Оглавление

Введение. 3
Глава 1. Обзор литературы.. 4
1.1. Кинетика ферментативных реакций. 4
1.1.1. Уравнение Михаэлиса-Ментен и условия его выполнения. 4
1.1.2. Расчет кинетических параметров реакции по уравнению
Михаэлиса-Ментен. 6
1.2. Двухсубстратные ферментативные процессы. 9
1.3. Механизмы взаимодействия пирокатехина с пероксидазой. 11
Глава 2. Экспериментальная часть. 14
2.1. Исходные вещества. 14
2.2. Посуда и аппаратура. 15
2.3. Методики эксперимента. 15
2.4. Обработка результатов измерений. 16
Глава 3. Обсуждение результатов. 18
3.1. Выбор индикаторной системы.. 18
3.2. Расчет кинетических параметров реакции пероксидазного окисления пирокатехина. 21
Выводы.. 27
Список литературы.. 28

Введение

Одной из актуальных задач современной аналитической химии является создание чувствительных и селективных способов определения пероксидов различного строения в объектах на основе матриц сложного состава, в том числе водонерастворимых. Для мониторинга и определения пероксидов предлагается большое число различных методик, среди которых важное место занимают различные сенсоры, в том числе твердофазные, основанные на формировании и измерении аналитического сигнала вне раствора, непосредственно в чувствительном слое, закрепленном на поверхности подложки. Ранее в лаборатории кинетических методов анализа кафедры аналитической химии химического факультета МГУ для определения пероксида водорода и ряда органических пероксидов был создан твердофазный спектрофотометрический биосенсор на основе фермента пероксидазы из корней хрена, иммобилизованной в пленке природного полимера хитозана.
Действие биосенсора основано на последовательном протекании двух реакций:

1. пероксидазном окислении о- или п- дигидроксифенольных соединений до хинонов соответствующего строения;
2. взаимодействии продукта окисления с хитозаном с образованием поглощающего в видимой и ближней УФ – областях индикаторного продукта реакции.

Проведение ферментативного процесса в водно-органической среде позволяет расширить круг определяемых соединений и объектов анализа. В рамках настоящей работы при условиях, оптимальных для работы оптического биосенсора, была исследована кинетика ферментативного окисления пирокатехина пероксидом водорода и органическими пероксидами. Основной целью данной курсовой работы является изучение влияния органических растворителей на кинетические параметры реакции окисления фенольных соединений пероксидами различного строения, катализируемого пероксидазой из корней хрена.
Ключевые слова: пероксидаза из корней хрена, пирокатехин, пероксид, поверхностно-активное вещество, кинетические параметры.