Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - v.2 (Sambrook, Russell - Molecular cloning. Laboratory manual - 2001), страница 5

ТЬаг ваз Ьои 1 ггитИей асгогг а ртосеег йаг сои!Л та!се ипПтией питЬета о! соргег о! 5епеь а ртосегг иов !слави ая йе ро)утегаае сЬаш теас6оп !РСПЬ Оие Р Ыау етеи!ие 1аге ш йе ярлие 1 вая Ллт)щ го Мепйосто Соиигу в!гЬ а сЬетг« Ттгепй. 5Ье ваг аз!еер. Г5. 101 ваг ипйетапйп5. ! !г!сей п!еЬг Лтггги5; е»егу вееЬепй 1 вел! погй го ту саЬ>п аий яаг гг>П !ог йгее Ьоитз т йе сат, ту Ьапй ассар>ей, ту тгий !гее.

Ои йаг ратбси!аг игеЬг1 вая гИпЬ>пд аЬоиг ту рюроаей РЫА-зег!иепсгие ехрептепг. Агоипй С!ог>етйа1е, вЬеге Сай)оп«а !28 ЬгапсЬег погйвеат Вот Ег5. !01 аий вгпй ирвагй гЬтоиеЬ Йе соазга! гаи5е, 1 ЛесЫей йе Легетт та6оп воиЫ Ье тоге Ле!>и >гг е г); гиягеай о!'!игг опе о!геопис1ео6йе, 1 игей си о.... Ву Лгтесгглд опе о1>еопис)еог)йе го еасЬ зггапй о1' йе затр!е Р!9А гатдег, 1 соиЫ еег сотр1етепгату зег!иепс)ид ги!отта6оп аЬоиг Ьой «тапй. ТЬе ехрелтепг воиЫ гЬегеЬу солгат ап шгегпа! сои!го! аг по ехгта >исаи»ел>елее. А!гЬоиПЬ ТсПЛ пог теа1>ае Па! йаг тотелг, вггЬ йе ги о о!геопис!еоггйеь роВей ш ту ттй, Йегг Йгее-рпте еийз ро)игги5 аг еасЬ ойег ои арро«ге гггапйь оу йе геле !агапе!, 1 ваг оп гЬе ей5е ог ЛгзсонеппК йе ро1утетазе сЬаш геас6оп.

Уег вЬаг 1 тазг )е!г оп йе ейре оЕ вая йе толпили тоай. ТЬаг и>ПЬг йе агг ваз за!ига!ей виЬ тогггите апй йе осел! о)1!овепп5 Ьис)сеуе. ТЬе тесЫея вЬ!ге ьга1Ьг ро)сей!тот гЬе тоайЫе тго йе а!иге о1" ту Ьеай)фЬга... Ехпгей! ьгаггей типигпд роветг ог гво ш ту Ьеай: гво, )оиг, е>КЬг, !6, 32.... ! гететЬегей гаеие1у йаг гво го йе гепгЬ ровет и аз аЬоиг !000 апй йаг гЬете)оте гво го йе гвеп6ей вая аюипй а тП!гоп.

1згоррей йе сат ага гитпоиг о»ег1ооЬ>па Апйеггоп >аПеу. Ргот йе51оге сотратгтеиг1риПей а реисП апй рарет — 1 пеейей го сЬес)с ту са!си1аиопа 1елифег, ту з!ееру раггепдет, оЬ!ее!ей дгоеег!у го йе Ле1ау апй Йе ППЬг, Ьш 1 ехс1а!тей йаг 1 Ьай Лгзсонегей зотегЬ>и5 !апгагггс. Ыопр)ихней, йе вел! Ьас)с го Леер. 1 сои)>плей йаг гво го йе ги еибей ровег геаПу вая огег а тППол апй Лганье оп.

АЬоиг а тйе гаггЬег Лови йе гоай 1 геа!>еей ьотегЬ>ие еЬе аЬоиг йе ргойисгг оу йе теасгюп. Апет а !ев п>иий о!' ехгепйгие Йе рптета Лги-аос!аггие йе ехгепяоп ртойисга теЬуЬггйгагиц пев рптел апй ехгепсПп5 йет, Йе 1еиегЬ оу йе ехроиеибаПу ассити1а6ие РЫА ггтаийг воиЫ Ье!>хей Ьесаиае гЬегт елй воиЫ Ье йагр1у Ле)>пей Ьу Йе )1ге-рпте еий оу йе о1>аопис1еог1йе рп тел. 1соиЫ герПсаге 1атКег !таПтепгз о!" гЬе опегпа! РНА гатр!е Ьу Лез>5пгиП рптел йаг ЬуЬпйгхей !аггЬег арагг ол 1г. ТЬе Угарпепгг воиЫ а!вауз Ье йясгеге еи66ег оу а зресг~~ей 1еи5гЬ. 1 «оррей гЬе саг аеагп апй згатгей Лгавгие !глез оу РНА то)еси)еь ЬуЬггй)егпд апй ехгеийгпд, гЬе ргойисгг о) опе сус!е Ьесотгид йе гетр!атея )ог йе пехг ш а сЬаш теасбоп....

