген).

Нейтрофилы – защитную путем фагоцитоза, могут секретировать ферменты и в - ва блокирующие восполительный процесс.

Эозинофилы - так же уч. в фагоцитозе, могут уничтожать личинки и др. в - ва, уч. в аллергических реакциях, принимают участие в сверт. крови.

Моноциты способны переходить в органы и ткани (развиваться до макрофагов) и вновь возвращаться в кровоток (гистиоциты).

Базофилы - в свер. крови и противо. сверт системе (гепарин, серотонин).

L – подсчет - в 1мкл крови в камере Горяева, в

N 4 – 9*10*9/л

КДЗ: – увеличение количества лейкоцитов – лейкоцитоз

(м.б. при инфекционно – воспалительных процессах, интоксикациях, лейкозах.)

- уменьшение количества лейкоцитов – лейкоцитопения

(м.б.при угнетении кроветворения, вирусных инфекциях)

На уровень количества лейкоцитов влияет:

физическая нагрузка, прием пищи, эмоциональное состояние и др., а так же количество нейтрофилов.

Подсчет лейкоцитарной формулы, методы окраски, клинико-диагностическое значение

Техника приготовления мазков крови: на приметное стекло нанести небольшую каплю крови, отступить от узкого края 1 см., положить на край стола, взяв в левую руку за узкий край. Правой рукой шлифованным стеклом под углом 45/ продвинув до соприкосновения с каплей крови, распределить по всему стеклу каплю крови, остатки крови со стекла удалить ватным тампоном, оставить сохнуть на несколько минут, подписать карандашом номер.

Окраска по Романовскому: мазки складываем на мостик над лотком или в карзинку, фиксируем 1 - 2 мин., покрываем краской на 20 - 45 мин., промываем под струёй водой 1 - 2 мин., просушиваем. С иммерсионным маслом считаем мазки в метёлочке мазка под микроскопом – лейкоцитарную формулу до 100 клеток.

КДЗ: ЛФ - % соотношение различных видов клеток, полисегментированные найтрофилы (сегментов до 10 - 12) при N до 5.,

В Er - т. Жолли, кольца Кебота, базофильная зернистость, сдвиг в лево или право, обнаружение мегалобластов - это крупные клетки красного ряда со своеобразной структурой хроматина ядра и цитоплазмы и др. аномалии.

Определение количества ретикулоцитов, виды ретикулоцитов, состояния, характеризующиеся увеличением и снижением их количества

Ретикулоциты - выявление зернисто - сетчатой субстанции Er, сохранившие остатки ретикулума (РНК при окраске щелочными красками с дальнейшим обнаружением их в мазке крови (азуром)

N – 0,5 - 1 %.

Увеличение количества – активация кроветворения в костном мозге (при о. кровопотерях и гемолитических анемиях)

Уменьшение кол - ва – снижение кроветворения в костном мозге (при гипоплпстических и апластических анемиях, анемиях с дефецитом Fe, витамина В12 или фолиевой кислоты, а так же при приеме цитостатиков и лучевой болезни).

Скорость Оседания Эритроцитов, методика постановки и влияющие факторы

СОЭ - м - д Панченкова в N – жен. 2 - 15 мм/ч;

муж. 1 - 10 мм/ч.

Повышенное СОЭ – инф.бол., восп.заб., септические и гнойные процессы, анемии, лейкозы, злокачеств. опухоли, коллагенозы (ревматизм), забол. печени и почек, сахарном диабете, тиреотоксикозах, миеломной болезни.

Понижение СОЭ – эритремия, ожоги, холера, врождённые пороки сердца, серповидно - клеточная анемия, вторичные эритроцитозы.

Автоматические методы анализа клеток крови

Использ. различные автоматические гематологические анализаторы. Делятся на разные классы:

I класс – 8 - 10 параметров, без дифференц. L;

II класс - до 20 парам.,красн. крови и тромбоц., отр. по обьему L, Er, Tr; частичн.дифференц. L (Моноц., Эозиноф., Базофилов)

III класс - высокотехн. гемат. анал. с полной дефф. по 5 призн + полный разверн. ан. кр.

