Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 7

о х О о о О О О Е и О о ) У '3 0 8 ср о О с СО о х ОО, О О с с о о .о НО ОО Р со, о о с О' Ф Я о Я ао м х 7 "СО Д О Ф хс .о .с фЕ с сс сс о 'СО с О -О О Е с ОЮ Я О с'С х сц х .0 =л О О О Б ~ < а 'О я О О о О М о О о „с О О с Е о о О О с а Я с о .'Я о 'О О" 'О О О о яа О О с с о ОО х .СО о а Е1а с с Р. Н «О о Е с Я со \ с О о ОО х Я о М о О с с О Е с :х а ОЯ Ю ГО .о о ОО с Е Ю сс Е о ь ь с Я со со ь ь О с Я ь ОС о ь ь О с л Ю о Я Я Ю ОС Е а о, Ф ;с .с СО :Я 'Ой о о с ,с Но О ОО ОО ,! ОР со ь Г о с .с с 'о. о о о - "со а- о о а о о„ о о, с О со о < Ясс - о "тс Б с О с с о с Яя сЯ 'О Я ОО ~. й ОО о с~ а р о со с с о Ь Б о й О О О .О С о О Я Я и О БО о Еоа О '"., СС Е ОО Оа с] о со О СС о, Я.Я с Б4 о с .с о .с со Я 4" о Я .с сс о .с а О К "Оо с с о Р Д Б ср ЙФ о с ' "О "О Б об'ос а -О о ода Я .Я'а оо Я .о Я с о о о Я.с " Я о л 0 О о О Я о о ОО О О с 'О о -О о я О О.

с с б Ь .сБ Я .с ОС с О Я с \р' о о .о -о. 'с с О с "о )~ с,с О МО 'Я Б о СО х о Я сг о со ,Я О "' а Б 'сс О о Я О о о, й ОО О .О О ас, ББ аа 'ОО С сс Н о О С О О ОО х с о сд 'У с Ц :х ОО О Р..о о ор хо О о о о хс х с оБ ~ о Я о р о, С О ъ С ОС О О.с а Я .с р о о с с Е .о 'О с ОЯ 'О Е о д О с Е р Ю о Я с с -р — О с. а о с .о с с о о .с с с .с ь с с с о о с Е с ар р Ф о х Я а Я о с .с с З о я с о с о о =„ С с о Е ~„.

О с Б йс ха с О .с Ф с со с Е с ВЛг СЬиргег 8: Ти $7(сго Агир|())саг(ои о~0ХА Ьу РСЯ РСВ 1Ч ТНЕОЗСУ ННЬеп апьрПсу|пй а ьгпаП ьейигеп( о( а 1агйег 6ООЫе-ь1гапдей 0ХА 1егпр|асе, СЬе г|еягед Ыипс-епбее3 (гад- гпеп1ь йгь1 арреаг !п сйе (Ь|гд сус|е о( РСК. ТЬе агпрйй!ед ргодиссь Птеп ассигпи|асе ехропепйаПу, аь г|еьсг|Ьей |и Егрьайоп 1 (КООЬанопц е| а|. 1988): Хг = Х,(1 - УУь (1) ънЬеге Х, 'ь СЬе сору пигпЬег о( сЬе агпрййей ьес|иепсе айег и сус!еь о( аптрИсайоп, Х, 'ь сЬе |пйа| сору пиигЬег о( 1Ье сагйес ьегсиепсе |и сйе 0ХА сегпр!асе, апд У 'ь сЬе ейс!епсу о( аптрИсасюп рег сус|е.

ТЫ 5 егрлайоп оп! у аррйеь со сЬе ехропепйа! рЬаье о( агп рПйсайоп, ънйсЬ сои(!пиеа ип(6 опе о( (Ье согпропепь $п сйе геасйоп Ьесогпеь Пот|с|Ой, 1и а ьсапдагд РСьь соп1йп|пй -1 ип!1 о( (ЬегпюьсаЫе 0ХА ро|угпегаье, сЬе епхугпе Ьесогпеь! Оп|с(пц ънЬеп сЬе сору пигпЬег о( сйе сагеес ьее|иепсе арргоасЬеь 10сй А1 сЫь ро|пС, 1Ье ей!с|епсу о( СЬе геасСюп Вепрь ргес|р|гоиь|у апд СЬе ремис( по 1опйег ассиив|а(еь 3п а йеогпеСпс (аьйоп. Кпоън|па 1Ье йпа| у$ей о( агпрййед ргодисс ас сЬе епд о( сйе ехропеп6а! рЬаье, сЬе он ЖП ейс!епсу о( Сйе ехропегйа! геас|юп сап Ье са|си|а(ед Египт Ег|иа(|оп 2: У вЂ” ~ — ~ — 1 (2) ънЬеге У ь 1Ье ейс|епсу о( аитрИсаиоп рег сус|е, апд Х, — Х, ь сйе липсЬег о( агпр1йед гпо1еси|еь ргобисег3 $п и сус!еь о( ехропеп6а! агпрИса(юп.