7епггфег ргогеггей абраги !тот йе ейде о)> з1еер. "Уои'те пот го>па го ЬеПеме Й>а 1 сювей. ПЬ шсгесПИер 5Ье те!изей го ваЬе ир. 1 ргосеейей го йе саЬ>п виЬоиг ТитгЬег «ора ТЬе Леер еий оу Апйетгоп >ГаПеу ы вЬеге йе гейвоой «атг апй вЬете йе "пе'ет-Ло-веПз" Ьаг>е а1вауа 1>»ей. Му Лггсогегу тайе те !ее! ая гЬоидЬ 1 вж аЬоиг го Ьгеагс оиг ор гЬаг оЫ гаПеу ггасП6оп.

1г вас Лгфси1г)>от те го ь!еер Йаг >ггдЬг в)гЬ ЛеохупЬопис!еаг ЬотЬг ехр)ойгп5 ш ту Ьгаш. К.В. Ма)!га ТЬе ипиаиа! огга!и оТ гЬе ро!угоегаае сЬаш геасггоп (5сЬ Ат. 262: 56 !1990) ). 8.4 С)гаргег 8: Гп 'нггго Агпр!г))саггои оГГт)нА Ьу РСгс д тхтМН!катя ОГ МятНООя — СЮ Н!!НС, Гтг4А яв)иОНСЬС, Ляв РС8 (ро!утегаяе сЬаш геас6оп — цпс1ег11ея а1тояг а11 оГ тодегп гпо1есц1аг Ъ)о1о8у.

ОЕ йеяе йгее, гЬе РСВ 1я гЬе о1деп )п гЬеогу ап6 гЬе пюяг чегяа6!е т ргастке. ТЬе тегЬо6 нная Вгяг ргорояед ш йе еаг1у 1970я Ьу Н. СЬоЫп6 КЬогапа ап6 Ьь соПеа8цея ая а яггате8у го!еяяеп йе !аЬог !пчо!че6 ш сЬеппса) яуптЬея!я оГ 8епея (К1ерре ег а!. 1971). ТЬе)г 16еая, Ьотчечег, г1и! пот яеегп ргас6саЪ|е ат а типе тнЬеп 8епея Ьа6 пот ует Ьееп яег)цепсей гЬегтоягаЫе ЕтХА ро1угпегаяея Ьаг) пот Ьееп г1еяспЬед, ап6 яуптЬеяя оЕ о118опцс1еот)г)е ргипегя тная тоге оГ ап агг йап а ясгепсе. Хог яцгрг)я)п81у, КЬогапая 16еая нчеге г!цкИу Гог8опеп. ТЬе гесЬпщце нная 1пберепбепг1у сопсе)не6 15 уеагв 1агег, 81чеп Ья ргеяепс пате, ап6 рцт 1пто ргасбсе Ьу Кагу Мц11ь ап6 сотног)сегя ас Се!ив Согрогабоп, ннЬо беяспЪе6 1п чаго атр)гТ1сагюп оГ я)п81е-сору татгпа1гап Вепея гып8 йе К1епонн Ега8гпепт оГ Еяс)геггс)г)а со!г' Е))н)А ро!угпегаяе 1 15а1)г) ег а1. 1985; Мц1!ь ег а1.

