Автореферат (Перспективы применения методов молекулярной паразитологии в мониторинге за социально значимыми паразитозами)

На правах рукописиМорозов Евгений НиколаевичПЕРСПЕКТИВЫ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДОВ МОЛЕКУЛЯРНОЙПАРАЗИТОЛОГИИ В МОНИТОРИНГЕ ЗАСОЦИАЛЬНО ЗНАЧИМЫМИ ПАРАЗИТОЗАМИ03.02.11 – паразитологияАВТОРЕФЕРАТдиссертации на соискание ученой степенидоктора медицинских наукМОСКВА – 2018Работа выполнена в Институте медицинской паразитологии, тропических итрансмиссивных заболеваний им. Е.И.

Марциновского ФГАОУ ВО ПервыйМосковский государственный медицинский университет им. И.М.СеченоваМинздрава России (Сеченовский Университет).Научный консультант:академик РАН, д.м.н., профессорСергиев Владимир ПетровичОфициальные оппоненты:Бычков Виталий Григорьевич – доктор медицинских наук, профессор,заслуженный деятель науки Российской Федерации, ФГБОУ ВО Тюменскийгосударственный медицинский университет Минздрава России, профессоркафедры патологической анатомии и судебной медицины;Твердохлебова Татьяна Ивановна – доктор медицинских наук, Федеральноебюджетное учреждение науки Ростовский научно-исследовательский институтмикробиологии и паразитологии Роспотребнадзора, директор;Давидянц Владимир Ашотович – доктор биологических наук, профессор,Национальный институт здравоохранения Минздрава Республики Армения,советник, главный эпидемиолог Минздрава Республики Армения.Ведущая организация – ФГАОУ ВО «Российский университет дружбынародов» Минобрнауки России.Защита состоится «___» __________ 2018 г.

в _____ ч. на заседаниисовета диссертационного совета Д 280.040.15 при ФГАОУ ВО ПервыйМосковский государственный медицинский университет им. И.М.СеченоваМинздрава России (Сеченовский Университет) по адресу:119991, г. Москва, ул.Трубецкая, д.8,стр.2.С диссертацией можно ознакомиться в ЦНМБ ФГАОУ ВО ПервыйМосковский государственный медицинский университет имени И.М.Сеченова»Минздрава России (Сеченовский Университет) по адресу3: 119034, г.

Москва,Зубовский бульвар, д.37/1 и на сайте организации (http://www.sechenov.ru)Автореферат разослан «___» _____________ 2018 г.Ученый секретарь диссертационного советадоктор медицинских наук,профессорЛихтерман Болеслав Леонидович2ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫАктуальность проблемы.

В 90-х гг. ХХ века в России возникли«новые и возвращающиеся» социально опасные паразитозы, заражениевозбудителями которых происходит из-за контаминации среды обитаниячеловека. Возбудители некоторых паразитозов являются потенциальнымифакторамибиологическойугрозы,рядпаразитарныхболезнейассоциированы с ВИЧ-инфекцией. Наиболее частым патологическимпроявлением паразитозов служит иммуносупрессия.

В результате паразитозыспособствуют частому возникновению других инфекционных болезней инеинфекционных патологических состояний.Как и при других видах инфекционной патологии, эффективность истоимость лечения паразитарных болезней напрямую зависит от сроковвыявления заболевания и стадии развития патологического процесса.Всвязисэтимсуществуетнеобходимостьвсовременныхвысокочувствительных методах мониторинга за паразитарными болезнями(лабораторная диагностика паразитозов, мониторинг за лекарственнойустойчивостью, контроль эффективности лечения, поиск внутривидовыхразличий возбудителей паразитарной природы, определение таргетныхучастков в геномепаразитов, какобъект созданияперспективныхлекарственных средств нового поколения и др.).

Одним из возможных путейрешенияэтойпроблемыможетстатьприменениемолекулярно-биологических методов, например, полимеразной цепной реакции (ПЦР), внастоящеевремяограниченноприменяющейсявотечественнойпаразитологии.Полимеразная цепная реакция в настоящее время является одним изнаиболееэффективныхидентификациидиагностическихфрагментовгеномовинструментоввозбудителейиндикациииинфекционныхипаразитарных болезней, а также изучения целых геномов различных3патогенов паразитарной природы.

