ВКР: Видоидентификация и молекулярная паспортизация фитопатогенных грибов природно-трансгенных растений рода Linaria

Оглавление
Введение …………………………………………………………………………………………3
1.Обзор литературы……………………………………………………………………………...4
1.1.Т-ДНК агробактерий………………………………………………………………………...4
1.2.Agrobacterium tumefaciens…………………………………………………………………...5
1.3.Agrobacterium Rhizogenes…………………………………………………………………....5
1.4.Природно-трансгенные растения………………………………………………………….10
1.5.Linaria…………………………………………………………………………………….....11
1.6.Т-ДНК, вторичные метаболиты и устойчивость растений к болезням и вредителям………………………………………………………………………………………13
1.7.Фитопатогены………………………………………………………………………………15
1.8.Систематика фомоидных грибов…………………………………………………………..21
1.9.Молекулярные маркеры……………………………………………………………………24
1.9.1Внутренний транскрибируемый спейсер……………………………………………….26
1.9.2.Ген белка гистона………………………………………………………………………...27
1.9.3.Гены большой и малой рибосомальных субъединиц………………………………….27
1.9.4.Ген тубулина……………………………………………………………………………...28
1.9.5.Ген актина………………………………………………………………………………...28
1.9.6.Фактор элонгации трансляции………………………………………………………….28
1.10.Микросателлитные маркеры………………………………………………….................28
2.Материалы и методы…………………………………………………………………...........30
2.1.Материалы…………………………………………………………………………………30
2.2.Методы……………………………………………………………………………………..31
3.Результаты и обсуждение……………………………………………………………...........33
3.1.ДНК-штрихкодирование………………………………………………………………….33
3.2.Микросателлитные маркеры……………………………………………………………...37
Заключение…………………………………………………………………………………….41
Выводы……………………………………………...…………………………………………42
Список литературы…………………………………………………………….……………..43
Приложение…………………………………………………………………………………...46


Введение
В лаборатории генной и клеточной инженерии в последние годы активно изучают природно-трансгенные растения. Это виды, в геномах которых обнаружены последовательности, гомологичные Т-ДНК Agrobacteriumrhizogenes (называемые клеточной Т-ДНК или клТ-ДНК). Они описаны в пределах родов Nicotiana, Linaria и Ipomoea.
Хотя этот феномен обнаружен более 30 лет назад, до сих пор не известно, какие функции выполняет клТ-ДНК. В литературе обсуждают разные возможные ее функции, но наиболее вероятными считают влияние на регенерационный потенциал и устойчивость к фитопатогенам посредством изменения вторичного метаболизма.
Изучение роли клТ-ДНК в формировании устойчивости растения к болезням требует большой подготовительной работы, связанной с подбором генотипов растения, контрастных по наличию Т-ДНК, но с одинаковым генетическим фоном, а также фитопатогенов с различной вирулентностью в отношении растения.
Растения рода Linaria широко распространены в дикой природе, поэтому являются удобной моделью для изучения экологических функций клТ-ДНК. Однако, фитопатогены растений этого рода изучены не достаточно подробно, хотя уже сейчас известно, что среди них много фомоидных микромицетов. Соответственно, целью нашей работы была видоидентификация и молекулярная паспортизация изолятов фитопатогенов, выделенных с растений сем. Plantaginaceae и способных заражать льнянку.
В задачи работы входило:
- видоидентификация фитопатогенов при помощи ДНК-штрихкодирования с исползованием маркеров Beta-tubulin, ITS, LSU
- разработка микросателлитных маркеров для вида Boeremia exigua
- молекулярная паспортизация изолятов B