1625912753-16d9f021357541aa596116df2e26f79c (Х4)
Описание файла
Документ из архива "Х4", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "биология" из 5 семестр, которые можно найти в файловом архиве НГУ. Не смотря на прямую связь этого архива с НГУ, его также можно найти и в других разделах. .
Онлайн просмотр документа "1625912753-16d9f021357541aa596116df2e26f79c"
Текст из документа "1625912753-16d9f021357541aa596116df2e26f79c"
Х-4. Разделение смеси декстрана голубого, цитохрома С и хромата калия гель-хроматографией
Приборы и реактивы:
-
Коллектор фракций
-
Фотоэлектроколориметр (ФЭК)
-
Колонка с сефадексом G-75
-
Пипетка на 1мл
-
Пробирки
-
Элюент = водный раствор NaCl, 9 г/л
-
Водные растворы, содержащие NaCl, (18 г/л)
а) голубого декстрана 2000 (3,3 мг/мл)
б) цитохрома С (2,5 мг/мл)
в) хромата калия (5 мг/мл)
Экспериментальная часть:
-
Ознакомились с работой коллектора фракций и ФЭК
-
Заполнили ячейки коллектора пробирками
-
Измерили скорость элюции: засекли, за сколько секунд наберется 10 мл в мерном цилиндре
Скорость элюции = 10 мл/(392 с)=0,0255 мл/с -
Посчитали и установили время шага коллектора фракций исходя из того, что нужно набрать в пробирку 4-5мл. Шаг коллектора 27.
-
Перекрыли колонку и удалили элюент над поверхностью геля
-
Пипеткой на 1 мл равномерно нанесли исследуемую смесь. Дали впитаться в гель и залили элюентом
-
Измерили параметры установки:
* высота столба геля =28,2 см
*диаметр колонки = 2 см
*диаметр шланга = 0,2 см -
Дождались, когда голубой декстран спустится ближе к шлангу и начали измерять оптическую плотность на ФЭК в кювете толщиной 5мм (голубой декстран на 670 нм, цитохром С и хромат калия на 400 нм).
| № | D | № | D | № | D | № | D | № | D | № | D |
| 1 | 0,15 | 11 | 0,2 | 21 | 0,57 | 31 | 0,46 | 41 | 0,52 | 51 | 0,13 |
| 2 | 0,19 | 12 | 0,18 | 22 | 0,69 | 32 | 0,42 | 42 | 0,52 | 52 | 0,11 |
| 3 | 0,24 | 13 | 0,17 | 23 | 0,75 | 33 | 0,4 | 43 | 0,46 | 53 | 0,1 |
| 4 | 0,48 | 14 | 0,12 | 24 | 0,8 | 34 | 0,39 | 44 | 0,39 | 54 | 0,08 |
| 5 | 0,7 | 15 | 0,09 | 25 | 0,85 | 35 | 0,42 | 45 | 0,35 | 55 | 0,06 |
| 6 | 0,8 | 16 | 0,085 | 26 | 0,86 | 36 | 0,5 | 46 | 0,29 | 56 | 0,03 |
| 7 | 0,69 | 17 | 0,12 | 27 | 0,8 | 37 | 0,48 | 47 | 0,25 | ||
| 8 | 0,44 | 18 | 0,26 | 28 | 0,7 | 38 | 0,52 | 48 | 0,21 | ||
| 9 | 0,33 | 19 | 0,34 | 29 | 0,64 | 39 | 0,56 | 49 | 0,17 | ||
| 10 | 0,21 | 20 | 0,44 | 30 | 0,54 | 40 | 0,6 | 50 | 0,15 |
| Тип геля | Сефадекс |
| Элюент | Раствор NaCl 9 г/л |
| Скорость элюции | 0,026 мл/с |
| Время отбора одной фракции | 180 с |
| Объем одной фракции | 2 мл |
| V0= Ve декстрана | 24 мл |
| Vt – объем геля в колонке | 92,6 мл |
| Vt –V0 | 68 мл |
| компонент | Ve , мл | Vе –V0, мл | Kav |
| Цитохром С | 69 | 40 | 0,67 |
| Хромат калия | 97 | 68 | 1,05 |
| компонент | Ve , мл | ω, мл | n | ВЭТТ |
| Цитохром С | 69 | 40 | 47,61 | 0,61 |
| Хромат калия | 97 | 52 | 55,6 | 0,53 |
ВЭТТ=h/n