ПЦР в сравнении с традиционнымиметодамидиагностикиобладаетболеевысокойчувствительностью,специфичностью и позволяет проводить прямое определение присутствиягенетических фрагментов микроорганизма непосредственно в клиническомматериале без получения чистой культуры возбудителя, что сокращает срокиисследования и снижает трудозатраты. Такой подход является болееинформативным при диагностике внутриклеточных паразитов (малярия,лейшманиозы, токсоплазмоз и др.), плохо культивируемых на питательныхсредах.Различные варианты оборудования для ПЦР позволяют работать как вусловиях полной автоматизации процесса, так и при чередовании ручных иавтоматизированных этапов, что делает ПЦР доступной не только научнымучреждениям и крупным медицинским центрам, но и клиническим ипаразитологическим лабораториям системы Роспотребнадзора и первичногозвена здравоохранения.Широкое внедрение ПЦР в клиническую лабораторную диагностикутребует повышения уровня информированности медицинских работников отеоретических основах и возможностях современных методических подходови интерпретации результатов анализа.Внедрению молекулярной диагностики, индикации и идентификациифрагментовгеномовсуществованиепаразитоввпрактикуможетспособствоватьПЦР-лабораторийвкрупныхмедицинскихцентрах,осуществляющих ПЦР-диагностику возбудителей других инфекционныхболезней: вирусов гепатита, иммунодефицита человека, микоплазмы и др.Диагностикапаразитозовнетребуетспециальнойдополнительнойподготовки персонала, а имеющиеся стандартные наборы реактивов могутбыть дополнены лишь специально синтезированными праймерами.Цельдиссертационнойработы:Разработкаметодологиимониторинга за социально значимыми паразитозами с применением методовмолекулярной паразитологии.4Задачи исследований:Проанализировать1.молекулярно-биологическиесуществующиеметодикиивнастоящееоценитьвремявозможностиихприменения в медицинской паразитологии.Адаптировать и оптимизировать молекулярно-биологические2.методысучетомисключительноуникальнойвозбудителямстадийностиразвития,паразитарныхболезнейсвойственнойсразличнымпатогенезом, определяющим локализацию возбудителя в организме больногои в среде обитания человека, где наиболее вероятно обнаружение патогенаили фрагментов его генома.3.Оптимизироватьмолекулярно-биологическиеметодыдиагностики паразитозов с учетом разнообразия механизмов передачи ихвозбудителей.4.Сравнить эффективность молекулярно-биологических методов страдиционными методами диагностики паразитарных заболеваний.5.Разработатьметодическиеподходыкдифференциальнойиспользованияоптимизированныхдиагностике кишечных протозоозов.6.Оценитьвозможностьмолекулярно-биологических методик для лабораторной, клинической иэпидемиологической диагностики, а также для санитарной паразитологии.Научная новизна результатов исследований:1.Оцененавозможностьпримененияметодовмолекулярнойбиологии в мониторинге за паразитозами, вызываемыми различнымивозбудителямипротозойныхинфекций(малярия,лейшманиозы,криптоспоридиоз), гельминтными инвазиями и за комарами-переносчиками(дирофиляриозы), которая показала их значительную эффективность как вклинических, так и в популяционных исследованиях.52.Выявлены внутривидовые фено- и генотипические различиямалярийныхпаразитовP.определяющиеvivax,географическоепроисхождение случаев малярии и продолжительность инкубационногопериода в организме человека.3.Комплексом лабораторных методов (микроскопия, экспресс-тесты и ПЦР) подтверждена достоверность отсутствия источников инфекциив оздоровленных очагах малярии в Республике Таджикистан и в КыргызскойРеспублике, что подтвердило факт элиминации малярии в указанныхгосударствах согласно регламенту ВОЗ.4.водныхОптимизирована методика ПЦР-диагностики криптоспоридий вобъектахэффективностьокружающейисреды,чточувствительностьсущественноувеличилосанитарно-паразитологическихисследований, необходимых для определения гигиенических стандартов ибиологической безопасности.5.ПоказанавозможностьприменениядеятельностиРеференс-лабораторийисследованийсцельюприопределенияДНК-диагностикипроведениикачествавконтрольныхработыклинико-диагностических и паразитологических лабораторий.6.Разработаны методики ПЦР-диагностики единственного натерритории Российской Федерации трансмиссивного гельминтоза человека –дирофиляриоза, а также висцерального лейшманиоза в очагах РеспубликиУзбекистан.Практическая ценность работы:Внедрение в практику отечественного здравоохранения методовмолекулярнойпаразитологиипозволяетдостоверностьдиагностикисоциальнооптимизироватьзначимыхиповыситьпаразитозовиусовершенствовать мониторинг паразитологической ситуации в стране.Применение этих методов в Референс-лабораториях помогло сократитьтрудозатраты при контроле диагностики паразитозов, что наглядно доказала6работаРеференс-лабораторииНИИмедицинскойпаразитологииитропической медицины им.Е.И.Марциновского по диагностике малярии,лейшманиозов и филяриозов.Материалы исследований используются в виде лекций, семинарских ипрактических занятий:Кафедрой тропической медицины и паразитарных болезней•медико-профилактического факультета ГБОУ ВПО Первого МГМУ им.И.М.Сеченова Минздрава РФ по специальностям 03.02.11 - «паразитология»и 03.02.05 – «энтомология»;НИИ МПиТМ им.