1986; Мц11ь апс) Ра1оопа 1987). Ечеп яо, РСК нноц16 ргоЬаЫу Ьане геша)пег) а с!ипьу 1аЬогагогу сцг|оя)гу тнеге Ь пот Еог гЬе 6!ясочегу оЕ гЬегтоягаЫе Гт))А ро1утегаяея (СЬ|еп ег а1. 1976; Ка1ейп ег а1. 1980). ТЬе гье оГ а тЬегтоятаЫе ро!утегаяе Ггот Т)гегпяия аг)иапсия (5араг еС а1. 1988) Вгеабу 1псгеаяег) ГЬе ейк)епсу оЕ РСК ап6 орепе6 йе г)оог со ацготаг!оп оГ йе тейой Ву гЬе еп6 оЕ йе 1980я, с1опш8 ъная по 1оп8ег гЬе оп1у янау го ьо!аге 8епея: Ет)н)А яег)цепс)п8 Ьад Ъееп гено1ц6оп)хек ап6 РСК Ьаг) Ъесоте а Гипбагпепга! согпегягопе оЕ Вепе6с ап6 гпо1есц1аг апа!уяея, 1п асЫ)г!оп го Ья я)тр1)с)гу, РСВ гв гоЬцяп ярееду, апд тоят оГ а11, Г)ех)Ые.

Ап епоппогь пшпЬег оГ напа6опя оп тЬе тегЬо6 Ьаче Ьееп беясПЬе6 апг) епбге )оцгпа!я ап6 Ьоо)ся Ьаче Ъееп бечоге6 го йе тесЬпнрле. 1п гЬ)я сЬаргег, ъне Вгяг 61ясцяя гЬе рагагпегегя гЬаг айесг РСВ. ап6 йеп ГцгпьЬ соге ргососо1в тЬас сап Ъе цяед го атр)1Еу Ет!)А Ега8тепгя апд сЬагасгепге гЬет. ТЬе Гггяг деяспр6оп оГ РСК вЂ” ргесье, 1асотс, апг) ипрегяопа! — нная рцЫьЬес) Ъу К!ерре ет а1. 1п 1971; а яесопг) — 1псагпа61пе, яе1Г-шбц!8еп6 ап6 ч!я!опагу — тная рцЫ!вЬе6 Ъу Кагу Мц!1)я ш 1990. РАКАМЕТЕКЬ ТНАТ АЕЕЕСТ РО1лМЕКАЬЕ СНА!)Ч КЕАСТ!О)й!а Е88епба! СогпропепГ8 оГ Ро!угпега8е С!та! п КеасГ!оп8 РСКя сои!а)п яенеп еяяеп6а! сотропепгя: ° А г)геггпоягаЫе ГтХА ро!угпегаяе го сагаГуае гегирГаге-гГереггггеггг яупг)яея!я оГ)9)нА.

А тн)г)е сЬоке оЕ епаугпея )я понн ачаг!аЫе йаг чагу 1п гЬе!г Вг1е!ау, еЕГк)епсу, ап6 аЬг1ау со яупйея!хе 1аг8е РХА рго6цсь !Гог 6)ясцяяюп, р!еаяе яее ТЬегтоягаЫе Р!)А Ро!утегаяея оп р. 8.5). Рог гоц6пе РСВя, Тад ро!угпегаяе (05 — 2.5 цть рег ягапбаг6 25 — 50-и! геасбоп) гетагпя йе епауте оЕ сЬо)се.

ТЬе ярес)Вс асг)н!гу оГ топ сопипегсга1 ргерагагюпя оГ Тат) ь -80,000 цп)гяггп8 оГ ргогеш. 5гапбаг6 РСКя гЬегеЕоге сопгаш 2 х 10и то 1О х 1Оь пю1есц1ея оЕ епгуте. 5)псе йе еЕГгс)епсу оГ рпгпег ехтепяюп тн|ГЬ Таг) ро!утегаяе ь 8епега1!у -0.7 1е.8., р1еаяе яее Се1Еап6 ап6 'ннЬ)ге 1990; ЬцЬгп ес а1. 1991), йе епаугпе Ьесогпея!шит)п8 тнЬеп 1А х 10и го 7 х 1Оь гпо!есц!ея оГ атр116е6 ргобисг Ьаче ассцтц1асе6 гп гЬе геастюп. ° А ра!т оГяугяг)ге!!с о!!8оиис!еог!гГея го рггте сягнГА яупг)гея!я. ОЕ гЬе гпапу Гассогя йат !пЕ)цепсе йе ейк)епсу апд ярес!ВсЬу оЕ йе агпр!16сагюп геас6оп, попе аге тоге сгцс)а) йап йе бея18п оГ о!18опцс!еог)6е ргипегя.