IV класс - тоже самое что 3 + дифференциация субпопуляций.

Определение группы крови и резус – фактора, характеристика антигенов и антител системы АВО

Группы крови: I (O) - a b

II (A) - b, нет a

III (B) - a, нет b

VI (AB) - нет ab

Определение с цоликлонами анти - А и анти - В.

Определение резус - фактора экспресс методом в пробирках без подогрева с универсальным реагентом антирезус.

2.определение резус принадлежности человека цоликлоном анти - D - супер.

Принцип – агглютинация – склеивание Er.

Определение общего белка в сыворотке крови, гипо и гиперпротеинонемии, клинико-диагностическое значение

Белки – высокомолекул. органич. азотосодержащие биополимеры, сост. в основн. из аминокистот и наход. в кл.

в коллоидном сост.

Белки выполняют функции:

наследственная (нуклепропеиды – участвуют в передаче наследственности),

транспортная (участвуют в переносе пит. веществ и удалении конечных продуктов),

регуляторная (поддерживает онкотическое давление, КЩС),

защитная (выработка иммунных белков – антител, ответ на действие микроорганизмов),

каталитическая (ускорение реакций),

структурная (входят в состав всех клеток и тканей, 1/5 часть тела).

Белки делятся:

простые – при гидролизе состоят из аминокислот

сложные – состоят из белковой части и не белковой – простетической.

Определение общего белка проводят биуретовым методом.

Норма белка в 65 - 85 грамм/л

Электрофорез белков – принцип – в электростатическом поле Б. движутся по смоченной буфероным рас - ром хроматографической бумаге, ацеталцеллюлитной пленке, крахмаловому, агаровому гелям со скоростью. завис. от величины электрического заряда и молекулярной массы частиц.

На автоматическом анализаторе «HITASHI »

КДЗ – комплексная оценка изменений всех выделяемых на носителе белк.фракций.

Диспротеинемия – наруш.соотношения между разл. Б.фракц.

Паропротеинемия – появл в плазме крови патологических,

не встреч в норме Б. - парапротеинов.

Исследование белкового спектра крови, электрофорез белков сыворотки крови. Типы протеинограмм

Белки – высокомолекул. органич. азотосодержащие биополимеры, сост. в основн. из аминокистот и наход. в кл. в коллоидном сост.

Делятся:

Простые - сост.только из аминокислот (альбумин,эластин, протамин,гистоны, коллаген)

Сложные – сод.в себе белковую часть и небелковые компоненты, (нуклеопротеиды, хромопр., гликопротеиды, липопротеиды, металопротеиды)

Определ. общ. белка - биуретовым методом (Кингслея - Вейксельбаума)

Сниж. - гипопротеинемия (сниж.синтез, с потерей бела, с повыш.распад.б.)

Повыш. - гиперпротеинемия (при миеломн.б., хр.инф., аутоиммун.заб, обезвож.организма)

Электрофорез белков – принцип – в электростатическом поле Б.движутся по смоченной буфероным рас - ром хроматографической бумаге, ацеталцеллюлитной пленке, крахмаловому, агаровому гелям со скоростьюя. Завис.от величины электрического заряда и молекулярной массы частиц.

Б. разделяются на 5 основных фракций: альбумин и 4 глобулиновые: а1 - , а2 - ,B - , у – глобулины, содержание котор. опред фотометрически или с использованием денситометрии.

КДЗ – исследования Б.Ф. - комплексная оценка изменений всех выделяемых на носителе белк.фракций.

Диспротеинемия – наруш.соотношения между разл. Б.фракц.

Паропротеинемия – появл в плазме крови патологических,

не встреч в норме Б. - парапротеинов.

Типы измен.:

- о. в. Процессы - Альбумин знач.сниж., увелич к - во: а1 - ,а2 - глобулиов.

- хр. в. проц. - общ. Б. не измен., альбумин умеренно сниж., увелич. а1 - , а2 - , B - , у – глобулины.

