Автореферат (Изменения цитоархитектоники, метаболической активности нейронов и экспрессии эстрогеновых рецепторов в ядрах гипоталамуса и передне-базального комплекса мозга человека при старении, болезни Альцгеймера и сосудистом слабоумии), страница 4

1) У мужчин уровень тестостерона в плазме свозрастом уменьшается (Vermeulen, 1993). 2) Наличие андрогеновыхрецепторов показано в ВМЯ мужчин, тогда как в ВМЯ женщин ониотсутствуют (Fernandez-Guasti et al., 2000). В пользу идеи об участииандрогенов в регуляции активности нейронов ВМЯ свидетельствуют иэкспериментальныеданные,подтверждающиеописанныеполовыеивозрастные различия: 1) у старых самцов крыс снижение уровня тестостерона16в плазме связано с утратой окситоциновых рецепторов в ВМЯ (Arsenijevicand Tribollet, 1998), 2) активность ингибирующих ГАМК-эргическихнейронов ВМЯ у самцов крыс в два раза выше, чем у самок (Grattan andSelmanoff, 1997), 3) введение тестостерона уменьшает размеры ВМЯ усамцов ящериц (Wade et al., 1993), 4) при электрической стимуляции унейронов ВМЯ самцов крыс обнаружена специфическая чувствительность кметаболитам тестостерона (Suga and Sakuma, 1994). В дополнение к ужеотмеченнымнейронам,экспрессирующимОТрецепторыиГАМК(Arsenijevic and Tribollet, 1998; Grattan and Selmmanoff, 1997), возможнымимишенями для андрогенов в ВМЯ могут служить: 1) нейроны NPY(экспрессируют нейропептид Y), так как уровни NPY в ВМЯ самцов крысснижаютсяпослекастрацииивосстанавливаютсяпослевведениятестостерона (Sahu et al., 1989), 2) соматостатиновые нейроны, которые вВМЯ баранов колокализуются с андрогеновыми рецепторами (Herbison et al.,1996), 3) нейроны, экспрессирующие вазопрессиновые рецепторы V1, так каксвязывание с вазопрессиновыми рецепторами V1 происходит более активно вВМЯ самцов сибирских хомячков по сравнению с самками и снижаетсяпосле орхидэктомии (этот эффект нивелируется имплантацией мини-капсул,высвобождающих тестостерон (Dubois-Dauphin et al., 1994)).

Следуетотметить наличие полового диморфизма в ВМЯ животных, соответствующееполученным результатам у человека. Так, уровень экспрессии мРНКароматазы был выше у самцов крыс, чем у самок. У кастрированных самцовэти показатели были ниже, чем у интактных (Wagner and Morrell, 1996).Объём ВМЯ, а также количество в нём стержневых и шипиковых синапсовбыли больше у самцов крыс по сравнению с самками (Matsumoto and Arai,1983; Matsumoto and Arai, 1986). С другой стороны, по крайней мере частьэтих синапсов может быть ГАМК-эргическими, а, значит, ингибирующими(Grattan and Selmanoff, 1997; Matsumoto and Arai, 1986).17Размеры АГ и перикарионов нейронов ММЯ у контрольных случаеви пациентов с БоАлСогласно непараметрическому тесту Kruskall-Wallis при разделенииконтрольных случаев на четыре группы по возрасту (50 лет) и полу: молодыемужчины, молодые женщины (≤ 50 лет), пожилые мужчины, пожилыеженщины (> 50 лет) наблюдалась тенденция статистической достоверностидля площади АГ (F[3;21] = 2.998; p = 0.060) и перикарионов нейронов(F[3;21] = 2.476; p = 0.096).

Площадь АГ (p = 0.032) и размеры перикарионовнейронов (p = 0.025) оказались больше у женщин после менопаузы посравнению с молодыми женщинами. Достоверных различий размеров АГ(F[1;22] = 2.882; p = 0.105) и площади перикарионов (F[1;22] = 0.036; p =0.852) между пациентами с БоАл и пожилыми контрольными случаямиустановлено не было. Прииспользованиитесталинейнойрегрессиипоказано, что площадь АГ (r = 0.465; p = 0.034) и размеры перикарионовнейронов (r = 0.593; p = 0.005) достоверно увеличивались с возрастом вконтрольной группе. После разделения на мужчин и женщин это увеличениеоказалось типичным для женщин (для площади перикарионов (r = 0.773; p =0.005), для АГ(r = 562; p = 0.072)) и практически отсутствовало в группемужчин (для площади перикарионов (r = 0.426; p = 0.220), для размеров АГ (r= 0.414, p = 0.235)).

В группе с БоАл размеры нейронов положительнокоррелировали с генотипом APOE ε4 (r = 0.665; p = 0.036). У пожилыхконтрольных случаев отмечена тенденция к положительной взаимосвязимежду АГ и генотипом APOE ε4 (r = 0.866; p = 0.058). Таким образом,метаболическая активность нейронов ММЯ, оцениваемая по размерамаппарата Гольджи и перикарионов нейронов, значительно увеличивалась свозрастом у женщин и не изменялась у мужчин.

Аналогично предыдущимисследованиям в СОЯ (Ishunina et al., 1999; Ishunina and Swaab, 1999), этиданные предполагают ингибирующий эффект эстрогенов на нейроны ММЯ,так как уровень эстрогенов в плазме снижается у женщин во время и послеменопаузы, средний возраст которой составляет около 5018лет. Вподтверждение этой гипотезы в настоящей работе были установленыдостоверные различия площади АГ и размеров перикарионов нейронов уженщин старше 50 лет по сравнению с женщинами младшей возрастнойгруппы от 28 до 50 лет. Эстрогены опосредуют свои эффекты через дваосновных подтипа эстрогеновых рецепторов (ЭР и ЭР) (Enmark andGustafsson, 1999).