Сагерц! бея18п оГ ргппегя )я гегрлге6 го оЬга)п гЬе бея)ген ргодись ш ЬгВЬ уге!д, го яцрргеяя апгр!16сабоп оЕ цпянапге6 яес)цепсея, ап6 го Гася!пате яцЪ- яег)цепс татри1а6оп оГ тЬе атр!1Ггед ргосЬкг. С)чеп гЬаг рптегя яо Ьеач)!у 1пГ)цепсе йе 8.б С(таргет 8: 1п 'чттго Атр!тутсатйоп о) Р)!А Ьу РСЯ апс( йешр1айе. Мапу сошрап!ек (е.8., 1пчаго8еп, Рег(ййп-Е!шег, апт( 5йгайа8епе) яе!1 орййш!гег )6йя сопйатптп8 чаг!оик Ъийег тогши1ай!опк йЬай епаЫе тпчея68айогк йо с1ейегпнпе ор6тпа1 геасйюп сопс66опя йог рагйки1аг рпптег-йетпр1айе сошЬ!па6опк. Опсе йЬеяе сопс66опя Ьаче Ъееп Ыеп66те6, йЬе Ьеяй Ъийуег сап йЬеп Ъе ригсЬакет) !п чо!шпе ог аметпЫе6 тп тЬе 1аЬогайогу. А1йегпа6че!у, орйнпгхабоп сап Ъе асЬтечес1 Ьу сотпрапп8 йЬе у!е!т! оЪйатпес1 6отп а кепея от" йеп РСКя сопйатшп8 сопсепйгабопя от' М8тт гап8!п8 тготп 0.5 тпм йо 5.0 шм, тп 0.5 шм тпсгептепйы 5отпейнпея а яесопт( гонит( от' ор6тпгха6оп гк песеккагу иып8 а пагготчег гап8е ог" М8т', ш 0.2 тпм 1псгетпепйя.

!т" рокк(Ые, ргерага6опя от йетпр!айе РХА кЬои!6 пой сопйатп ы8- п66сапй апюипйк от" сЬе!ай(п8 а8епйк яисЬ ая ЕРТА (ейЬу!епесбапнпейейгаасейк асЫ) ог пе8- айгче1у сЬаг8ег( юпк, кисЬ ак РО 4, тчЬ!сЬ сап кет!иеяйег М8~~. ° Вийуег го бритт!ига!тт рН. Тг(к-С!, ад)ияйег) йо а рН Ьейтчееп 8.3 апт( 8.8 ай гоопт йешрегайиге, тк !пс1ит(ет( ш кйапт(аг6 РСКя ай а сопсепйга6оп от" !О тпм. тттЬеп шсиЪайет! ай 72"С (йЬе йетпрегайиге сопнпоп1у ике6 тот йЬе ехйепыоп рЬаяе от' РСК), йЬе рН от' йЬе геасбоп пнхйиге г(горя Ьу пюге йЬап а 1611 ип!й, ргот!исш8 а !тийуег тчЬояе рН !к -7.2. ° Мотюча!еттг сайоик.

5йапт)агг) РСК Ъийуег сопйатпя 50 шм КС! апг( ччог)ск тче1! тот атпр!т6са6оп от яе8шепйя от Р!к)А >500 Ьр ш 1еп8йЫ Кмя!п8 йЬе КС( сопсепйга6оп йо -70 — 100 тпм ойеп нпргочек йЬе у!е1с( от' яЬогйег РХА ке8шепйя. ° Тентр!аге РА(А. Тетпр!айе Р!к)А сон!а!шп8 йаг8ей яет)иепсея сап Ье ас!т!ед йо РСК (п я!п81е- ог 6оиЫе-я!ганс!ес( тогш. С!ояе6 стгси1аг Р!к(А йептр1айек аге атпр!ибер я(18Ьй!у 1ем е6)с!епй!у йЬап!1пеаг РЫАя.

А1йЬои8Ь йЬе я!ге от' йЬе йетпр!айе Р!к)А гк пой спбса1, атпр1гбсайюп от" кесртепсек ешЬесЫег( !п Ь!8Ь-шо1еси!аг-тче)8Ьй Р!к(А (>10 )сЬ) сап Ье ппргочес1 Ьу 618ея6п8 йЬе йетпр1айе тч(йЬ а геяйПс6оп епхуше йЬай т(оея пой с1еаче тч(йЬ!и йЬе йаг8ей яесйиепсе. ЪттЬеп ъчог(й)п8 ай тйк Ъеяй, РСК тес!шгея оп1у а к(п8(е сору от' а йаг8ей яес!пенсе ая йешр!айе (Ы ей а1. 1990).