- синдром сниж. почечн. функции - знач. сниж. Альбумина, умеренно сниж. а2 - ,B - глобулины. (за счет сниж. ЛПОНП), при умер. сниж. у – глобулинов (G и А) – вследствии повыш. проницаемости почечного фильтра).

- злок.новообразования – резкое знач. сниж. Альбумина и значит. Увелич. всех глобул. фракц.

- гепатиты - (в следствии токсического поврежден.печени) и т.д.

Клинико-диагностическое значение исследования содержания мочевины, методы определения

Мочевина предст. собой диамид уголоной кислоты, образ. в печени в процессе обезвреж. аммиака. М. свободно проходит через мембраны клеток паренх. орг. и Er.

Абсолютная гиперазотемия - Повыш.содержание мочевины вызывается усиленным образованием компонентов остаточного азота (активация протеолиза и катаболизма белка), либо задержкой азотистых шлаков при наруш. выделит. функции почек при их патологии: хр. почечн. недост., о.и хр. гломерулонефрит, пиелонефрит, амилоидоз, поликистоз и др., при уменьшении фильтрации в клубочках почек из - за ухудшения центральной гемодинамики (у больных с декомпенсацией сердечно - сосудистой деятельности).

Внепочечная задержка гиперазотемия – при наруш. оттока мочи (камни мочевывод. путей, сдавл. опухолью, аденома и гепертрофия предст.жел.)

Метаболическая (продукционная) гиперазотемия – при усил. распаде белков (патологич. состояния, при инфекц. заб. протек. с лихорадкой и прогрессирующем распадом тканей – сепсис - дефтерия – скарлатина - круп. пневмония – туберкулез); сах. диабете, злок. новообразов., о. атроф. и тяж. цирозах печени, ожогах, перитонитах,

о. киш. непрох., гиперфункции коры надпочечников, о. инф. миокарда, отравл. ядами (мышьяком, фосфором, щелочами и др.)

Относительная азотемия - у больн. с явлениями сгущения крови при профузных поносах, усиленном потоотделении.

Методы определения сод. Мочевины – на 2 осн. группы:

Ферментативные (уреазные) и неферментативные (газомтрические или гипобромные, ксантигидроловые, диацетилмонооксимные, гипохлоридные)

Полуколичественные – диагност. Тест - полоски.

Колориметрический методы – осн. на реакц. Фирона, сост.в образ. окраш. прод. при взаимодейств. Мочевины и диацетилмонооксимом.

N в сыв.крови. - 2.5 - 8.3 ммоль/л; в сут.моче – 330,0 – 582,8 ммоль/л.

Более точными и специфич. явл. ферментативные методы.

- с прим.препар.уреазы.

Опр.мочев. - уреазным фенолгипохлоридным методом:

М. под действ. уреазы гидролизируется с обр. карбоната аммония, ионы аммония в присутствии нитропрусида с фенолом и гипохлоритом - образ. окраш. комплекс. интенсивн. окр. = конценрации мочевины.

N в сыв.крови. - 1.7 - 8.3 ммоль/л (100 - 500мг/л);

в сут. моче – 333 – 583 ммоль/л. (20 - 35 г/сут.)

Определение креатинина, геморенальные пробы, клиническое значение

Опред. креатинина:

неферментативн. (колориметрические и кинетические –

реакция образования окраш. комплекса с пикриновой кислотой).

энзиматические

кинетический метод - реакция Яффе. (СОЛАР)

У мужчин - 53 – 110 ммоль/л

У женщ. - 44 – 95 ммоль/л

КДЗ – увелич. Ретанционное – наруш. почек любого происхождения

снижение.

Увеличение продукционное – при кишечн. непроход., о. атроф. печени, пневмонии, лихорад.сост.

Снижение – уменьшение массы тела - мышечн.дистрофия, атрофии, параличи, парезы и др.

Для диагностики – расчет клиренса креатинина (геморенальная проба или клиренс теста):

Метод основан расчет очистительной способности почек – клиренса (чистить) - Коэффициент очищения. Сравнение содержания в - в в крови и в моче.

Повышение концентрации азота и его компонентов в крови свидетельствует о задержке азотистых «шлаков» в следствии нарушения почечного фильтра.

