ВКР: Изучение кинетики агрегации мутантов прионного белка Sup35

Оглавление:
Введение............................................................................................................................................................................2
Глава1. Обзор литературы
1.1. Общие сведения о процессе трансляции......................................................................................................3
1.2. Факторы терминации трансляции первого класса............................................................................4
1.3. Факторы терминации трансляции второго класса............................................................................5
1.4. Фактор [PSI⁺]...................................................................................................................................................6
Глава 2. Методы исследования белка sup35
2.1. Динамическое светорассеяние.......................................................................................................................7
2.2. Атомно-силовая микроскопия.......................................................................................................................9
2.3. Сканирующий электронный микроскоп.....................................................................................................11
2.4 Протоколы проведения экспериментов......................................................................................................13
2.4.1. Приготовление образцов для АСМ и СЭМ.........................................................................................13
2.4.2. Приготовление образцов для динамического светорассеяния..........................................................13
2.4.3. Фильтрация раствора с помощью центрикона....................................................................................14
2.4.4. Проведение эксперимента динамического светорассеяния..............................................................14
2.5. Метод обработки результатов, полученных в ходе динамического светорассеяния...............................15


Глава 3. Результаты и обсуждение
3.1 Исследование Sup35nmWildType (Дикий тип белка)..........................................................................................19
3.1.1. Исследование времени агрегации Sup35nmWT.........................................................................................19
3.1.2. Изучение кинетики агрегации Sup35nmWT в зависимости от температуры...........................................24
3.2. Исследование изображений, полученных на АСМ...............................................................................................29
3.3. Исследование Sup35nmMutationM0 (мутация М0) .............................................................................................32
3.3. Исследование Sup35nmMutationM1 (мутация М1)..............................................................................................35
3.4. Исследование Sup35nmMutationM2 (мутация М2)..............................................................................................37
3.5. Исследование Sup35nmMutationM3 (мутация М3) .............................................................................................39
3.6. Исследование Sup35nmMutationM3 (мутация М4) .............................................................................................41
3.7. Исследование Sup35nmMutationM3 (мутация М5) .............................................................................................43
3.8.. Исследование агрегатов, полученных в ходе эксперимента ...............................................................................46

Выводы...............................................................................................................................................................................49
Список литературы...........................................................................................................................................................50

Введение.


Прион — это белок с аномальной трёхмерной (третичной) структурой, способный катализироватьконформационное превращение гомологичного ему нормального клеточного белка в себе подобный. Прионами называют инфекционные или наследуемые факторы белковой природы, механизм распространения которых основан на их способности индуцировать конформационные изменения определённых полипептидов клетки. Белок в прионной изоформе меняет укладку такого же белка по “своему образу и подобию”, иными словами, играет роль пространственной матрицы. Фундаментальный интерес к этому феномену связан с тем, что он представляет собой новый способ копирования информации, “записанной” в трёхмерной структуре белка. Все известные прионы вызывают формирование амилоидов — белковых агрегатов, включающих плотно упакованные β-слои. Амилоиды представляют собой фибриллы, растущие на концах, а разлом фибриллы приводит к появлению четырёх растущих концов. Инкубационный период прионного заболевания определяется скоростью экспоненциального роста количества