Курсовая работа: Роль экзосом и микровезикул в транспорте внеклеточных протеасом раковыми клетками человека

Оглавление
Введение
Цель работы
Задачи
Обзор литературы
Строение и функции протеасомы
Убиквитин-протеасомная система
Внеклеточные протеасомы
Механизмы транспорта внеклеточных протеасом
Материалы и методы
Работа с клетками эукариот в культуре
Молекулярно-биохимические методы
Статистический анализ
Результаты
Зависимость появления протеасом в среде культивирования клеток К562 от времени
Анализ присутствия протеасом во внеклеточных везикулах клеток человека линии К562
Анализ присутствия протеасом во внеклеточных везикулах клеток человека линии RPMI-8226
Влияние ингибиторов везикулярного транспорта на количество внеклеточных протеасом в кондиционируемой клетками RPMI-8226 среде.
Влияние ингибиторов везикулярного транспорта на количество внеклеточных протеасом в кондиционируемой К562 среде.
Обсуждение
Выводы
Список использованной литературы

Введение

Любая клетка нуждается в своевременной утилизации белков. Причины могут быть разные: белок может быть поврежден, может иметь неправильную третичную структуру, может пройти срок его жизни или исчезнуть необходимость в его функциях. Для антиген-презентирующих клеток для выполнения их специализированных функций также необходима возможность разрезания белков на пептиды.
Один из главных компонентов внутриклеточного протеолиза –протеасома – сложный белковый комплекс, состоящий из мультисубъединичной коровой частицы, обладающий пептидазной активностью, и различных регуляторных частиц. Протеасома способна как на АТФ- и убиквитин-зависимое расщепление белков, предназначенных к деградации убиквитин-протеасомной системой, так и на АТФ- и убиквитин-независимую деградацию денатурированных и некоторых других белков. Протеасома широко распространена среди всех существующих доменов жизни: сначала она была обнаружена у всех изученных эукариотических организмов, затем её существование было показано у архей и у бактерий порядка Actinomycetales (Maupin-Furlow et al., 2006). При этом её структура на удивление консервативна, что указывает на её исключительную значимость для жизнедеятельности клетки. Известно, что убиквитин-протеасомная система участвует в таких важных процессах, как регуляция клеточного цикла, репарация ДНК, выход клетки в дифференцировку и апоптоз (Irina M. Konstantinova et al., 2008).
В ходе исследований было показано, что протеасомы обнаруживаются не только внутри клеток, но и в плазме крови, альвеолярной и спинномозговой жидкостях, а также в среде культивирования клеток (Kulichkova et al., 2004; Mueller et al., 2012; Sixt et al., 2007; Wada et al., 1993). Такие протеасомы названы внеклеточными. Для протеасом плазмы крови используется отдельный термин: циркуляторные протеасомы