Клинико–диагностическое значение определения ферментов. Методы исследования

Ферменты (Энзимы) – спец. белки, роль – биокатализаторов (ускорителей хим. реакций) делятся на - простые (сост.только их аминокислот); - сложные – двукомпонентные – белковый компонент + апофермент, простетическая группа + кофермент – таких ферментов большинство. К этой группе относятся – трансаминазы, ЛДГ, ПДГ, транскетолазу.К простетической гр. в молекуле энзима (фермента) + витамины, нуклеотиды, углеводы, некатор. металлы, ост. фосфорн. кислоты и др. соединения.

Ингибиторы – подавляют ферментативную реакцию.

Активаторы – повыш.скорость ферм.реакций.(Са+, Мg+, К+, Na+,

Сl - (анион) и др.)

В печени содерж. - АЛТ, АСТ, ЛДГ, ЛАП, ЩФ;

В сердце – КК, ЛДГ, АСТ;

В поджелуд. жел. – а – амилаза (диастаза), липаза, ЛДГ;

В костной ткани – ЩФ;

В предстательной жел. – КФ

Методы исслед.:

1.Колориметрические – инкубац.сывор.с субстрактом в буфере, опред.время, реакцию останавливают и образующие продукты при помощи химической реакции определяют, либо замеряют количество оставшегося субстракта.

2.Спекторофотометрические – (кинетические) - непрерывно или периодически в ходе ферментативной реакции определяют потребление субстракта или кофермента, либо образование продукта.

КДЗ – ферментная диагностика используется для:

- для распознавания наследственных нарушений обмена веществ (первичные наслед.энзимопатии)

- для диагностики и дифференциальной диагностики приобретенных заболеваний (вторичн. приобрет. энзимопатии) – можно выявить особенность протекания болезни почти на молекулярном уровне.

Повышение активности ферментов – за счет выхода фермента из органов или тканей в кровяное русло.

Определение активности аминотрансфераз, клинико-диагностическое значение

Аминотрансферазы – это ферменты, осуществ. процессы межмолекулярного переноса аминогрупп, т.е. трансаминирование (переаминирование) - процесса. Трансаминирование играет ключев. Роль в промежуточном обмене, обеспечивает синтез и разрушение отдельных аминокислот в организме. АСТ и АЛТ.

Методы определения активности аминотрансфераз в сыворотке крови делятся на 2 основные группы:

Колориметрические (конечной точки.)

Кинетические (спекторофотометрические)

КДЗ – для диагностики

инфаркта миокарда АСТ, который не диагносцируется электрокардиографом (кардиограмма)

- (гемолиз Er – не искажает результат);

забол. печени АЛТ (гемолиз Er – искажает результат т.к. в 6 раз превышает содержание внутриклеточно)

(вирусный, токсич. Гепатит), мышечной патологии и др.

В N АСТ –до 31 Е/л

В N АЛТ –до 32 Е/л

Определяется на «Хитачи»

Клинико-диагностическое значение определения активности фосфатаз

Фосфатазы – ферменты отщепляющие остаток фосфорной кислоты от ее органических эфирных соединений.

ЩФ – содержится практически во всех тканях человека, прежде всего в костной тк., паренхиме и стенках желчных протоков печени, канальцев почек, предстательной и молочной железе, клетках слизистой оболочки кишечника, плаценте. Особенно много в растущих костях, желчи и плаценте, в биологических жидкостях тела (мочу, кал, слюну…).

КФ – кислая фосфатаза - фермент – содержится главным образом в предстательной железе, активность её в 1000 раз больше чем в костной ткани, печени, селезенке и почках.

Колориметрические (конечной точки.)

Кинетические (спекторофотометрические) в N ЩФ у муж.0,90 – 2,29; у жен. 0,74 – 2,10; у детей 1,20 – 6,30.