В клетках HeLa стимулирующие влияния эстрогеновобеспечиваются посредством ЭР, тогда как ингибирующие - через ЭР(Paech et al., 1997). Так как экспрессия ядерных ЭР в ММЯ у женщин свозрастом уменьшается (после менопаузы практически отсутствует), тоснижается и выраженность ингибирующих эффектов эстрогенов, чтозакономерно приведёт к увеличению метаболической активности нейроновММЯ. Принимая во внимание наличие в ММЯ человека люлиберина (Kubeket al., 1979; Parker et al., 1980), тогда как падение уровня эстрогенов уженщин после менопаузы сопровождается увеличением выработки этогорилизинг-фактора (Prelevic and Jacobs, 1997; Rance et al., 1990; Rance andYoung III WC, 1991), уместно предположить, что нейроны, продуцирующиелюлиберин, могут участвовать в описанной активизации ММЯ.Изменения цитоархитектоники и метаболической активности нейроновгипоталамуса и передне-базального мозга при сосудистом слабоумииПоданныммагнитно-резонансныхипозитрон-эмиссионныхисследований в мозге пациентов с сосудистой деменцией (СС) набдюдаетсяснижение общего уровня метаболизма, зависящее от локализации ираспространённости ишемических повреждений (Mielke et al., 1992; Sultzer etal., 1995; Capizzano et al., 2000; Herminghaus et al., 2003).

С помощьюуказанныхметодовизучениенебольшихструктурмозгаиспециализированных групп нейронов оказалось невозможным. Более того, влитературеотсутствовалисведенияовозможныхизмененияхвгипоталамических нейроэндокринных ядрах и холинэргических структурахпередне-базального мозга при этой патологии. Поэтому целью следующегоэтапа работы стало исследование метаболических изменений у пациентов с19СС в гипоталамических ядрах и передне-базальном мозге, отвечающих запознавательные процессы: в вертикальном ядре диагонального поля Брока(ВДБ), базальном ядре Мейнерта (БЯМ), туберомамиллярном ядре (ТМЯ) имедиальноммамиллярномядре(ММЯ).Дополнительныйинтереспредставляло изучение супраоптического (СОЯ) и инфундибулярного ядер(ИНФ), что связано с особенностями клинической симптоматики СС.Нарушения синтеза вазопрессина в СОЯ могут лежать в основе самогочастого клинического симптома СС – недержания мочи, а также иметьотношение к изменениям артериального давления у этой группы людей(Sachdev et al., 1999; Pohjasvaara et al., 1998).

Что касается инфундибулярногоядра, то это – один из основных источников гонадолиберина (ГнРГ) инейропептидов, участвующих в регуляции пищевого поведения у человека.ПриБоАлвэтомядреобнаруженгиперфосфорилированныйтау,составляющий основу нейрофибриллярных клубков (Swaab, 2003; Swaab,2004).Метаболические изменения в ВЯДБ, БЯМ, СОЯ, ИНФ, ТМЯ, ММЯизучались на материале мозга 11 пациентов с СС (5 мужчин и 6 женщин ввозрасте 76.92.8 лет) и соответствующих им по возрасту, полу идлительности фиксации 11 контрольных случаев (5 мужчин и 6 женщин,средний возраст которых 76.72.7 лет).

Дополнительно была отобрана группаиз 13 пациентов с БоАл (6 мужчин и 7 женщин, средний возраст которых75.72.8 лет) для сравнения метаболической активности нейронов междугруппами с СС и БоАл.Окрашивание аппарата Гольджи (АГ) носило характер гранулярного илокализовалось преимущественно вокруг ядра. Отчётливые различия винтенсивности иммунномечения АГ в вертикальном ядре диагональногополя Брока (ВЯДБ), супраоптического (СОЯ), инфундибулярного (ИНФ) итуберомамиллярного ядер у больных с сосудистой деменцией были отмеченыуже при микроскопическом исследовании при малом и большом увеличении.Наблюдалась меньшая интенсивность иммунореактивности АГ по сравнению20с контрольными случаями в СОЯ, ИНФ и ТМЯ, и более высокая – в ВЯДБ.Именно в этих структурах мозга с помощью IBAS осуществлялсяпоследующий количественный анализ размеров АГ и перикарионов нейроновв контрольной группе и у пациентов с СС.

Следует отметить, что нидлительность фиксации, ни промежуток между моментом смерти и взятиемматериала не влияли ни на интенсивность иммуномечения, ни наколичественные показатели (размер АГ и перикарионов нейронов). В группесБоАлиммуноцитохимическаяокраскаАГоцениваласьтолькополуколичественно, так как соответствующие измерения были произведеныв предыдущих работах (Salehi et al., 1994; Salehi et al., 1995; Swaab et al.,2002; Ishunina and Swaab, 2003; Ishunina et al., 2003, Lucassen et al., 1997).Количество гранул серебра, отражающих выраженность экспрессии мРНКвазопрессина, у большинства случаев с СС было снижено.В настоящей работе показано снижение метаболической активностинейроновсупраоптического(СОЯ),инфундибулярного(ИНФ)итуберомамиллярного (ТМЯ) ядер пациентов с СС.