11156 (Маслянокислые бактерии как продуценты кислот), страница 5
Описание файла
Документ из архива "Маслянокислые бактерии как продуценты кислот", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "биология" из 2 семестр, которые можно найти в файловом архиве . Не смотря на прямую связь этого архива с , его также можно найти и в других разделах. Архив можно найти в разделе "курсовые/домашние работы", в предмете "биология" в общих файлах.
Онлайн просмотр документа "11156"
Текст 5 страницы из документа "11156"
Посев (или пересев) всегда проводят вблизи горелки. Пробирки при взятии мазка необходимо удерживать в наклонном положении, чтобы гарантировать стерильность культуры. Если их держать вертикально, то возможно попадание посторонних клеток микроорганизмов.
В пламени горелки тщательно обжигают бактериологическую петлю, держа ее в правой руке в отвесном положении. Мизинцем правой руки вынимают из второй пробирки ватную пробку и зажимают ее между мизинцем и ладонью, пробку первой пробирки зажимают между безымянным и средним пальцами правой руки. Снова слегка обжигают иглу и вводят ее в пробирку с культурой. Платиновая игла остывает очень быстро. Легким прикосновением ее к колонии микроорганизмов берут небольшое количество микробной массы и переносят во вторую пробирку.
Окраска клеток микроорганизмов по Граму. Метод дифференциации микробных клеток, основанный на различии в химическом составе клеточных оболочек. Сущность его в том, что в клетках одних видов микроорганизмов образуется нерастворимое в спирте соединение йода с основным красителем, у других видов это соединение временно появляется временно и после обработки спиртом растворяется. Микробы первой группы называются грамположительными, второй - грамотрицательными.
Техника окраски по Граму. На хорошо обезжиренное стекло наносят три тонких мазка разных культур микроорганизмов (два из них- контрольные с заведомо известным отношением к окраске по Граму). Мазки высушивают на воздухе, фиксируют над пламенем горелки и окрашивают в течение 1мин феноловым раствором генциана фиолетового (или кристаллического фиолетового), держа стекло в несколько наклоненном положении. Препарат, не промывая водой, обрабатывают, непрерывно покачивая ,96% -ным спиртом в течение 15-20 с. Время обесцвечивания очень существенно, при превышении указанного срока обесцвечиваются и грамположительные клетки, при недостаточном сроке обработки препарат окажется перекрашенным.
Промыв препарат водой, его окрашивают фуксином Пфейфера в течение 1мин. После этой обработки грамположительные микроорганизмы окрашиваются в темно - фиолетовый цвет, грамотрицательные имеют только цвет дополнительной окраски (фуксина) (Теппер и др., 1987).
2.2 Модельные микроэкосистемы
Небольшие автономные «миры» или микрокосмы, в бутылях или других сосудах могут имитировать в миниатюре природу различных экосистем. Эти небольшие «миры» можно рассматривать как Микроэкосистемы. Создание небольших, полностью закрытых систем, нуждающихся в лишь одной световой энергии (своеобразные миниатюрные биосферы), - очень сложная задача. Экспериментальные микрокосмы обычно варьируют от частично закрытых систем, в которых происходит газообмен с атмосферой, но не происходит обмена биогенными элементами и организмами, до полностью закрытых систем, включающих сообщества организмов, содержащихся в различных хемостатах и турбидостатах с регулируемым притоком и оттоком биогенных элементов и организмов. В хорошо смоделированных микрокосмах можно наблюдать многие или даже почти все основные функции и трофические структуры природной экосистемы, однако в силу необходимости разнообразие и размеры компонентов таких микрокосмов крайне невелики. Преимущества микроэкосистем для исследователя заключаются в том, что они имеют четкие границы, легко воспроизводимы и удобны для экспериментов. Не следует, однако, думать, что микрокосмы представляют собой копии той или иной конкурентной экосистемы, это всего лишь живые работающие модели (упрощения) природы.
Можно выделить два типа биологических микрокосмов:1) микроэкосистемы, взятые непосредственно из природы путем множественного засева культуральной среды пробами из различных природных местообитаний, и 2) системы, созданные путем сочетания видов, выращенных в «чистых» или аксенических, культурах (свободных от других организмов), пока не получится желаемая комбинация. Системы первого типа – это, в сущности, «демонтированная» или «упрощенная» природа, сведенная к тем микроорганизмам, которые могут длительное время поддерживаться и функционировать в условиях выбранного экспериментатором сосуда, культуральной среды, освещенности и температуры. Такие системы, следовательно, обычно имитируют какие – то определенные природные ситуации. Одна из проблем, возникающая при работе с такими производными экосистемами, состоит в том, что трудно определить их точный видовой состав, особенно состав бактерий (den et al, 1969). Начало использованию в экологии производных или «множественных» систем положили работы Г. Одума и его учеников (H. Odum, Hoskins, 1957; Beyers, 1963).