КДЗ – возрастание активности ЩФ – 2 вида патологий: костные заболевания, связан.с пролиферацией остеобластов, и заб. сопровожд. явлениями холестераза (заб.печенит – желтуха, закупорка желчных протоков камнями, спайками,опухолью, лейкимия с разрушением L и выход фермента в кровь)

Снижение активности ЩФ – при замедл. росте детей, при гипотиреозе, авитаминозе С, старч.остеопарозе, при накоплении радиоактивн.в - в в костях.

Повыш.активности КФ –указ на новообразования в предст.железе (в N ЩФ), после операт.вмеш. на предст.жел., биопсия.

Определение активности а - амилазы в сыворотке крови и моче, принцип метода

а - амилаза (диастаза) – фермент - осущ. гидролитическое расщепление полисахаридов (крахмал, гликоген, амилозы и др.продуктов содержащих остатки глюкозы) до декстринов и мальтозы.

Метод определения активности а - амилазы по Каравея (микрометод)

Метод базируется на колориметрическом определении концентрации крахмала до и после его ферментативного гидролиза.

В N в сыворотке крови 16 - 30 г/(ч.л), в моче 28 - 160 г/(ч.л)

Определение активности а – амилазы в биожидкостях энзиматическим методом по конечной точке: интенсивность окраски = активности фермента.

КДЗ: значительное возрастание активности фермента – при заболеваниях поджелудочной железы: о.панкреатит – в сыворотке крови активность а - амилазы повышается и достигает максимума к 12 - 24 ч после развития панкреатита и снижается на 2 - 6 сутки, а в моче может оставаться повышенной до 7 суток. Реже встречаемое или не столь выраженное увеличение - при о.холецистите и др.заб. желчевыводящих путей, перфорации пищевода, язве желудка, при заб. слюнных желез и др.заб.

Клинико-диагностическое значение определения общей активности ЛДГ и её ферментов

ЛДГ (лактатдегидрогеназа) – гликолитический фермент, обратимо катализирующий окисление L - лактата (молочной кислоты) в пируват (пировиноградную кислоту)

В плазме выявлено 5 изоэнзимов ЛДГсостоящих из субединиц:

М (muscie) и H (heart) - 5 изоформ:

ЛДГ – 1 (НННН), ЛДГ – 2 (НННМ), ЛДГ - 3 (ННММ), ЛДГ - 4 (НМММ),

ЛДГ - 5 (ММММ)

ЛДГ - 1 –в основном находится в сердце.

ЛДГ - 5 – в печени.

Методы определения:

кинетические – на оптическом тесте Варбурга в N 174 - 516 Е/л

2.колориметрические – согласно которым определяется количество образовавшегося продукта или потребляемого субстракта после фиксированного инкубационного периода.

КДЗ: - при о.гепатите активность увеличена ЛДГ отмечается в первые недели желтушного периода - (ЛДГ_4, ЛДГ - 5) в первые 10 суток.

У больных инфарктом миокарда повышается активность фермента в первые 8 - 10 часов после начала приступа, максимума к 24 - 36 часам – (ЛДГ - 1, ЛДГ - 2)

Увеличению активности ЛДГ способствует прием алкоголя, некоторых лекарств. препаратов (анаболических стероидов, тестостерона, обезболивающих препаратов, сульфониламида, кодеина,и др.преп.)

Регуляция углеводного обмена, роль углеводов в организме. Определение содержания глюкозы в организме

Углеводы – органические вещества в состав которых входит углерод, водород и кислород.

Роль углеводов:

Энергитическая, пластическая (синтез сложных ферментов, белков, нуклеиновых кислот, входят в состав клеточных мембран, участвуют в построении клеток опорно - двигательного аппарата), защитная (входят в состав слизи, секретируемых желез, способствуют обезвреживанию и выведению токсических веществ), Депонирующая (запас.питательных веществ в печени в виде гликогена – распадается до глюкозы), Специфическая – связаны с белками, определяют специфичность групп крови человека.

Регуляция углеводного обмена: выделяют 3 уровня: нервный, гормональный и тканевый; регулируется ЦНС и эндокринной системой.

ЦНС - > в печень – распад гликогена – глюкозы - >до N уровня глюкозы в крови - > ЦНС - в поджелудочную железу, и из B - клеток островкового аппарата –> инсулин (способств.усвоению глюкозы тканями).