Киоту!пе сйе !О!1!а! сору пигпЬег апд сЬе ейс|епсу о( сЬе геас6оп, сЬе пиптЬег о( сус|еь тес|и|сей со йепега1е СЬе дейгед пьипЬег о( сор!еь (е.ц., 10'ь) о( Сйе (атее( 0ХА сап Ье са|си1асее3 Ьу ьиЬь(|иг|юп !п Ег!Оайоп 1. Рог ехагпр|е, ънЬеп сйе ййа! пигпЬег о(сегпр!а1е гпо1еси|еь = 3 х 105 апд сйе е8чс|епсу о(сЬе ехропеп(И рЬаье о( СЬе геасйоп 'ь 70уа, Ег|иас|оп 1 Ьесогпеь 100 = 3 х 105 (1 + 0.7)". 5о!чпе (ог и у|е|гЬ 28.6. Тънепсуп!пе сус3еь о( ехропепйа$ аисрИсаиоп ънй1 1Ьегетоге Ье пает|ей со йепегасе 10гь пю|еси|еь о( ргойисс.

ТЬе е%с|еису о( РСК 'ь г3е1еитапес$ сйейу Ьу СЬе г!Оа|йу о( СЬе СЬеггпоь(аЫе 0МА ро|угпегаье. Весаиье о( сЬе деоптеспс пасите о( РСР, сйе репайу (ог ийпд ап $пейк|еп1 епауите ь ьенеге. Рог ехапьр|е, йпл ес а|. (1990) (оипг| (Ьас айег 20 сус|еь о( ехропепйа| агпрПйсасюп, (Ье агпоипс о( ргог$ис( напе6 онег а 200-(о!6 гапее дерепйпй оп сйе ро!Уптегаье иьег$. ТЫь |атее 6$6егепсе !п у|ей ънаь айпЬисед со а 2-со!6 дйуегепсе |п Пье ей|с$епсу ос (Ье епхугпеь г|иг|пц 1Ье ехропепйа! рЬаье о( 1Ье геасйоп. ТаЬ3е 8-2 ьйоънь (Ье сйеогейса! ииитЬег о( сус|еь тес|и| ге6 1о йепега(е 10 пе о( а 200-Ьр ргойисс |и РСйь гиии|од а( наиоьь ейк|епоеь апд соп(а|и|па сййегеп1 пигпЬегь о( |пйа| 1егпр|а1е 0ХАь.

ТАВЕЕ 8-2 ТЬеоге(|са1 ХиитЬег ос Сус1еь Вес|и!гее3 (ог РСВ ТАООЕТ5 1 10 100 1,000 10,000 100,000 Оериогед, нььгЬ реиигиюп, (гого Рашен)ьегь ег а!. (1997 (©5рио8ег-Ъег|а81 ). С(ошЬег о( РСО еуе|еь (гооодей геОшгеи га геаеЬ |О ай о( ОЬА (Ьаьеи оп а 2(ге-Ьр РСК ргаиоег) аг найооь ейеиоеу |енеи (У) аоа напою гаг8ет пшпиегь (гагхеи). 1.00 0.95 0.90 0.85 0.60 0.75 0.70 0.65 0.60 0.55 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 0.20 0.15 0.10 34 35 36 38 40 42 44 46 49 53 57 62 69 77 88 104 127 165 242 ЗО 32 ЗЗ 34 Зб 38 40 42 45 48 52 56 62 70 79 93 |14 !49 218 27 28 29 30 32 33 35 57 40 43 46 50 55 62 71 83 102 132 194 24 25 26 27 28 29 31 55 35 37 40 44 48 54 62 73 89 !|6 170 20 21 22 23 24 25 27 28 30 32 35 38 42 47 53 62 76 99 145 17 18 18 19 20 21 22 25 25 27 29 31 35 39 44 52 64 83 121 1пггог/исгйп 8.13 !и!11Ь1$ог8 А!ток! апугЬПпд ич!1 шЬ~Ь~г РСПк 1Е ргекепг ]п ехсеь.