При втором подходе путем подбора первоначально изолированных и тщательно изученных компонентов создается система с известным составом. Получаемые при этом культуры часто называют гнотобиотическими (этот термин обсуждается в работе Догерти (Dougherty, 1959)), поскольку здесь точно известен состав и даже то, присутствуют или отсутствуют бактерии. Гнотобиотические культуры прежде использовали главным образом для изучения питания, биохимии и других аспектов жизни отдельных видов и штаммов или для изучения взаимодействия двух видов. Однако в последнее время экологи начали экспериментировать с более сложными полиаксеническими культурами в поисках путей построения автономных экосистем (Nixon, 1969; Taub, 1969, 1974).
Эти два противоположных подхода к созданию лабораторных микроэкосистем параллельны двум давно существующим подходам (холистическому и мерологическому) экологов к изучению озер и других больших систем, существующих в природе.
Существует широко распространенное заблуждение относительно «равновесия» в аквариуме с рыбами. Вполне возможно достигнуть некоторого приблизительного равновесия газового и пищевого режима при условии, что в нем мало рыб, а воды и растений много. Еще в 1851 г. Дж. Уорингтон «установил это удивительное и восхитительное равновесие между животным и растительным царствами» в аквариуме объемом 12 галлонов (54,6 л), поселив в нем несколько золотых рыбок, улиток и большое количество валлиснерии (водное растение), а с ними и множество разнообразных микроорганизмов. Уорингтон правильно оценил не только взаимодействие рыб и растений, но и отметил значение детритоядных улиток «в разложении остатков растений и водорослевой слизи», в результате чего «то, что иначе могло бы действовать как ядовитое начало, превращается в плодородную среду для роста растений». Большинство попыток любителей добиваться равновесия в аквариуме терпит неудачу из-за того, что для наличного количества ресурсов в аквариум помещают слишком много рыб (диагноз: элементарный случай перенаселения). Для полного самообеспечения одной рыбе среднего размера требуется много кубических метров воды и организмов, служащих пищей. Поскольку аквариум обычно держат дома, на работе или в школе ради «наблюдения за рыбами», помещая большое число рыб в малом пространстве, необходимо дополнительное питание, аэрация и периодическая очистка аквариума (Одум, 1986).
В данной работе была проведена постановка двух модельных микроэкосистем. В одной системе исследовалось влияние микрофлоры реки Кривая Болда на микробиологический состав садовой почвы. Во второй микроэкосистеме наблюдалось влияние микрофлоры озера Баскунчак на микробиологический состав садовой почвы.
Для постановки модельных микроэкосистем на дно двух высоких цилиндров V = 500 см3 помещалось 100 г. исследуемой почвы и заливалось 1000мл. воды в первом случае взятой из реки Кривая Болда, а во втором – из озера Баскунчак. В том виде экосистемы оставляли на открытом воздухе на 3 недели. По прошествии этого времени со дна цилиндра забирают небольшое количество почвы, просушивают ее на воздухе, затем взвешивают в количестве 1г, которую помещали в пробирку с 10 г. стерильной воды. Производили ряд последовательных разведений:10-1 -10-7. Из каждого разведения брали по 1 мл и помещали в высокие стерильные пробирки методом глубинного посева. В полученную культуральную жидкость заливают жидкую среду Виноградского до 3/4 объема.
Данные экосистемы исследовались также на среде Имшенецкого, при этом среда в высокой пробирке, предварительно простерилизованная засевается комочком почвы и помещается в термостат.
Необходимость изучения маслянокислых бактерий в водоемах была очевидной. Обследование разнотипных водоемов с широким спектром гидролого-гидрохимических и продукционных характеристик позволило впервые выявить экологические особенности распределения отдельных видов маслянокислых бактерий. Главными факторами, обуславливающими преимущественное развитие тех или иных бактерий в отложениях, являются концентрация, состав и доступность Сорг - соединений, отражающие трофический статус водоемов.C pasteurianum, сбраживающий простые сахара, доминирует вилах евтрофных озер донных отложений полисапробных зон с максимальным содержанием легкогидролизуемых соединений. C. butyricum и C. felsineum, ферментирующие различные полисахариды, преобладают в мезотрофных озерах и водохранилищах
, грунты которых формируются под влиянием аллохтонного стока и прибрежной растительности. C. acetobutyricum, обладающий способностью усваивать не только углеводы и аминокислоты, но также лигнино – гумусовые соединения, достигает максимума донных отложениях ацидных хтониоевтрофных озер. Таким образом, полученные на обширном материале новые для водной микробиологии сведения неоспоримо свидетельствуют о геохимической значимости маслянокислых бактерий, которые являются важнейшим звеном бактериальных сообществ донных отложений внутренних водоемов разного типа (Дзюбан, 2005).