В плазме крови в наибольшем количестве – глюкоза (является ценнейшим питательным в - вом особенно для мозга).

Колориметрические методы делятся на ферментативный и неферментативный (образование окрашенных соединений - ортотолуидиновый метод, прост в исполнении, точен и специфичен - , ручной метод, влечет – канцерогенез). Шире используют энзимные реагенты – глюкозооксидазный

(количество связанного кислорода или образов.перекиси водорода = содержанию глюкозы) и гексогеназный.

Гексокиназный - Ферментативный метод опр.глюкозы (глюкоза под воздействием гексокиназы и АТФ превращ.в глюкозо - 6 - фосфат, который при взаимодействии с окисленным НАД под влиянием Г - 6 - ФДГ преобразуется в глюконат - 6 - фосфат и восстановленный НАД) - позволяет получить результаты за меньший промежуток времени (3мин) с применением спекторофатометра снабженного термостатируемым кюветным отделением, или полу - автоанализатора.

В N в сыворотке 4,2 – 6,1ммоль/л

В N в моче до 0,8 ммоль/л

Полуколичественный и количественный экспресс – определение глюкозы в крови и в моче с использованием методологии «сухой химии» - визуальной или фотометрической оценки исследуемой жидкости.

(Тест полоски)

Клинико-диагностическое значение определения липидов. Методы определения уровня холестерина

Липиды - гр. разных по хим. природе биологич. важных в - в, проявл близкие по физич. и физико - хим. свойствам. Их обьедин. способн. хорошо раствор. в жиров. растворителях и незначительно в воде. Вместе с белками и углеводами сост. основной субстракт мембран клеток.

К липидам относят – жиры (нейтральные) - триглицириды, холестерин (общ.своб.и связ.), фосфолипиды (липиды содерж. обяз.компонент - фосфор), гликолипиды.

Методы определения холестерина – на автоматическом анализаторе «Хитачи » или метод определения общего холестерина (метод Илька) колориметрический метод (длина волны 590 - 630нм(ФЭК),норма Холест. 3.0 - 5.2ммоль/л

- принцип: ХС в присутствии уксусного ангидрида, смеси уксусной и серной кислоты дает зеленое окрашивание, интенсивность которого = содержанию холестерина.

КДЗ:

Гиперхолестеринемия – фактор риска коронарного атеросклероза, ИБС и инфаркта миокарда. Генитические нарушения в обмене ЛП.

Вторичная Гиперхолестеринемия - при забол.печени (обтурационной желтухе), поражениях почек (гломерулонефрит), злокачественных образованиях поджелудочной железы и простаты, подагре, гипертонической бол., эндокринных расстройствах, гипотериозе, сах.диабете, хр.алкоголизме, гликогенозе 1т., ожирении.

Снижение уровня холестерина – гипохолестеринемия – при голодании, при поражении ЦНС, умственной отсталости, гипертиреозе, о.инф.заб., о.панкреатите, и др.заб.

Исследование пигментного обмена. Виды желтух, методы определения билирубина в сыворотке крови

Источниками образования пигментов служат Hb. Er живут 100 - 120 дней. При разрушении в кост.мозге, силезёнки, печени - происходит распад Hb – образуется пигмент зелёного цвета – вертоглобин. на железоглобин и глобинбиливердин, под воздействием ферментов биллирубин (номальная составляющая часть крови) не прямой, свободный.

Далее неконьюгированный биллирубин поступает в печень под действием трансферазы соединяется с глюкороновой кислотой и образует коньюгированный (прямой, связанный) биллирубин – водорастворим, выделяется мочёй, поступает в желочный пузырь кишечник, в тонком кишечнике, под влияние флоры восстанавливается до стеркобиллиногена и мезобиллирубиногена, выделяется с калом, окисляется до стеркобиллина; через большой круг кровообращения. Через почки выделяется с мочёй в виде уробиллиногена, окисляясь воздухом превращается в уробелин.