ТЬе сопипоп си!рпь шс!ис[е ргосе[паяе К (ннЬ!сЬ, ]Е 8!чеп гЬе орроггип[гу, сап Педгаде гЬегтоягаЫе РХА ро1утегаке), рЬепо1, апг( ЕРТА. ОГЬег яиЬяяапсея йаГ сап саике ргоЫетя аге ютс Пегегдепяя (нЧеуапГ еГ а1. 1990), Ьерапп (Веиг!ег ег а1. 1990), ро!уатопк кисЬ ая крегписПпе (АЬо1сая ап6 ЕгИсПа 1993), Ьето81оЬ!и, апс1 де!-1оагПпд струек кисЬ ая ЬготорЬепо! Ыие ап6 ху!епе суапо! (Норре ес а1. 1992). !и тапу саяек, гЬе сЬ[еЕ сагье оЕ 1онн ог еггабс у[е!6к аге сопгапппапь ш гЬе гетр!асе Р)4А, чгЬПсЬ Ь ойеп гЬе оп1у сотропепг оЕ гЬе геасгюп киррПег1 Ъу гЬе шчея6дагог. Мапу ргоЫепь нн[гЬ РСП сап Ъе сигей я[тр1у Ьу с1еап[пд ир гЬе гетр!аге Ьу 6!а!уя!я, ейапо1 ргесгриа6оп, ехггас6оп ян!ЕЬ сЫого(огт, ап6/ог сЬготагодгарЬу гЬгоидЬ а яи[гаЫе геяп.

0ЕЫС[Ч ОГ ОИСОМЛСЕЕОТ!0Е РИМЕР РОВ ВАЛЬС РСВ ТЬе сЬ!еЕ доа! оЕ ргипег ПесПдп Ь кресфс/гу, ннЬПсЬ Ь асЬПечед оп1у янЬеп еасЬ гпетЪег оЕ а ргипег ра[г аппеа1к )п а кгаЫе ЕакЬюп го !ь гагдес яес)иепсе ш йе гетр!аге Р[я(А. Ая а ги1е оЕ йшпЪ, гЬе 1опдег ап оПдопис1еог!Пе, гЬе Ь(дЬег Пк крес[Егс[гу Еог а раг6си1аг гагдес. ТЬе ЕоПотчшд ег[иаг[опя сап Ъе окей го са1си1аге йе ргоЬаЬППу гЬаг а кес[иепсе ехасг!у сотр!етепгагу го а к!под оЕ пис!еогЫек ънП! оссиг Ьу сЬапсе ян!гЬПп а Р)я)А яеииепсе красе гЬас сопякь оЕ а гапг(от кег[иепсе оЕ пис1еогЫек (Хе[ ап6 Ел 1979).

К = [д/2] ' ' х [(1 — д)/2] гчЬеге К ь йе ехресге6 Егег[иепсу оЕ оссиггепсе нн!гЬПп йе яеоиепсе красе, д ь гЬе ге1а6че С+С сопсепг оЕ гЬе яес)иепсе красе, ап6 С, С, А, ап6 Т аге гЬе пшпЬег оЕ крее!Пс пис!еогЫея !п йе оПдопис!еогЫе. гог а г)оиЫе-яггапбес1 депоте оЕ я]хе /я/ ([п пис!еогЫея), йе ехресге6 пшпЬег (п) оЕ я[сея согпр!епгепгагу го гЬе оПдопис!еогЫе ь п = 2/я/К. ТЬеке еииа6опя ргесдсс гЬаг ап оПдопис!еогЫе оЕ 15 пис1еогЫея кчои16 Ье гергеяепгед оп1у опсе ]п а гпапипаПап депогпе чнЬеге /я/ ь -3.0 х 1О". !п гЬе саке оЕ а 16-гпег, гЬеге Ь оп1у опе сЬапсе [п сеп гЬаг а гурка1 пгапипаПап сРХА !гЪгагу (сотр!ех!гу -10' пис!еогЫея) илП Еоггшгоик!у сопса[п а яеииепсе гЬас ехасг!у тассЬея гЬаг оЕ йе оПдопис1еогЫе. Ночнечег, гЬеяе са1- си!а6опк аге Ьаяед оп йе аяяитрг!оп гЬас йе гПкгпЬи6оп оЕ пис!еогЫея !п тапипаПап депогпея ь гапдот.

ТЬ[к ь пос йе саяе Ьесагье оЕ Ь!ак ]п содоп гьаде (ЬагЬе 1985) ап6 Ьесаике а сПдтйсапг Егасгюп оЕ гЬе депогпе ь сотрояе6 оЕ герей[че РХА яес)иепсея ап6 депе Еатрдея (Ва[пя 1994). То пипип]хе ргоЫепь оЕ попярес[Пс аппеаПпд, П Ь ас!н[яаЫе Го гье оПдопис[еогЫе рптегк 1опдег йап гЬе ягагьг[саПу ЫсПсаге6 пипипшп. Весаияе оЕ гЬе ргекепсе оЕ гере66че е!етеппх по тоге гЬап 859о оЕ йе таттаПап депопге сап Ье гагдегед ргесЬе!у, ечеп Ъу ргппегя гЬаг аге 20 ог тоге пис!еогЫея (п 1епдй (Ва!пя 1994).