Глава 3. Результаты исследований
При постановке накопительной культуры, выделении и микроскопировании маслянокислых бактерий получили следующие данные.
Таблица 1
Культуральные признаки маслянокислых бактерий на среде Виноградского
Степень разведения | Культуральные признаки | Морфологические признаки | |
Обнаруженные микроорганизмы | 10-1 | Образовался серый осадок, имеется муть и пленка. | |
Г+ удлиненные и утолщенные палочки, наблюдаются клостридиальные споры | Clostridium | 10-2 | |
Образовался серый осадок, появилась муть. | Г + удлиненные палочки с закругленными концами, образующие плектридиально расположенные споры | Clostridium | |
10-3 | Образовался осадок, имеется муть | Г + удлиненные палочки с закругленными концами, образующие плектридиально расположенные споры | Clostridium |
10-4 | Имеется осадок, имеется муть и газ | Г+ цилиндрические палочки с клостридиальными спорами | |
Clostridium | 10-5 | Образование осадка, мути и газа | |
Г+ палочки с закругленными концами со спорой на конце | Clostridium | 10-6 | |
Образование осадка, мути и газа | Г+ длинные и толстые палочки с клостридиальными спорами | Clostridium | |
10-7 | Имеется осадок, имеется муть | Г + удлиненные палочки с круглыми концами с плектридиальными спорами | Clostridium |
10-1 | Имеется осадок, образовалась муть | ||
Г + удлиненные палочки с закругленными концами, образующие плектридиально расположенные споры | Clostridium | 10-2 | |
Образовался газ, осадок серый, имеется муть | Г+ цилиндрические палочки с клостридиально расположенными спорами | Clostridium | |
10-3 | Образовался серый осадок, среда мутная, имеется газ | Г+ палочки с закругленными концами и со спорой на конце | Clostridium |
10-4 | Образовался серый осадок, образовался газ, имеется муть | Г+ удлиненные и утолщенные палочки, наблюдаются споры | |
Clostridium | 10-5 | Образовался осадок, имеется запах газа, муть | |
Г+ палочки с клостридиально расположенными спорами | Clostridium | 10-6 | |
Образовался серый осадок, имеется муть, образовался газ | Г+ длинные и утолщенные палочки, наблюдаются споры | Clostridium | |
10-7 | Образовался серый осадок и газ, имеется муть | Clostridium |
При анализе данной таблицы можно наблюдать, что здесь весьма интенсивно происходили процессы брожения: происходило помутнение среды, образовывался газ, чувствовался сильный запах масляной кислоты, выделился осадок, присутствовала пленка. При культивировании в среде создались анаэробные бактерии, поэтому обнаруженные здесь бактерии относятся к анаэробам и образуют споры.
Таблица 2
Культуральные признаки бактерий на среде Имшенецкого
№ пробы | Культуральные признаки | Морфологические признаки | Обнаруженные микроорганизмы |
10-1 | Среда зеленого цвета, фильтровальная бумага ослизнилась | Г+ длинные тонкие палочки, наблюдаются круглые споры на конце | |
Clostridium | 2 | Среда зеленого цвета, бумага ослизнилась | |
Г+ палочки со спорой на конце | Clostridium | 3 | |
Среда зеленого цвета, бумага ослизнилась | Г + тонкие прямые палочки, образуют споры (в виде барабанной палочки) | Bacillus | |
4 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г + тонкие палочки с круглой спорой на конце | Clostridium |
5 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г+ тонкие палочки со спорами на одном конце | |
Bacillus | 6 | Среда болотного цвета, бумага ослизнилась | |
Г + палочки, имеющие споры в виде барабанной палочки | Clostridium | 7 | |
Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г+ тонкие палочки, наблюдаются круглые споры на конце | Clostridium | |
1 | Среда зеленого цвета, бумага ослизнилась | Г+ тонкие прямые палочки, образующие споры в виде барабанной палочки | |
Bacillus | 2 | Среда болотного цвета, бумага ослизнилась | |
Г+ палочки с закругленным концом и со спорой | Clostridium | 3 | |
Среда болотного цвета, бумага ослизнилась | Г+ палочки с закругленным концом и со спорой | Clostridium | |
4 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г- палочка с круглой спорой на конце | Сlostridium |
5 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г- палочки с грушевидной спорой на конце | |
Clostridium | 6 | Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | |
Г- палочка с округлой спорой на конце | Clostridium | 7 | |
Среда желтого цвета, бумага ослизнилась | Г+ палочки со спорами на одном конце | Bacillus |
При анализе данной пробы наблюдалось присутствие на среде анаэробных спорообразующих палочек. Заметен интенсивный процесс разрушения клетчатки. Бумага ослизняется в результате образования оксикислот.