12935 (Определение интегральной антиоксидантной способности растительного сырья и пищевых продуктов), страница 2
Описание файла
Документ из архива "Определение интегральной антиоксидантной способности растительного сырья и пищевых продуктов", который расположен в категории "". Всё это находится в предмете "биология" из , которые можно найти в файловом архиве . Не смотря на прямую связь этого архива с , его также можно найти и в других разделах. Архив можно найти в разделе "остальное", в предмете "биология и химия" в общих файлах.
Онлайн просмотр документа "12935"
Текст 2 страницы из документа "12935"
Для сравнения антиоксидантной активности различных восстановителей, их смесей и реальных объектов целесообразно выражать эту величину количеством вещества-стандарта, как принято при определении многих известных суммарных показателей. В качестве вещества-стандарта при определении АОА предложено использовать аскорбиновую кислоту (АК), поскольку установлено, что она по антиоксидантной способности занимает промежуточное положение среди изучаемых восстановителей.
Для подтверждения суммарного характера определяемой величины антиоксидантной активности изучено влияние модельных смесей, содержащих восстановители в различных соотношениях на индикаторную систему Fe(III)/Fe(II)−о-фенантролин. Расчет теоретической величины АОА, в пересчете на вещество-стандарт, проводили по уравнениям количественного соответствия, показывающим связь между количеством вещества-стандарта и восстановителя в условиях равной антиоксидантной активности. Экспериментальные значения АОА рассчитывали, подставляя величину аналитического сигнала модельной смеси в усредненное уравнение регрессии зависимости аналитического сигнала от количества аскорбиновой кислоты. Результаты анализа модельных смесей представлены в таблице 2.
Как видно из таблицы 2, экспериментально полученные и теоретически рассчитанные величины АОА хорошо согласуются. Несколько завышенные результаты для моделей, содержащих аскорбиновую кислоту, вероятно, можно объяснить проявлением ею синергетических свойств. Полученные данные показывают, что определяемая величина – антиоксидантная активность – результат совместного действия всех присутствующих в модельной смеси восстановителей.
Таким образом, определяемый показатель является интегральным и индикаторная система Fe(III)/Fe(II)−о-фенантролин может быть использована при разработке способа оценки суммарной антиоксидантной активности растительного сырья и пищевых продуктов.
Таблица 2 – Результаты анализа модельных смесей (τ = 60 мин)
(n = 6, P = 0,95)
| Количество компонентов в смеси, мкг | Теоретическое значение АОА, мкг АК | Экспериментальное значение АОА, мкг АК | ||||||||||||||
| введено | в пересчете на АК | |||||||||||||||
| АК | танин | рутин | кверцетин | цистеин | АК | танин | рутин | кверцетин | цистеин | |||||||
| − | 20 | 20 | 20 | − | − | 14,66 | 9,85 | 35,59 | − | 60,10 | 59 5 | |||||
| − | 10 | 10 | 10 | − | − | 7,33 | 4,92 | 17,79 | − | 30,04 | 27 2 | |||||
| − | 50 | 10 | 10 | − | − | 36,65 | 4,92 | 17,79 | − | 59,36 | 52 5 | |||||
| − | 10 | 50 | 10 | − | − | 7,33 | 24,63 | 17,79 | − | 49,75 | 51 4 | |||||
| − | 10 | 10 | 50 | − | − | 7,33 | 4,92 | 89,02 | − | 101,27 | 98 8 | |||||
| − | 30 | 10 | 10 | − | − | 21,99 | 4,92 | 17,79 | − | 44,70 | 38 6 | |||||
| − | 10 | 30 | 30 | − | − | 7,33 | 14,78 | 3,41 | − | 75,52 | 77 9 | |||||
| 20 | 20 | 20 | 20 | − | 20 | 14,66 | 9,85 | 35,59 | − | 80,10 | 97 9 | |||||
| 50 | 10 | 10 | 10 | − | 50 | 7,33 | 4,92 | 17,79 | − | 80,04 | 85 10 | |||||
| 10 | 50 | 10 | 10 | − | 10 | 36,65 | 4,92 | 17,79 | − | 69,36 | 74 10 | |||||
| 10 | 10 | 50 | 10 | − | 10 | 7,33 | 24,63 | 17,79 | − | 59,75 | 80 11 | |||||
| 10 | 10 | 10 | 50 | − | 10 | 7,33 | 4,92 | 89,02 | − | 111,27 | 129 12 | |||||
| 30 | 30 | 10 | 10 | − | 30 | 21,99 | 4,92 | 17,79 | − | 74,70 | 81 8 | |||||
| 10 | 10 | 30 | 30 | − | 10 | 7,33 | 14,78 | 53,41 | − | 85,52 | 108 10 | |||||
| 20 | − | − | 10 | 20 | − | − | − | 4,60 | 24,60 | 22 2 | ||||||
| 10 | − | − | 20 | 10 | − | − | − | 9,23 | 19,23 | 17 2 | ||||||
2 Разработка способа оценки антиоксидантной способности природных объектов
Проведенные нами исследования показали, что аналитические сигналы в индикаторной системе Fe(III)/Fe(II)−о-фенантролин меняются во времени в зависимости от концентрации как индивидуальных восстановителей и их смесей, так и реальных объектов. Это приводит к необходимости строгого контроля времени эксперимента, что делает его длительным, трудоемким, ухудшаются также метрологические характеристики анализа. Устранение этого недостатка и стабилизация аналитического сигнала требуют оптимизации условий протекания реакции. Для решения поставленной задачи рассматривались различные способы воздействия на реакцию, протекающую в системе: повышение температуры и введение в реакционную смесь реагентов, традиционно используемых для связывания ионов Fe+3 (фторида натрия, ЭДТА).