ВеЕоге яупгЬеяхшд ап о1гдопис1еоГЫе рптег, П ь рги6епГ Го ксап Р1Я)А с)аяаЬакея Го сЬес)с ГЬаГ ГЬе ргорокед яег)иепсе оссигя оп1у ш гЬе Пеягег1 депе ап6 пог [п несгогя, ипдеягед депек, ог гере66че е!етепь (е.д., р1еаяе яее МПкиЬаяЬП ег а[. 1994). ТаЪ!е 8-3 ргеяепгя шЕоппа6оп оп йе г)еядп оЕ оПдопис!еогЫе ргггпегк Еог Ъаяс РСП. РаПигея кнП! Ъе гаге !Е гЬе абчке ргочЫей ш гЬе гаЫе ь ЕоПоннед сагеЕиПу.

Бе]есЕ]щ РСВ Ргппегя Е.ьгеб Ье1онч аге кечега1 ягеря [пно!не6 [п йе ке1есбоп оЕ оПдопис1еогЫе рг!тегя: ° Апа!уя/я оЕг/ге гагдег депеЕогрогепйа! рПттд я!гея гЬаг аге Егее оЕ Ьопюро1упгепс !гас!я, Ьане по оЬчюик гепг[епсу го Еопп кесопдагу кггисгигея, аге пог ке!Е-сотр1епгепгагу, апд Ьаче по я!дп[йсапг Ьопю!оду ън(гЬ огЬег яеииепсея оп еПЬег яггапд оЕ гЬе гагдег депоте. 8.14 СЬаргег 8: Еп Исто Атр(ьуьсагьоп оЕ ОНА Ьу РСК ТАВОТЕ 8-3 Рппьег Оея(8пь Ргорег6ея оЕ ОВПопис!ео68ея ТЬа! 1пйиепсе !Ье ЕЕ!к(енсу оЕ Агпр!!Г!са6оп ОРПмАс 13еяьояь РкОРекгч Васе сопьро66оп 1.еп8сЬ Кереасеь( апг( яе1Е- сопьр1епьепсагу яеь!иепсея Сошр!еспепсапсу Ьепчееп шегпЬегя о!а рпгпег раи Ме1с(п8 сегпрег- асшея (Т ! 3' Тепшш Р1аеешепс оГ рппип8 яьея Рпгпегя Гос с1е8епегасе РСК Ману ехееПеиь геч(ечья оп рпаьег Пе68а аге ачаььаЫе, ьпс1ийих Р(есЬосьа аиь( Ньпея (19948 5Ьаггос(сь (19941, Р(е(сеиЪасЬ ес а!.

(19951, ВусЫСЕ (1995(,аиг(МаяиЬаяЬь(1996Ь Аь(йп8 геяпсноп яьея, ЬассепорЬа8е ргогпоьегя, апь( оьЬег яеь(иепсея Со СЬе 5' Ьегпнш оГ ргипегя ° Сгеа6оп оЕ 1!ага оЕ рояя!Ые ГогсчаггЕ апсГ гечегяе ргстегя Ъаяес( оп сЬе спсепа 1!ясе6 !п йе ТаЫе 8-3. Са!си!асе сЬе гпе!6пВ сеьпрегасигея оЕ сЬе о!18опис!еос!Пея Егоьп сЬе Еогпти1ае В!чеп ш йе ЕоБоьч!08 яесбоп оп Са!есь!ас(п8 Ме16п8 Тепьрегаснгея оЕ НуЬпь!я Ьессчееп О!18опис1еос!Пе Ргипегя апд ТЬеьг Таг8ег Вес!иепсея.

° Бе1ес6оп оЕ ьчеИ-тагсуьесЕ раггя оЦогьмаггГ апсГ гечегхе рПтеся (Ьас аге япп1аг ьп йеьг сопсепс оЕ б-РС апс! ипН Пепегасе ап апьр146ед ргос!исс оЕ сЬе арргорпасе яхе апс1 Ъаяе сопьроя6оп. ТЬе СС сопсепс оЕ Ьой рпгпегя апс! (Ье апьр11Еьес( ргос!исс 5Ьон16 Ье япп1аг апс( 1ье Ьегьчьееп 40оЬ апс! 60%. 6+С сопсепь яЬои1д Ъе Ьесьчееп 4098 апь( боло, ьч!й ап ечеи йясп!ьн6оп оЕ аП Еоиг Ьаяея а!оп8 йе 1еп8й оГ сЬе рпшег (е.8., по ро(уриппе (гасо ог ро!уруппнйпе стасо апь( по йпис!еосЫе гереа61. ТЬе ге8(оп оЕ сЬе рпшег сопьр1егпепсагу со сЬе сегпр!асе яЬоиЫ Ье 18-25 пис1еосЫея (он8. МегпЬегя оГ а рпшег раи яЬои!д пос гПЕГег ьн 1еп8сЬ Ьу >3 Ър.