Моте турка!1у, Ьоччечег, яечега! йЬоикапс( сортея от" йЬе йаг8ей РХА аге кеет(ет( !пйо йЬе геасбоп. !п йЬе саяе ог тпаннпа!!ап 8епопнс Р!к(А, ир йо 1.0 )т8 ог' Р!к)А гк и61гхе6 рег геасйюп, ап атпоипй йЬай сопйа)пк -3 х 1Ок сор)ея от' а ып8!е-сору аийояотпа! 8епе, ТЬе йур(- са1 аптоипйя о! уеаЫ, Ьасйепа!, апт) р1акшк) РХАя окей! рег геасйюп аге 10 п8, ! п8, апт! ! р8, гекрес6че1у.

Т!йегптоьйаЫе 0МА Ро!уотегаьеь ТЬеппояйаЫе РХА ро1утпегакея аге (яо!айес( йгош йччо с!акяея от" ог8ап(кшя: йЬе йЬеппорЬт1Ы апс1 ЬурегйЬегшорЬт1гс еиЪасйепа АгсЬаеЪасйепа, тчЬояе шок! аЬипйапй РХА ро1утпегаяек аге гетпшгксепй от Р(к)А ро1ушегаке 1 от" тпеяорЫ!к Ьасйепа; апг( йЬегпюрЬт1Ы АгсЬаеа, тчЬояе сЬ)ет" Р)к)А ро1ушегаяея Ъе1оп8 йо йЬе ро1ушегаяе а тапн1у. Т.

ат(иат!сия, ап ог8апткш 6ош йЬе йЬегтпорЫ1к АгсЬаеа тают!у (р1еаке яее Р(8иге 8-! апс) Вгос)с 1995а,Ь, 1997). Тат( ( Т. ат(иттттсик) РХА ро1ушегаке, йЬе 6гкй тко!ате4 апг( Ьеят ттпс(егяйоог! от' йЬе тЬеппокйаЫе РХА ро!утпегакея, гешашк йЬе тчог(гЬогяе ой РСК тп тпокй !аЬогайопея. ()итог!ипате!у, ргерагабопк от' Тттт) ро!ушегаяе яо!6 Ьу т!тКегепй шапитасйигегя аге пой ЫепйгсаЬ Уаг(ай(опя Ьаче Ъееп герогйет( тп йЬе у!е!г(, 1еп8йЬ, ап6 Втт(е!1йу от" йЬе атпр!66ед ргог!исй Вепегайед Ъу 616егепй сопнпегста! ргерага6опя от' Тттт) )п кйап6агт(!ге6 РСКк (е.8., р1еаяе яее Ыпх ей а!.

!990). 1й гк йЬегетоге нпрогйапй йо ор6ш(хе РСКк ечегу йнпе тот еасЬ петч ЬайсЬ от Тад. Рекрне йЬеке аппоуапсек, Тат) ро1утпегаке гешатпя йЬе епхуше от" сЬоке тот гоибпе ашр!!ттса6оп от' ыпа!1 яе8шепйя от' Р!к!А. Ноюечег, тчЬеп 8геайег Втт!е!1йу (к гег(и!тес), ччЬеп йЬе 1еп8йЬ от" йЬе йаг8ей атпр!коп ехсеес(я а тетч йЬоияап6 Ьакек, ог тчЬеп с1оп)п8 шК!к(А Ъу гечегяе тгапяспрйаке-РСК (КТ-РСК), ойЬег йЬегптояйаЫе епхутпек шау Ьаче ы8пт6сапй ас(чапйа8ея. ТЬе сЬо(се апюп8 епгушек кЬои1с( Ье с(ейегпнпет( Ьу йЬе ригроке от" йЬе ехрегнпепй. Рог ехашр1е, !т" йЬе 8оа1 Епггодисдои 8.7 г!СС)КЕ 8-1 ТЬе Вгос(г Ех ед!С!оп ТЬотаь О. Вгос)г (а писгоЫа! есо!оц(ьс ас сЬе С)п(чегь)су о( чч(ьсопь(п, Мадьоп) 'ь ьсапд)пц пехс со МиьЬгоогп 5рппц (и уеПои ыопе Ыацопа! Раг(г, )ипе 23, ) 967. Т. адиас(сиь ьсга(и УТ-1 счаь гьо)асед (гоп1 а ьагпр!е са(геп (и йе ргеиоиь уеаг (гот йе оисцоъч сЬаппе! (чеВЫе оп (Ье )е(с ыде о( йе рЬосо) Ьу Того Вгос(г апд Ь)ь ипдегцгадиа(е ьгидепг, Нидьоп Ггеехе.