Влияние перечисленных параметров изучалось на примере реакции окисления аскорбиновой кислоты, концентрацию которой варьировали в установленных пределах диапазона линейности.
Исследование влияния температуры проводили в интервале 25 –60 °С. Нижняя граница диапазона соответствует нормальным условиям протекания окислительно-восстановительных процессов, а верхняя обусловлена неустойчивостью аскорбиновой кислоты при температурах выше 50 °С. Установлено, что при выдерживании реакционной смеси в течение 60 мин при температуре ~ 50 °С наблюдается стабилизация аналитического сигнала во времени. Это, вероятно, связано с более быстрым и полным протеканием реакции. Однако при анализе в этих условиях реальных объектов существенной стабилизации аналитического сигнала не наблюдается.
Для стабилизации аналитического сигнала путем вывода из реакции не прореагировавших ионов Fe+3 в реакционную смесь вводили «стоп-реагент», в качестве которого применяли комплексообразователи: фторид натрия и ЭДТА в диапазоне концентраций 0,06 мМ – 0,01 М, 0,03 мМ – 0,1 мМ соответственно.
В ходе эксперимента установлено, что введение в реакционную систему более 0,05 мМ ЭДТА приводит к уменьшению во времени аналитического сигнала аскорбиновой кислоты и (или) фенольных антиоксидантов, используемых в качестве восстановителя. Введение ЭДТА в меньших концентрациях приводит к получению стабильного во времени аналитического сигнала для индивидуальных восстановителей, однако при этом не стабилизируется сигнал реальных объектов.
Для большинства изучаемых восстановителей введение в реакцию 0,01 М фторида натрия обеспечивает стабильный во времени аналитический сигнал (таблица 3). В случае танина и рутина наблюдается незначительное нарастание аналитического сигнала во времени.
В аналогичных условиях были получены стабильные во времени аналитические сигналы для реальных объектов, таких как сухое вино, пиво, соки, чай, экстракты лекарственных растений. Это позволило рекомендовать фторид натрия в качестве «стоп-реагента» при определении антиоксидантной активности растительного сырья и пищевых продуктов.
Таблица 3 – Зависимость аналитического сигнала восстановителя от его концентрации во времени в присутствии 0,01 М NaF *
| Восстановитель | τ, мин | Уравнения регрессии | R2 |
| Аскорбиновая кислота | 15 | y = 0,2619x – 0,0032 | 0,9996 |
| 30 | y = 0,2624x – 0,0035 | 0,9996 | |
| 60 | y = 0,2626x – 0,0024 | 0,9996 | |
| 90 | y = 0,2628x – 0,0032 | 0,9996 | |
| Танин | 15 | y = 0,1871x + 0,0012 | 0,9999 |
| 30 | y = 0,1917x + 0,0009 | 0,9997 | |
| 60 | y = 0,1963x + 0,0019 | 0,9998 | |
| 90 | y = 0,2013x + 0,0038 | 0,9997 | |
| Рутин | 15 | y = 0,1301x – 0,0012 | 0,9999 |
| 30 | y = 0,1327x – 0,0002 | 0,9999 | |
| 60 | y = 0,1384x – 0,0004 | 0,9999 | |
| 90 | y = 0,1425x + 0,0017 | 0,9999 | |
| Кверцетин | 15 | y = 0,3813x – 0,0012 | 0,9986 |
| 30 | y = 0,3818x – 0,0010 | 0,9982 | |
| 60 | y = 0,3826x – 0,0005 | 0,9983 | |
| 90 | y = 0,3837x – 0,0006 | 0,9983 | |
| Галловая кислота | 15 | y = 0,5537x + 0,0030 | 0,9987 |
| 30 | y = 0,5546x + 0,0032 | 0,9986 | |
| 60 | y = 0,5557x + 0,0036 | 0,9986 | |
| 90 | y = 0,5563x + 0,0026 | 0,9986 | |
| Гидрохинон | 15 | y = 0,3531x + 0,0049 | 0,9996 |
| 30 | y = 0,3535x + 0,0048 | 0,9997 | |
| 60 | y = 0,3541x + 0,0043 | 0,9996 | |
| 90 | y = 0,3543x + 0,0045 | 0,9997 | |
| Цистеин | 15 | y = 0,0993x – 0,0068 | 0,9976 |
| 30 | y = 0,0997x – 0,0066 | 0,9980 | |
| 60 | y = 0,1004x – 0,0065 | 0,9985 | |
| 90 | y = 0,1004x – 0,0065 | 0,9982 | |
| Глутатион | 15 | y = 0,0168x – 0,0021 | 0,9928 |
| 30 | y = 0,0168x – 0,0023 | 0,9930 | |
| 60 | y = 0,068x – 0,0024 | 0,9927 | |
| 90 | y = 0,0168x – 0,0023 | 0,9930 |
* «стоп-реагент» вводился в реакционную смесь через 60 мин после начала реакции