Норма биллирубина 8,6 – 20,5 мкМоль/л

Определение биллирубина в сыворотки крови – метод основан – коньюгированный биллирубин даёт с деазореактивом (сульфаниловая кислота) розовое окрашивание, а не коньюгированный биллирубин даёт окрашивание после добавления кофеина. По интенсивности окрашивания судят о содержании общего билирубина (коньюгированный + неконьюгированный).

Норма общего 11,1 мкмоль/л

Коньюгированный 2,58 мкмоль/л

Неконьюгированный 8,56 мкмоль/л

Методы исследования желудочного содержимого. Клинико-диагностическое значение

Определяется общая кислотность, свободная НСL и связан.

НСL.

в N общ. – 40 - 60 ммоль/л.

Своб.НСL – 20 - 40 ммоль/л.

Связ.НСL - 10 - 20 ммоль/л.

Кисл.ост. - до - 10 ммоль/л.

Гиперсекреция – язв.б - нь ЖКТ, желчнокаменная б - нь, гастродуодениты.

Гипосекреция – гастриты, рак, злокачеств.опухоли, анемия.

Отсутствие НСL - ахлоргидрия.

Отсутствие НСL и пепсина – ахилия.

Метод - зондовый: Титрование по Михаэлису.

Реактивы: - 0,1Н – NaOH (едкий натрий), 1% - спирт.р - р. Фенолфталеина 0,5% - р - р. диатиламидоазобензола.

I отметка – розово - желтое окрашивание – св.HCL

II отметка - лимонно желтое окрашивание

III отметка - розовое окрашивание – общая кислотность.

При отсутствии св.HCL определяют её дифицитом, титруют до розово - желтого окрашивания 0,1H - HCL.

Метод Топфера (зондовый метод иссл.) - прим.для титров.сока, в котор.отсутств.св.HCL.

Дефицит HCL - опр.из любой пробы, кроме натощак - отсутствует св.HCL.

Опр.дебита HCL - иссл.абсолютную величину продукции HCL во времени дебит - час HCL.

Опред.молоч.к - ты - реакция Уфельмана в натощаковой пробе при отс.св.HCL. Молоч.к - та появл.при выраж.ахлоргидрии, заст.явл.в жел.,онкообр.,

при патол.брожении - палочкой молочнокислого брожения - указ.на отсутствие св.HCL.

Беззондовые методы иссл.желуд.сока: с применением ацидотеста 9опр.кослотообразующую, пепсинообр.и эвакуаторно - моторную фун.желудка. (больн.опор.мочев.пузырь и выпивает 3 тест - драже, отмеч.время, через 10 мин. Пьет 200мл.воды, через 1ч30мин. - собир. 1порц.мочи, через 1ч.30мин. повтор. 1порц. Иссл..уропепсин - 1мл.,

1 и 2 порц довод.до 200 мл.в колбе - 2.5 мл+2,5 HCL - коллориметрировать при зеленом светофильтре в кювете 5 мл.

в N почти одинакова = 1 - 1,5

При замедленной эвакуации больше 1,5

При ускоренной - меньше 1

Исследование функционального сост.желудка после введения стимулятора: стимуляция капустн.соком, хлеб.завтрак, 2 кофеин.табл.или 0,1 мл.0,1% гистамина на 10кг.веса пациента.

Опр.на ФЕК - в N у жен.0,15 - 0,25, у муж.0,15 - 0,30

Исследование дуоденального содержимого, методы и клиническое значение

Производят дуоденальное зондирование и получают несколько отдельных фракций сока – его исследование – установить функцианальное состояние желчевыводящих путей, желчного пузыря и локализацию патологического процесса (III порции).

1 - фаза –желчевыделение из общего желчн. протока - сфинктра до 10мл.

2 - фаза - соотв.периоду закрытия сфинктра (2 - 6 мин не выдел.желчь)

3 - фаза – получение желчи А (3 - 5 мин.)

4 – фаза – получение желчи В – пузырной – в результате сокращения пузыря.,

5 – фаза – получение желчи С – из печеночных протоков.

В N все порции прозрачны, почти не содержат клеточных элементов, pH желчи 6.6 0 7.6.