1625912752-e80690af42639ee00210abc3db33ddbf (С1)
Описание файла
Документ из архива "С1", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "биология" из 5 семестр, которые можно найти в файловом архиве НГУ. Не смотря на прямую связь этого архива с НГУ, его также можно найти и в других разделах. .
Онлайн просмотр документа "1625912752-e80690af42639ee00210abc3db33ddbf"
Текст из документа "1625912752-e80690af42639ee00210abc3db33ddbf"
С-1. Определение константы ионизации цитидина спектрофотометрическим методом
Приборы и реактивы:
-
Спектрофотометр
-
Кварцевая кювета толщиной 1см
-
рН-метр
-
мерные колбы на 50 мл
-
химические стаканы на 50 мл
-
пипетки на 1, 5, 10 мл
-
пробирки
-
6,6*10-5 М раствор цитидина
-
0,2 М раствор NaOH
-
0,4 М раствор муравьиной кислоты
-
0,1 М раствор HCl
-
0,1 М раствор NaOH
Экспериментальная часть:
А. Исходные растворы
-
Откалибровали pH-метр растворами с pH 4,01 и 9,18
-
Приготовили три буферных раствора (HCOONa-HCOOH) с одинаковой концентрацией формиата натрия (0,1М) и рН, равным соответственно 3,9; 4,1; 4,3: в 3 стакана на 50 мл залили по 25 мл 0,2 М раствора NaOH, затем каждый их них по очереди титровали 0,4 М раствором муравьиной кислоты до нужного pH с помощью pH-метра . Полученные растворы перелили в мерные колбы на 50 мл и долили дистиллят до риски, после чего тщательно перемешали.
Б. Рабочие растворы
-
приготовили рабочие растворы в соответствии с таблицей:
Растоворы
Объем исходных растворов
Раствор цитидина 6,6*10^(-5) М
Соответствующие растворы кислоты, щелочи или буфера
№1 (кислый)
9 мл
1 мл 0,1 М HCl
№2 (щелочной)
9 мл
1 мл 0,1 М NaOH
№3 (кислый)
3 мл
1 мл 0,1 М HCl + 6 мл H2O
№4(>>)
5 мл
1 мл 0,1 М HCl + 4 мл H2O
№5(>>)
7 мл
1 мл 0,1 М HCl + 2 мл H2O
№6 (буферный)
9 мл
1 мл буфера рН 3,9
№7 (>>)
9 мл
1 мл буфера рН 4,1
№8 (>>)
9 мл
1 мл буфера рН 4,3
-
приготовили контрольные растворы в соответствии с таблицей
| Контрольные растоворы | Объем исходных растворов | |
| H2O | Соответствующие растворы кислоты, щелочи или буфера | |
| № (1,3,4,5) | 9 мл | 1 мл 0,1 М HCl |
| №2 | 9 мл | 1 мл 0,1 М NaOH |
| №6 | 9 мл | 1 мл буфера рН 3,9 |
| №7 | 9 мл | 1 мл буфера рН 4,1 |
| №8 | 9 мл | 1 мл буфера рН 4,3 |
В. Определение характеристической длины волны и изобестической точки
-
Задали параметры измерения (область измерения: 240-310 нм)
-
Поместили в кюветное отделение контроль к раствору №1, зафиксировали его спектр как нулевой и провели измерение с раствором №1. Аналогично повторили действие с контрольным раствором и раствором №2.
характеристическая длина волны = 280 нм
изобестическая длина волны =264,5 нм
Dacid=0.6450. Dbase=0.2634
Г. Проверка закона Бера. Определение экстинкции протонированного цитидина
-
Рассчитали концентрацию цитидина в растворах № 3, 4, 5, 1
№1 = 59,4 мкМ, №3 = 19,8 мкМ, №4 =33,0 мкМ, №5 = 46,2 мкМ, контроль =0 мкМ -
На найденной характеристической длине волны 280 нм замерили оптическую плотность кислых растворов № 3, 4, 5 и 1 против соответствующего контрольного раствора
| № | m, μмоль/л | D | L, см | ε280, л/(μмоль*см) |
| контроль | 0 | -0,00262 | 1 | - |
| 3 | 19,8 | 0,200775 | 1 | 0,01014015 |
| 4 | 33,0 | 0,342489 | 1 | 0,01037845 |
| 5 | 46,2 | 0,486422 | 1 | 0,01052861 |
| 1 | 59,4 | 0,628405 | 1 | 0,01057921 |
| ε280=D/mL | ε280 ср =0,0104066 | |||
Д. Определение оптической плотности буферных растворов на характеристической длине волны
-
На полученной характеристической длине волны 280 нм измерили оптическую плотность буферных растворов № 6, 7, 8 относительно соответствующих контрольных растворов
| Раствор | Оптическая плотность D |
| №6 | 0,4466 |
| №7 | 0,4249 |
| №8 | 0,8315 |
Обработка результатов
| № | рН | D | α | μ |
| рКа |
| 6 | 3,9 | 0,4466 | 0,5199 | 0,008665 | 0,03461 | 3,906 |
| 7 | 4,1 | 0,4249 | 0,576 | 0,007312 | -0,1344 | 4,003 |
| 8 | 4,3 | 0,3815 | 0,6905 | 0,006459 | -0,3485 | 3,987 |
| рКа (сред) = 3,96 = 4,0 | ||||||
| pKa, (из литературы) = 4,1 | ||||||
Выводы: полученная рКа не совсем соответствует литературным данным, что, вероятно, связано с ошибками в экспериментах
